臨床細(xì)菌培養(yǎng)鑒定流程及報(bào)告

關(guān)于臨床細(xì)菌培養(yǎng)鑒定流程及報(bào)告第一頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日思考題1、血培養(yǎng)陽(yáng)性結(jié)果如何分級(jí)報(bào)告？2、如何根據(jù)尿液菌落計(jì)數(shù)分析尿培養(yǎng)結(jié)果是感染還是污染？第二頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)室基本條件及設(shè)備

醫(yī)學(xué)微生物學(xué)檢驗(yàn)的基本技術(shù)臨床各種標(biāo)本的采集、分離培養(yǎng)及報(bào)告方式臨床常見細(xì)菌的分離鑒定第三頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日一、醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)室基本條件及設(shè)備細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室無菌實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)備第四頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室

細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室是細(xì)菌檢驗(yàn)的場(chǎng)所，在此完成標(biāo)本接種、孵育、分離、細(xì)菌鑒定和藥物敏感試驗(yàn)。所以細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室必須具備空氣及桌面消毒的條件，確保室內(nèi)相對(duì)無菌。如：足夠強(qiáng)度的紫外線燈管，耐酸堿的桌面等。第五頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

無菌實(shí)驗(yàn)室

無菌實(shí)驗(yàn)室僅限于制備、分裝無菌培養(yǎng)基的操作，不進(jìn)行有菌標(biāo)本的分離及其它操作。無菌室應(yīng)達(dá)到絕對(duì)無菌的標(biāo)準(zhǔn)，使用的前后均應(yīng)嚴(yán)格消毒滅菌（一般均為紫外線照射），僅限操作人員進(jìn)入，操作時(shí)應(yīng)嚴(yán)格關(guān)門。第六頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

基本設(shè)備

生物安全柜孵育溫箱（有條件的要有二氧化碳培養(yǎng)箱）顯微鏡接種器具冰箱、冰柜高壓滅菌設(shè)備火焰燈第七頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日二、醫(yī)學(xué)微生物學(xué)檢驗(yàn)的基本技術(shù)基本染色基本接種方法第八頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

基本染色

主要用于形態(tài)學(xué)檢查，因?yàn)樾螒B(tài)學(xué)檢查是鑒定細(xì)菌的重要手段，有助于細(xì)菌的初步鑒別，也是決定采用何種生化鑒定的重要提示。有時(shí)通過形態(tài)學(xué)檢查可得到初步診斷，如痰中的抗酸桿菌和泌尿生殖器官分泌物中的淋病柰瑟菌等，染色方法主要有革蘭氏染色法，抗酸染色法，鞭毛染色法，異染顆粒染色法，墨汁莢膜染色法等。

第九頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

基本接種方法

曲線劃線法（又稱連續(xù)劃線法）、分區(qū)劃線法、棋盤格劃線法、傾注平板法、斜面接種法、穿刺培養(yǎng)法、液體培養(yǎng)基接種法等。第十頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日三、臨床各種標(biāo)本的采集、分離培養(yǎng)及報(bào)告方式血（適用胸腹水）痰尿便膿第十一頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

（一）

血

當(dāng)微生物侵入血液迅速繁殖超出免疫系統(tǒng)清除這些微生物的能力時(shí)形成菌血癥或真菌血癥。

1.血培養(yǎng)中常見的分離菌革蘭氏陽(yáng)性菌金黃色葡萄球菌凝固酶陰性葡萄球菌肺炎鏈球菌A群B群鏈球菌腸球菌革蘭氏陰性菌大腸桿菌肺炎克雷伯菌陰溝腸桿菌產(chǎn)氣腸桿菌傷寒沙門菌綠膿桿菌鮑曼不動(dòng)桿菌第十二頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

