生物化學王鏡巖第三章氨基酸課件

生物化學王鏡巖第三章氨基酸課件第一頁，共153頁。教學目標：

掌握氨基酸的結構特點與理化性質。1.從氨基酸的結構特點上理解氨基酸的分類和生物學特性。2.掌握氨基酸的理化性質，重點掌握兩性解離與等電點的含義、氨基酸參加的化學反應，特別是側鏈的反應。了解氨基酸的光譜學特征。第二頁，共153頁。第一節(jié)氨基酸

（Aminoacid,AA)

—蛋白質的構件分子

ProteinArchitecture

P123

第三頁，共153頁。一蛋白質的水解

酸水解:6mol/LHCL，4mol/LH2SO4回流煮沸20h。缺點：Trp破壞，Asn、Gln脫酰胺基，羥基氨基酸(SerThr)部分破壞。優(yōu)點：不消旋堿水解：5mol/LNaOH共煮10-20小時

缺點:消旋優(yōu)點：色氨酸穩(wěn)定酶水解：水解位點特異，得到多肽片段和AA的混合物，用于一級結構分析。第四頁，共153頁。

二.氨基酸的結構

(StructureofPr-AA)

1.20種氨基酸的結構通式:

不變部分可變部分第五頁，共153頁。非解離形式解離形式第六頁，共153頁。2.結構特點(1)除脯氨酸（亞氨基酸）外，這些天然氨基酸在結構上的共同特點為：

與羧基相鄰的α-碳原子上都有一個氨基，因而稱為α-氨基酸.

----C-C-C-C-COOH

γβα----C-C-C-C(NH2)-COOHα-氨基酸----C-C-C(NH2)-C-COOHβ-氨基酸----C-C(NH2)-C-C-COOHγ-氨基酸什么是α-氨基酸？第七頁，共153頁。(2)除甘氨酸外,其它所有氨基酸分子中的α-碳原子都為不對稱碳原子,所以：

A.除甘氨酸外都具有旋光性.除甘氨酸外，都具有D-型和L-型兩種立體異構體。B.除胱氨酸和酪氨酸外，其余AA都能溶于水。第八頁，共153頁。第九頁，共153頁。三.氨基酸的分類

AAandclassification

基本氨基酸:編碼的蛋白質氨基酸20種修飾（稀有）氨基酸：多肽合成后由基本aa經(jīng)酶促修飾而來。

存在于生物體內但不組成蛋白質(約150種)。蛋白質AA

Pr-AA非蛋白質AANon-PrAA第十頁，共153頁。（一）.基本20種氨基酸按照R基的化學結構分類第十一頁，共153頁。

1.脂肪族氨基酸（1）.中性氨基酸：含一氨基一羧基

GlyAlaValLeuIle

Ser、ThrCys、Met第十二頁，共153頁。第十三頁，共153頁。

含有羥基和硫的氨基酸

含羥基：Ser、Thr含硫：Cys、Met第十四頁，共153頁。含羥基的氨基酸：Ser、Thr第十五頁，共153頁。第十六頁，共153頁。

★

Ser的-OH（PKa=15),在生理條件下不解離,但它是一個極性基團，能與其它基團形成

氫鍵，具有重要的生理意義，常出現(xiàn)在大多數(shù)酶的活性中心。

★Thr中的-OH是仲醇，具有親水性。

★Ser和Thr的-OH往往與糖鏈相連，通過O-糖苷鍵形成糖蛋白。第十七頁，共153頁?！顲ys的R中含巰基-SH,具有兩個重要性質：（1）在較高pH值條件，巰基離解。（2）兩個Cys的巰基氧化生成二硫鍵，生成胱氨酸。Cys—s—s—Cys

胱氨酸共價鍵第十八頁，共153頁。★二硫鍵在蛋白質的結構中具有重要意義。Cys還常出現(xiàn)在酶的活性中心。★Met的R基中含有甲硫基（-S-CH3），硫原子有親核性，易發(fā)生極化，因此,在生物合成中是一種重要的甲基供體。

第十九頁，共153頁。

（2）酸性氨基酸及其酰胺:Asp、Glu、Gln、Asn第二十頁，共153頁。

酸性氨基酸及其酰胺:Asp、Glu、Gln、Asn第二十一頁，共153頁。（3）.含堿性基團:His、Lys、Arg第二十二頁，共153頁。

Lys側鏈氨基的pKa為10.53，生理條件下，Lys

側鏈帶有一個正電荷（NH3+）.