2.標(biāo)本的采集與運(yùn)送⑴采血指征一般患者出現(xiàn)以下體癥時(shí)可作為采血的重要指征：發(fā)熱（≥38℃）或低溫（≤36℃）、寒戰(zhàn)、白細(xì)胞增多（計(jì)數(shù)＞10000×109/L），特別有“核左移”未成熟的或桿狀核白細(xì)胞，皮膚黏膜出血，昏迷，多器官衰竭，血壓降低，CRP升高及呼吸快，特殊患者（如血液病）出現(xiàn)粒細(xì)胞減少，（成熟的多形核細(xì)胞＜1000×109/L）血小板減少等，或同時(shí)具備上述幾種體征時(shí)而臨床可疑菌血癥應(yīng)采集血培養(yǎng)。新生兒菌血癥應(yīng)該增加尿液和腦脊液培養(yǎng)。最好在感染患者未進(jìn)行系統(tǒng)性抗菌藥物治療之前及時(shí)采集血培養(yǎng)。第十三頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

⑵采血時(shí)間及采血量采血培養(yǎng)應(yīng)該盡量在使用抗菌藥之前進(jìn)行，在24小時(shí)內(nèi)采集2～3份血培養(yǎng)（一次靜脈采血注入到多個(gè)培養(yǎng)瓶中應(yīng)視為單份血培養(yǎng)）。對(duì)間歇性寒戰(zhàn)或發(fā)熱應(yīng)在寒戰(zhàn)或體溫高峰到來之前0.5～1小時(shí)，采集血液，或于寒戰(zhàn)或發(fā)熱后1小時(shí)進(jìn)行。成人采血量8～10ml，兒童1～5ml。血液和肉湯之比1：5～1：10。

第十四頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

⑶標(biāo)本運(yùn)送采血后應(yīng)立即送檢，如不能立即送檢，需室溫保存或置35～37℃孵箱中，切勿冷藏。自動(dòng)化連續(xù)檢測(cè)系統(tǒng)雖有允許延遲上機(jī)檢測(cè)微生物生長(zhǎng)的原理，還是應(yīng)該盡量減少延遲上機(jī)時(shí)間。第十五頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日3.分離培養(yǎng)⑴血培養(yǎng)操作過程中應(yīng)注意生物安全防護(hù)。⑵血培養(yǎng)瓶處理傳統(tǒng)手工法血培養(yǎng)每天至少檢查一次，注意微生物生長(zhǎng)可視信號(hào)，應(yīng)無菌抽取培養(yǎng)物，涂片革蘭氏染色，選擇合適的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)種，同時(shí)做藥敏試驗(yàn)。⑶培養(yǎng)基的選擇一般革蘭氏陽(yáng)性菌選血瓊脂，革蘭氏陰性球菌選血瓊脂、巧克力瓊脂，革蘭氏陰性桿菌再加一個(gè)中國(guó)蘭或麥康凱培養(yǎng)基，真菌需轉(zhuǎn)種于真菌培養(yǎng)基。根據(jù)生長(zhǎng)情況，挑取純菌落進(jìn)行進(jìn)一步鑒定。第十六頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

4.結(jié)果報(bào)告

⑴陽(yáng)性結(jié)果報(bào)告

初級(jí)報(bào)告：陽(yáng)性血培養(yǎng)結(jié)果非常重要，應(yīng)該立即口頭報(bào)告給醫(yī)生，包括革蘭氏染色特性和形態(tài)，疑似何種菌等。同時(shí)記錄報(bào)告日期、時(shí)間、內(nèi)容以及接受報(bào)告人的姓名。

中級(jí)報(bào)告：報(bào)告直接抗菌藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果和細(xì)菌種屬的初步鑒定結(jié)果。

最終報(bào)告：報(bào)告細(xì)菌種屬名和標(biāo)準(zhǔn)抗菌藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果。⑵陰性結(jié)果報(bào)告普通血培養(yǎng)3天無菌生長(zhǎng)可報(bào)告為“72小時(shí)培養(yǎng)未見細(xì)菌生長(zhǎng)”但培養(yǎng)瓶要繼續(xù)培養(yǎng)至7天，如果發(fā)現(xiàn)有菌生長(zhǎng)，可發(fā)補(bǔ)充報(bào)告，某些特殊致病菌培養(yǎng)時(shí)間需延長(zhǎng)。第十七頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

（二）痰（即下呼吸道感染標(biāo)本）

臨床通常將正常人喉以上部位稱為上呼吸道，上呼吸道定植有大量的正常菌群，而氣管以下包括氣管、支氣管和肺泡稱下呼吸道，通常無菌。下呼吸道感染包括急性氣管～支氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作，支氣管擴(kuò)張繼發(fā)感染及肺實(shí)質(zhì)感染（肺炎、肺膿腫）等。病原體有細(xì)菌、病毒、衣原體、支原體、真菌、立克次氏體和原蟲等。下呼吸道感染者可有發(fā)熱、咳嗽和咳痰，痰呈膿性、粘稠或血性，是下呼吸道感染細(xì)菌檢查的主要標(biāo)本。細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)?zāi)苊鞔_感染病原，并提供有關(guān)抗菌藥物對(duì)分離菌的抗菌活性，有助于疾病的治療、流行病學(xué)調(diào)查研究和醫(yī)院感染的監(jiān)測(cè)。第十八頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日1.呼吸道標(biāo)本(痰)中常見的分離細(xì)菌

革蘭氏陽(yáng)性菌

草綠色鏈球菌，肺炎鏈球菌，化膿性鏈球菌表皮葡萄球菌,金黃色葡萄球菌,其他葡萄球菌微球菌，消化鏈球菌，消化球菌腸球菌真桿菌，丙酸桿菌，乳酸桿菌放線菌，奴卡苗，結(jié)核分枝桿菌白喉棒狀桿菌，類白喉棒狀桿菌念珠菌

革蘭氏陰性菌

韋榮球菌腦膜炎奈瑟菌，其他奈瑟菌卡他莫拉菌肺炎克雷伯菌及其他克雷伯菌沙雷菌，變形桿菌大腸埃希氏菌及其他腸桿菌科細(xì)菌百日咳鮑特菌，不動(dòng)桿菌銅綠假單胞菌及其他假單胞菌屬細(xì)菌嗜肺軍團(tuán)菌，氣單胞菌流感嗜血桿菌，付流感嗜血桿菌擬桿菌，梭桿菌

第十九頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.標(biāo)本采集及運(yùn)送

對(duì)可疑烈性呼吸道傳染病(如SARS，肺炭疽，肺鼠疫等)的患者采集痰標(biāo)本時(shí)必須注意生物安全防護(hù)。⑴自然咳痰法（最常用的方法）：以晨痰為佳，采集標(biāo)本前應(yīng)用清水、冷開水漱口或牙刷清潔口腔和牙齒。盡可能在使用抗菌藥物之前采集標(biāo)本，用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入無菌、清潔、干燥、不滲漏、不吸水的廣口帶蓋的容器中，標(biāo)本量要≥1ml。標(biāo)本要盡快送檢，不能及時(shí)送檢的標(biāo)本室溫保存≤2小時(shí)。

第二十頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

⑵支氣管鏡采集法、防污染毛刷采集法、環(huán)甲膜穿刺經(jīng)氣管吸引法、經(jīng)胸壁針穿刺吸引法和支氣管肺泡灌洗法，均由臨床醫(yī)生按照相應(yīng)操作規(guī)程采集，但必須注意所采集標(biāo)本盡可能避免咽喉部正常菌群的污染。⑶小兒取痰法：用彎壓舌板向后壓舌，將拭子伸入咽部，小兒經(jīng)壓舌刺激咳嗽時(shí)，可噴出肺部或氣管分泌物粘在拭子上送檢。

第二十一頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

⒊分離培養(yǎng)

(1)痰標(biāo)本培養(yǎng)前處理：不含或粘液很少的標(biāo)本可直接接種，遇有含大量粘液的標(biāo)本，應(yīng)加入等量的液化劑（如PH7.6的10g/L胰酶溶液等），放置35℃待充分液化再行接種。亦可加液化劑后攪拌混勻離心，取沉淀物接種。