Arg是堿性最強的氨基酸，側鏈上的胍基是已知堿性最強的有機堿，pKa值為12.48，生理條件下完全質子化。

His含咪唑環(huán)，它是20種氨基酸中側鏈pK值最接近生理pH值的一種，在接近中性pH時，可離解平衡。它是在生理pH條件下唯一具有緩沖能力的氨基酸。

第二十三頁，共153頁。

(2).芳香族氨基酸：Phe、Tyr、Trp苯丙氨酸酪氨酸色氨酸第二十四頁，共153頁。

這三種氨基酸在紫外區(qū)280nm處有特殊吸收峰,蛋白質的紫外吸收主要來自這三種氨基酸,在280nm處,三種氨基酸的紫外吸收值

Trp＞Tyr＞PhePhe疏水性最強。Tyr的-OH磷酸化是一個十分普遍的調控機制，Tyr在較高pH值時，酚羥基離解。。第二十五頁，共153頁。

(3).雜環(huán)族氨基酸：Pro（His)

第二十六頁，共153頁。

Pro的α-亞氨基是環(huán)的一部分，因此具有特殊的剛性結構，一般出現(xiàn)在兩段α-螺旋之間的轉角處，Pro殘基所在的位置必然發(fā)生骨架方向的變化.

第二十七頁，共153頁。

（二）按照R基的極性性質(疏水性程度)分為：

第二十八頁，共153頁。

1.非極性氨基酸

在維持蛋白質的三維結構中起著重要作用（蛋白質的疏水核心）第二十九頁，共153頁。非極性氨基酸第三十頁，共153頁。

2.極性氨基酸:

這類氨基酸的側鏈都能與水形成氫鍵，因此很容易溶于水。第三十一頁，共153頁。（1）不帶電荷的極性氨基酸第三十二頁，共153頁。

（2）.帶負電荷的AA(酸性AA)第三十三頁，共153頁。

（3）.帶正電何的AA(堿性AA)第三十四頁，共153頁。*

膠原蛋白中的Lys側鏈氧化時能形成很強的分子間(內)交聯(lián)。*

Arg的胍基堿性很強，與NaOH相當。*

His是一個弱堿，是天然的緩沖劑，它往往存在于許多酶的活性中心。*非極性AA一般形成蛋白質的疏水核心，帶電荷的AA和極性AA位于表面。酶的活性中心：His、Ser、Cys第三十五頁，共153頁。（三）.根據(jù)人體能否自身合成必需氨基酸（定義）：

成年人：Thr、Val、Leu、Ile、Phe、Trp、Lys、Met半必須氨基酸：嬰兒期Arg和His非必需氨基酸：其余第三十六頁，共153頁。（二）非編碼的蛋白質氨基酸:______修飾氨基酸

蛋白質合成后，由基本氨基酸修飾而來。（1）4-羥脯氨酸

（2）5-羥賴氨酸（3）6-N-甲基賴氨酸

（4）г-羧基谷氨酸（5）Tyr的衍生物

第三十七頁，共153頁。第三十八頁，共153頁。（四）

非蛋白質氨基酸:

150多種，不組成蛋白質,但有生理功能.

（1）L-型α–氨基酸的衍生物

（2）D-型氨基酸

（3）β-、γ-、δ-氨基酸第三十九頁，共153頁。第四十頁，共153頁。第二節(jié).氨基酸的重要理化性質一.一般物理性質溶解性：在水中的溶解度差別很大，溶解于稀酸或稀堿，不溶解于有機溶劑。熔點：一般在200℃以上。味感：其味隨不同氨基酸有所不同。

第四十一頁，共153頁。（一）AA的光學活性和立體化學

1、氨基酸的構型★構型(configuration)

：具有相同的分子式和結構式，但原子在空間的分布排列不同?！?/p>

構象(conformation)：在化學結構和構型同的分子中，其原子由于單鍵的內旋轉而在空間形成的不同的構象體可以相互轉化。第四十二頁，共153頁。第四十三頁，共153頁。第四十四頁，共153頁?！?/p>

Thr和Ile有四種光學異構體分別是D-、L-、D-別-、L-別-氨基酸。

L-蘇氨酸(L-threonine)D-蘇氨酸(D-threonine)L-別-蘇氨酸(L-allo-threonine)D-別-蘇氨酸(D-allo-threonine第四十五頁，共153頁。

2、氨基酸的旋光性P143★旋光性：除甘氨酸外，α-氨基酸都具有旋光性，能使偏振光平面向左或向右旋轉，左旋者通常用（-）表示，右旋者用（+）表示。

★光學異構體：α-氨基酸中α-碳原子是一個不對稱碳原子，在空間的排列方式有兩種方式：D型和L型。

第四十六頁，共153頁?！锕鈱W異構體的化學性質和物理性質都是一樣。并且，構型與旋光方向沒有直接對應關系?！锇被岬男庑裕ǚ柡痛笮。┤Q于它的R基的性質，并與溶液的PH值有關。P144圖3-16第四十七頁，共153頁。

★比旋光度：單位濃度和單位長度下的旋光度。是旋光物質的特征物理常數(shù)。P3表3-4蛋白質中L型氨基酸的比旋光度★消旋作用：旋光性物質在化學反應中，只要其不對稱碳原子經(jīng)過對稱狀態(tài)的中間階段，即發(fā)生消旋作用，并轉變?yōu)镈-型和L-型的等當量混合物，稱消旋物。第四十八頁，共153頁。★外消旋物：D-型和L-型的等摩爾混合物★內消旋物：分子內消旋胱氨酸有三種立體異構體：

L-胱氨酸

D-胱氨酸內消旋胱氨酸

第四十九頁，共153頁。第五十頁，共153頁。（二）氨基酸的光譜性質可見光區(qū)：無吸收遠紫外和紅外區(qū)：都吸收近紫外區(qū)（200—400nm）：Tyr/Trp/Phe原因：-C=C-C=C-C=C-C=C-

1、紫外吸收光譜第五十一頁，共153頁。第五十二頁，共153頁?！锢野彼岬膍ax＝275nm，ε275=1.4×103

★苯丙氨酸的max＝257nm，257=2.0×102

★色氨酸的max＝280nm，280=5.6×103

蛋白質含量測定280nm第五十三頁，共153頁。第五十四頁，共153頁。２、核磁共振波譜自學第五十五頁，共153頁。二.氨基酸的酸堿性質（P130）

1.氨基酸的兼性離子形式1>三種現(xiàn)象：（1）晶體熔點高（2）不溶于非極性溶劑（3）介電常數(shù)高第五十六頁，共153頁。2>原因：（1）α-羧基的pK1=2.0，當pH>3.5，-COO-存在。

α-氨基的pK2=9.4，當pH<8.0時，α-NH+3存在。3.5<pH<8.0時，帶有相反電荷，氨基酸在水溶液中是以兩性離子離子形式存在。

第五十七頁，共153頁。（2）氨基酸晶體以離子晶格組成，維持晶格中質點的作用力是強的靜電吸引力。（3）水溶液中以兼性離子形式存在，是強極性分子，自然介電常數(shù)高。第五十八頁，共153頁。2.氨基酸的兩性解離和酸堿滴定曲線

KaHAA-+H+Ka=[H+][A-]/[HA]

pH=pKa+Lg([A-]／[HA]）=pKa+lg（[堿]/[酸]）

（1）pH>pKa時，[堿]>[酸]平衡右移pH=pKa時，[堿]=[酸]平衡pH<pKa時，[酸]>[堿]平衡左移（2）pKa就是HA50%解離[堿]=[酸]時溶液的pH值，Ka就是此時溶液的[H+]。（3）當[堿]=[酸]時溶液的pH值等于pKa第五十九頁，共153頁。

氨基酸在水溶液中既能起質子供體的作用

又能起質子受體的作用，因此是兩性電解質。

+H+H++第六十頁，共153頁。第六十一頁，共153頁。Gly的兩性解離和酸堿滴定曲線第六十二頁，共153頁。第六十三頁，共153頁。終點：100%Gly+,凈電荷：+1第一拐點：50%Gly+,50%Gly±平均凈電荷+0.5pH=pK1+lg[Gly±]/[Gly+]=pK1=2.34第二拐點：100%Gly±凈電荷為0,第三拐點：50%Gly±，50%Gly-凈電荷：-0.5pH=pK2+lg[Gly]/[Gly±]=pK2=9.6終點：100%Gly-,凈電荷：-1在pH2.34和pH9.60處，Gly具有緩沖能力。