⑵一般細(xì)菌分離培養(yǎng)：將處理后的痰標(biāo)本分別劃區(qū)接種于血平板(適用于分離肺炎鏈球菌和其他細(xì)菌),巧克力平板(適用于分離嗜血桿菌)和麥康凱/中國(guó)蘭平板。巧克力平板需置5%二氧化碳環(huán)境（無二氧化碳培養(yǎng)箱可用燭缸），35℃培養(yǎng)24小時(shí)后觀察菌落形態(tài)，涂片染色，挑取可疑純菌落，做進(jìn)一步鑒定。第二十二頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日⒋結(jié)果分析及報(bào)告

⑴結(jié)果分析痰及下呼吸道分泌物標(biāo)本易受到定植在上呼吸道的正常菌群污染。當(dāng)從送檢標(biāo)本中分離出多種細(xì)菌時(shí)，確定那一種分離細(xì)菌是引起下呼吸道感染的病原菌，這對(duì)臨床診斷與治療至關(guān)重要。當(dāng)在同一培養(yǎng)基上分離出1種以上的病原菌（復(fù)合菌）時(shí)，要結(jié)合患者的臨床癥狀，涂片染色鏡檢情況及患者近期細(xì)菌分離培養(yǎng)結(jié)果等，綜合判斷所分離的多種細(xì)菌中那一種細(xì)菌可能為致病菌，通常多為優(yōu)勢(shì)菌。當(dāng)分離的優(yōu)勢(shì)菌與涂片染色鏡檢結(jié)果一致時(shí)，要做藥敏試驗(yàn)。若分離培養(yǎng)結(jié)果與涂片染色鏡檢結(jié)果不一致時(shí)，可不進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，以免誤導(dǎo)，僅報(bào)告分離鑒定結(jié)果，由臨床大夫定奪是否重試。第二十三頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日⑵報(bào)告方式

由于檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告的時(shí)效性，下呼吸道標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果分為初步和最終結(jié)果報(bào)告。

▲初步報(bào)告：當(dāng)標(biāo)本涂片革蘭氏染色細(xì)胞學(xué)和細(xì)菌學(xué)鏡檢發(fā)現(xiàn)有臨床診斷意義的結(jié)果時(shí)，應(yīng)及時(shí)發(fā)出描述性的初步報(bào)告。

▲最終報(bào)告：鏡檢結(jié)果與分離培養(yǎng)結(jié)果相一致時(shí)，最終報(bào)告規(guī)范的細(xì)菌名稱和藥敏試驗(yàn)結(jié)果。若分離培養(yǎng)結(jié)果與鏡檢結(jié)果不一致時(shí)，僅報(bào)告分離鑒定結(jié)果，不做藥敏試驗(yàn)。若分離培養(yǎng)未檢出優(yōu)勢(shì)菌，可報(bào)“未培養(yǎng)出病原菌”。

第二十四頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

(三)尿

尿路感染是指尿道內(nèi)有大量微生物繁殖而引起的尿路炎癥。從腎臟排泌出來的尿液正常情況下是無菌的，如果在尿液中分離出細(xì)菌（排除污染因素）即為菌尿，同時(shí)伴有感染癥狀者稱為尿路感染。根據(jù)感染部位可分為上尿路感染（腎盂腎炎）及下尿路感染（膀胱炎），男性還可出現(xiàn)前列腺炎。第二十五頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日1.尿中常見分離菌

革蘭氏陽(yáng)性菌金黃色葡萄球菌血漿凝固酶陰性葡萄球菌腸球菌A群鏈球菌結(jié)核分支桿菌念珠菌革蘭陰性菌大腸埃希菌克雷伯菌屬變形桿菌屬淋病奈瑟氏菌腸桿菌屬假單胞菌屬羅威登菌屬沙雷菌屬不動(dòng)桿菌屬假單胞菌屬