第六十四頁，共153頁。

3.氨基酸的等電點

(1)氨基酸的等電點:

當溶液濃度為某一pH值時，氨基酸分子中所含的-NH3+和-COO-數(shù)目正好相等，即凈電荷為0。在電場中的氨基酸既不向正極也不向負極移動，此時溶液的pH值即為氨基酸的等電點，簡稱pI。等電點時，氨基酸處于兩性離子狀態(tài)。在某一試驗條件下，等電點是氨基酸的特征常數(shù)。

第六十五頁，共153頁。（2）等電點的計算

中性氨基酸：以Gly為例

K1=[Gly±][H+][Gly+]K2=[Gly-][H+][Gly±]pI時，[Gly+]=[Gly-][Gly±][H+]K1=[Gly±]K2[H+][H+]2=K1K2pH=（pK1+pK2）/2pI=（pK1+pK2）/2pI=（2.34+9.60）/2=5.97Gly第六十六頁，共153頁。對多氨基和多羧基氨基酸的解離解離原則：先解離a-COOH,隨后其他-COOH;然后解離a-NH3+，隨后其他a-NH3+pI等于兩性離子兩側的pK值得算術平均值。第六十七頁，共153頁。酸性氨基酸，以Asp為例：第六十八頁，共153頁。堿性氨基酸，以Lys為例：第六十九頁，共153頁。ApK1pK2pIpIpK3pK3pK2pK1加入的OH-mL數(shù)加入的OH-mL數(shù)pHpH一氨基二羧基AA的等電點計算：pI=2pK′1+pK′2二氨基一羧基AA的等電點計算：pI=2pK′2+pK′3谷氨酸（A）和賴氨酸（B）滴定曲線和等電點計算第七十頁，共153頁。第七十一頁，共153頁。第七十二頁，共153頁。中性氨基酸：pK1，為α—羧基的解離常數(shù)，pK2，為α—氨基的解離常數(shù)。pI=(pK1，+pK2，)/2酸性氨基酸：pK1，為α—羧基的解離常數(shù)，pK2，為側鏈羧基的解離常數(shù)。

pI=(pK1，+pK2，)/2堿性氨基酸：

pK2，為α—氨基的解離常數(shù)，pK3，為側鏈氨基的解離常數(shù)。pI=(pK2，+pK3，)/2等電點與該離子濃度無關，只決定于兩性離子兩側的Pka值。第七十三頁，共153頁。氨基酸的兩性解離性質及等電點（pI）

(pK′1)pH=pI

凈電荷=0pH<pI凈電荷為正pH>pI凈電荷為負CHRCOOHNH3+CHRCOONH2CHRCOONH3++H++

OH-+H++

OH-(pK′2)第七十四頁，共153頁。1.某氨基酸的等電點即為該氨基酸兩性離子兩邊的pK值和的一半。2.在氨基酸等電點以上任何pH，AA帶凈的負電荷，在電場中向陽極移動；在氨基酸等電點以下任何pH，AA帶凈的正電荷，在電場中向陰極移動。3.在一定pH范圍中，溶液的pH離AA等電點愈遠，AA帶凈電荷愈多。第七十五頁，共153頁。

實驗證明在等電點時，氨基酸主要以兩性離子形式存在，但也有少量的而且數(shù)量相等的正、負離子形式，還有極少量的中性分子。氨基酸在等電點狀態(tài)下，溶解度最小。

第七十六頁，共153頁。第七十七頁，共153頁。P133表3-3，氨基酸的解離常數(shù)和等電點①氨基酸的α-羧基pKa在1.8-2.7間，比典型羧基的pKa（如乙酸pKa為4.76）要小很多，并且，羧基的電離大于氨基。所以，一氨基一羧基的氨基酸的等電點都在pH6.0左右。②表中只有His的咪唑基側鏈在生理條件下不帶電荷，在生理條件下，只有His有緩沖能力。pH=pKa時，緩沖能力最大，等電點時緩沖能力最小。第七十八頁，共153頁。