第二十六頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

⒉標(biāo)本的采集與運(yùn)送

⑴尿培養(yǎng)檢查的臨床指征(有下列情況之一者，應(yīng)進(jìn)行尿培養(yǎng)）

a.有典型的尿路感染癥狀

b.有肉眼膿尿或血尿

c.尿常規(guī)白細(xì)胞和/或亞硝酸鹽陽(yáng)性

d.不明原因的發(fā)熱而無其他局部癥狀

e.留置導(dǎo)尿管的病人出現(xiàn)發(fā)熱

f.膀胱排空功能受損

g.泌尿系統(tǒng)疾病手術(shù)前第二十七頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日(2)標(biāo)本采集

a.清潔中段尿最好是晨尿，是臨床上最常留取尿標(biāo)本的方法

b.恥骨上膀胱穿刺法是評(píng)估膀胱內(nèi)細(xì)菌感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”

c.直接導(dǎo)尿法

d.小兒收集包

e.留置導(dǎo)尿第二十八頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

(3)標(biāo)本運(yùn)送標(biāo)本采集后應(yīng)及時(shí)送檢，2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行接種，否則應(yīng)置4～8℃冰箱保存，冷藏保存標(biāo)本時(shí)間不得超過8小時(shí)。第二十九頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

3．分離培養(yǎng)

⑴一般培養(yǎng):用定量接種環(huán)或無菌微量加樣器取尿液0.001ml或0.01ml(已使用抗生素患者),接種于血平板和麥康凱/中國(guó)蘭平板,不能定量時(shí)需用傾碟法記數(shù)，35～37℃培養(yǎng)18～24小時(shí)。

(2)特殊培養(yǎng):對(duì)臨床要求真菌、淋病奈瑟菌及結(jié)核菌等培養(yǎng)者，根據(jù)細(xì)菌所需條件接種相應(yīng)特殊培養(yǎng)基，放置相應(yīng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)。第三十頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日4．結(jié)果分析及報(bào)告

⑴結(jié)果分析:

一般單種細(xì)菌菌落數(shù)＞105cfu/ml可能為感染，需要進(jìn)一步鑒定和做藥敏試驗(yàn)；＜104cfu/ml可能為污染；在兩者之間需要根據(jù)病人的臨床表現(xiàn)進(jìn)行評(píng)估。對(duì)于導(dǎo)尿標(biāo)本＞103cfu/ml即為感染；恥骨上膀胱穿刺標(biāo)本任意數(shù)目即為感染，均需進(jìn)一步鑒定和做藥敏試驗(yàn)。第三十一頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

(2)報(bào)告方式

初步報(bào)告：在分離出細(xì)菌后，進(jìn)行革蘭氏染色，作出初步報(bào)告。

最終報(bào)告：有意義的陽(yáng)性結(jié)果報(bào)告，應(yīng)報(bào)告菌落計(jì)數(shù)、細(xì)菌種名及藥敏結(jié)果。

無意義的陽(yáng)性結(jié)果報(bào)告，報(bào)告菌落數(shù)、革蘭氏染色形態(tài)特征，并注明是純培養(yǎng)或是混合菌生長(zhǎng)。

陰性結(jié)果報(bào)告:應(yīng)報(bào)告無菌生長(zhǎng)和菌落計(jì)數(shù)＜1000cfu/ml或＜100cfu/ml尿。第三十二頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

（四）糞便

急性感染性腹瀉可以由細(xì)菌、病毒及原蟲引起，實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢查是細(xì)菌培養(yǎng)。每種感染性腹瀉的致病菌因其獨(dú)特的致病機(jī)理而引起一系列不同的典型癥狀，這些癥狀和詳細(xì)的病史能為診斷腹瀉疾病類型提供依據(jù)。因此，為了查找腹瀉病因，必須了解患者的病史即：癥狀、發(fā)病時(shí)間、年齡、旅游史、進(jìn)食情況和使用抗菌素情況。第三十三頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