三.氨基酸的化學性質

P135第七十九頁，共153頁。（一）α-氨基參加的反應1.與亞硝酸反應2.與?；噭┓磻?.烴基化反應4.形成Schiff’s堿反應5.脫氨基反應第八十頁，共153頁。

NH2OHRCHCOOH+HNO2RCHCOOH+H2O+N2VanSlyke法測氨基氮（體積）的基礎，N2中的1/2為氨基氮。含亞氨基的脯氨酸則不能與亞硝酸反應。

氨基酸定量和蛋白質水解程度的測定。1、與亞硝酸反應

第八十一頁，共153頁。

2?；磻?/p>

氨基酸的氨基與酰氯或酸酐在弱堿溶液中發(fā)生作用，氨基被酰基化。氨基中的氫被?；〈?。例如與酰化試劑丹磺酰氯（DNS-Cl，5—二甲基氨基萘-1-磺酰氯）的反應

第八十二頁，共153頁。第八十三頁，共153頁?！锏せ酋Ｂ瘸Ｓ糜诙嚯逆淣末端氨基酸的標記和微量氨基酸的定量測定。

N

Gly—Ala—Ser—Leu—PheC→→DNS—Gly—Ala—Ser—Leu—Phe

C

水解DNS—Gly、Ala、Ser、Leu、Phe

DNS-AA在紫外光激發(fā)后發(fā)黃色熒光.此外，蛋白質和多肽的人工合成中用作N末端α-NH2的保護劑。第八十四頁，共153頁。

芐氧甲酰氯、叔丁氧甲酰氯、

對-甲苯磺酰氯、鄰苯二甲酸酐第八十五頁，共153頁。

3.烷基化反應

★Sanger反應:與2.4一二硝基氟苯（DNFB）的反應。

（R’＝烴基）第八十六頁，共153頁?！锓磻攸c：A.為α-NH2的反應。B.氨基酸α-NH2的一個H原子可被烴基取代(鹵代烴)C.在弱堿性條件下，與DNFB發(fā)生芳環(huán)取代，生成二硝基苯氨基酸（DNP-氨基酸）?！飸茫悍蛛x得到的DNP-氨基酸（黃色），層析法鑒定。

第八十七頁，共153頁。

★Edman反應：

第八十八頁，共153頁。—N=C=S+N—CH—COOHHHRPITC—N—C—N—CH—COOHHHRSPTC-氨基酸—N—CHRSNCCOPTH-氨基酸pH8.3無水HF苯異硫氰酸酯PITC苯氨基硫甲酰衍生物苯乙內硫脲衍生物Edman降解法基礎第八十九頁，共153頁。+PITC弱堿中(400C)苯硫乙內酰脲(PTH-AA)(無水氫氟酸中)H+苯氨基硫甲酰氨基酸（PTC-氨基酸）（Edman反應）第九十頁，共153頁?！锓磻攸c：A.氨基酸與苯異硫氰酸酯(PITC)偶聯(lián)，生成苯氨基硫甲酰衍生物（PTC-AA），同時PTC-氨基酸環(huán)化生成苯乙內酰硫脲衍生物（PTH-氨基酸）。B.PTH-氨基酸（無色）可以用層析法分離鑒定?！飸茫?/p>

多肽、蛋白質序列分析多肽順序自動分析儀，靈敏度提高，能連續(xù)測定。一次可連續(xù)自動測定60個以上的氨基酸。第九十一頁，共153頁。4、與甲醛反應

第九十二頁，共153頁。第九十三頁，共153頁。第九十四頁，共153頁。★反應特點：A.為α-NH2的反應B.在常溫，中性條件，甲醛與α-NH2反應，生成羥甲基衍生物，釋放氫離子?！飸茫?/p>

氨基酸定量分析-甲醛滴定法（間接滴定）★為什么用甲醛滴定而不用酸堿直接滴定？第九十五頁，共153頁。

R’COOHR’COOC=O+H2NCHC=NCHHRHR醛氨基酸Schiff’s堿-H20+H205.生成西佛堿的反應（Schiff）

西佛堿是某些酶促反應的中間產物（如轉氨基反應的中間產物第九十六頁，共153頁。

6.熒光胺與α-NH2的反應：氨基酸與熒光胺反應生成有熒光的物質（λM=475)，根據(jù)熒光強度可用熒光分光光度計測定氨基酸的含量。第九十七頁，共153頁。

7.與5,5’-雙硫基-雙(2-硝基苯甲酸)反應-SH的反應。生成的硫代硝基苯甲酸在波長412nm處有最大吸收峰。測定細胞游離-SH的含量第九十八頁，共153頁。

8.脫氨基反應：

α-氨基酸在氨基酸氧化酶的作用下脫氨基轉變成酮酸。第九十九頁，共153頁。

α-羧基參加的反應P138

（1）成鹽、成酯反應:

成鹽：氨基酸與堿作用生成鹽，（為什么氨基酸的?；磻蛲榛磻枰趬A性溶液中進行？）。

成酯：α-羧基被醇酯化后，形成相應的酯。

第一百頁，共153頁。（2）成酰氯的反應

氨基被保護后，羧基可與二氯亞砜或五氯化磷反應，生成酰氯，使羧基活化，容易與另一氨基酸結合，在多肽的人工合成中常用。

（3）脫羧基反應在氨基酸脫羧酶的作用下，放出CO2生成相應的胺。第一百零一頁，共153頁。（二）α-羧基參加的反應1.成鹽或成酯反應2.成酰氯反應3.脫羧基反應4.疊氮反應P138第一百零二頁，共153頁。2、成酯

NH2

干燥，HCl

RCHCOOH+C2H5OH

回流

RCHCOOC2H5+H2ONH3·Cl

保護羧基1、與NaOH等形成鹽

為什么氨基酸的酰化反應或烷基化反應需要在堿性溶液中進行？

第一百零三頁，共153頁。

HN-保護基R—CH-COOH+PCl5

HN-保護基R—CH-COOCl+POCl3+HCl保護氨基活化羧基3、成酰氯的反應

氨基被保護后，羧基可與二氯亞砜或五氯化磷反應，生成酰氯，使羧基活化，容易與另一氨基酸結合，在多肽的人工合成中常用第一百零四頁，共153頁。3.脫羧基反應

NH2

脫羧酶R—CH-COOHR-CH2-NH2+CO2第一百零五頁，共153頁。

YNHONH2NH2

R—CH—C—OCH3

YNHOHNO2

R—CH—C—NHNH2

YNHO

R—CH—C—N-—N+N+2H2O

?；被峒柞?/p>

肼?；被ｋ迈；被／B氮肽的人工合成4、疊氮反應第一百零六頁，共153頁。（三）α-羧基和α-氨基都參加的反應1、與茚三酮反應2、成肽反應第一百零七頁，共153頁。

1.與茚三酮反應

茚三酮在弱酸中與α-氨基酸共熱，引起氨基酸的氧化脫氨、脫羧反應，最后，茚三酮與反應產物——氨和還原茚三酮脫水縮合生成紫色物質（λmax=570nm）。

Pro、Hy-Pro與茚三酮形成黃色化合物（λmax=440nm）第一百零八頁，共153頁。弱酸加熱第一百零九頁，共153頁。氨基酸與茚三酮反應+茚三酮(無色)NH3CO2RCHO+還原性茚三酮(弱酸)加熱3H20紫色化合物+2NH3+水合茚三酮還原性茚三酮第一百一十頁，共153頁?！锓磻攸c：A.該反應由NH2與COOH共同參與B.茚三酮是強氧化劑C.該反應非常靈敏，可在570nm測定吸光值D.測定范圍：0.5-50μg/mlE.脯氨酸與茚三酮直接生成黃色物質（不釋放NH3）★應用：A.氨基酸定量分析（先用層析法分離）B.氨基酸自動分析儀：用陽離子交換樹脂，將樣品中的氨基酸分離，自動定性定量，記錄結果。第一百一十一頁，共153頁。OH羥第一百一十二頁，共153頁。2、成肽反應第一百一十三頁，共153頁。（四）側鏈R基參加的反應1、Tyr2、堿性AA2、堿性AA3、帶硫AA第一百一十四頁，共153頁。側鏈R基參加的反應

—用于蛋白質的化學修飾

功能團有：

羥基、酚基、巰基(包括二硫鍵)、吲哚基、咪唑基、胍基、甲硫基、非α-氨基和非α-羧基等。第一百一十五頁，共153頁。Tyr酚基在3和5位上易發(fā)生親電取代反應，如碘化和硝化黃色反應一碘Tyr二碘Tyr一硝基Tyr二硝基Tyr第一百一十六頁，共153頁。Tyr+重氮苯磺酸橘黃色His（咪唑基）+重氮苯磺酸棕紅色Pauly反應第一百一十七頁，共153頁。35第一百一十八頁，共153頁。Arg側鏈胍基在堿性硼酸鈉緩沖液中與環(huán)己二酮生成縮合物。第一百一十九頁，共153頁。Trp側鏈吲哚基能被N-溴代琥珀酰亞胺氧化——分光光度法測定Trp含量第一百二十頁，共153頁。

Met側鏈上甲硫基：強親核基團與烴化試劑成锍鹽保護巰基解離為硫醇陰離子第一百二十一頁，共153頁。與二硫硝基苯甲酸發(fā)生硫醇-二硫化物交換pH8.0時412nm最大光吸收—分光光度法測定-SH第一百二十二頁，共153頁。Cys的巰基不穩(wěn)定，易被氧化成二硫鍵巰基在有痕量的金屬離子如：Cu2+，F(xiàn)e2+，Co2+或Mn2+時，易被氧化。硫醇的空氣氧化產物第一百二十三頁，共153頁。Cys中的二硫鍵可被氧化劑（過甲酸）以及還原劑（巰基化合物）打開?；腔彼釓娧趸瘎┻^甲酸巰基化合物還原劑及時保護第一百二十四頁，共153頁。DTT二硫蘇糖醇DTT（還原劑）打開二硫鍵第一百二十五頁，共153頁。.酪氨酸的酚基米倫反應（Millon）：酚基與HgNO3、HgNO2HNO3和HNO2作用產生白色的沉淀，加熱后呈紅色。.精氨酸的胍基

坂口反應（Sagakuchi）：胍基與α-萘酚，次溴（氯）酸鹽在氫氧化鈉溶液中生成紅色物質。第一百二十六頁，共153頁。

與5,5’-雙硫基-雙(2-硝基苯甲酸)反應-SH的反應：P13Cys的R側鏈上的-SH,在PH8.0和室溫下與5,5’-雙硫基-雙(2-硝基苯甲酸)反應生成含—SH的硫代硝基苯甲酸，（λmax=412nm）。測定細胞游離-SH的含量第一百二十七頁，共153頁。

苯環(huán)的黃色反應phe+少量濃H2SO4+濃HNO3黃色

TyrorTrp+濃HNO3黃色第一百二十八頁，共153頁。Folin一酚反應

+磷鉬酸

Tyr磷鎢酸

orTrp藍色（鉬藍與鎢藍混合物）第一百二十九頁，共153頁。

乙醛酸反應（紫色環(huán)反應）吲哚Trp+濃H2SO4-----紫色環(huán)

第一百三十頁，共153頁。六、氨基酸混合物的分析分離

——利用AA成分分配系數(shù)的差異（一）分配層析法的一般原理

第一百三十一頁，共153頁。

分配層析原理

層析系統(tǒng)有兩個相組成，一個是固定相，一個是流動相，混合物在層析系統(tǒng)中的分離決定于該混合物的組分在這兩相分配系數(shù)。分配定律：一種溶質在兩種一定的互不相溶的溶劑中分配，在一定溫度下達到平衡后，溶質在兩相中濃度比值為一常數(shù)，即分配系數(shù)。第一百三十二頁，共153頁。{層析系統(tǒng)固定相{流動相附著在固相上的液體固體第一百三十三頁，共153頁。

按兩相所處狀態(tài)分：流動相液體氣體固定相液體液液層析氣液層析固體液固層析氣固層析先決條件：分配系數(shù)有差異，差異越大，越容易分開。第一百三十四頁，共153頁。柱固定相裝于柱內紙固定相是液體，吸附在濾紙上，將樣品點在紙上，用流動相展開薄層將有適當粘度的固定相涂在薄板上薄膜與紙層析相似，紙用其它高分子有機吸附劑代替

按操作形式分：第一百三十五頁，共153頁。吸附固體吸附能力不同分配液體分配系數(shù)不同離子交換離子交換劑親和性不同凝膠多孔凝膠，通過速度不同親和固定相