致病菌能夠破壞宿主的防御系統(tǒng)，其致病機(jī)理是細(xì)菌產(chǎn)生毒素和對(duì)人體組織的侵襲性，值得注意的是有些細(xì)菌既具有侵襲性又能產(chǎn)生毒素。抗生素治療可以破壞宿主的正常菌群，導(dǎo)致某些細(xì)菌如艱難梭菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和念珠菌等過度生長(zhǎng)，也可引起腹瀉。沙門氏菌、志賀氏菌、氣單胞菌和鄰單胞菌應(yīng)作為實(shí)驗(yàn)室常規(guī)培養(yǎng)的主要腹瀉病原菌。第三十四頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日糞便標(biāo)本中常見的病原菌革蘭氏陽(yáng)性菌革蘭氏陰性菌

金黃色葡萄球菌傷寒及其他沙門菌厭氧鏈球菌種志賀菌屬結(jié)核分枝桿菌致病大暢埃希菌產(chǎn)氣莢膜梭菌弧菌屬菌種艱難梭菌氣單胞菌和鄰單胞菌小腸結(jié)腸炎耶爾森菌彎曲菌第三十五頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日2．標(biāo)本的采集與運(yùn)送

⑴糞便培養(yǎng)檢查的送檢指征(出現(xiàn)以下任何一種情況時(shí)建議做糞便培養(yǎng))a.糞便涂片鏡檢白細(xì)胞＞5/HPb.重癥腹瀉

c.體溫＞38.5℃d.血便

e.便中有膿液

f.未經(jīng)抗菌藥物治療的持續(xù)性腹瀉患者

g.來自疫區(qū)的患者第三十六頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

(2)標(biāo)本采集

a.標(biāo)本采集盡可能在發(fā)病早期和使用抗菌藥物治療之前

b.自然排便采集糞便標(biāo)本時(shí)，取有膿血、粘液、組織碎片部分的糞便，液體糞便則取絮狀物

c.直腸拭子采集糞便標(biāo)本，適用于排便困難患者和嬰幼兒

第三十七頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

⑶標(biāo)本運(yùn)送

a.糞便標(biāo)本應(yīng)盡快送檢，室溫條件下不能超過2小時(shí)。如不能及時(shí)送檢，可加入pH7.0的磷酸甘油或轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基，但不易超過24小時(shí)

b.直腸拭子采集的標(biāo)本必須置于適當(dāng)?shù)倪\(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)，轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)間不宜超過2小時(shí)

c.高度懷疑霍亂弧菌感染的標(biāo)本運(yùn)送必須符合特殊標(biāo)本的安全要求第三十八頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

3.分離培養(yǎng)與鏡檢糞便標(biāo)本直接鏡檢找到大量多核白細(xì)胞，提示侵襲性致病菌感染。如果腸道菌群紊亂，革蘭氏染色鏡檢結(jié)果可以提示是酵母菌還是葡萄球菌感染。第三十九頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

⑴腹瀉病原菌常規(guī)培養(yǎng)腹瀉病原菌種類繁多,實(shí)驗(yàn)室不可能對(duì)所有可能引起腹瀉的病原菌都進(jìn)行培養(yǎng)。為保證獲得較高的檢出率,可以對(duì)患者進(jìn)行腹瀉病原菌常規(guī)培養(yǎng),包括沙門氏菌、志賀氏菌、氣單胞菌、鄰單胞菌、弧菌，也包括可引起菌群失調(diào)的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和酵母菌。糞便標(biāo)本至少接種SS、中國(guó)蘭等培養(yǎng)基，必要時(shí)加血平板，培養(yǎng)18～24小時(shí)觀察結(jié)果。第四十頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日(2)腹瀉病原菌特殊培養(yǎng)根據(jù)所疑病原菌的生長(zhǎng)要求,選擇合適的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行分離培養(yǎng)鑒定。第四十一頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日4．結(jié)果分析及報(bào)告

陽(yáng)性結(jié)果：報(bào)告細(xì)菌種名和藥敏結(jié)果

陰性結(jié)果：常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)陰性應(yīng)報(bào)告“未檢出常規(guī)培養(yǎng)病原菌”特殊細(xì)菌培養(yǎng)陰性應(yīng)報(bào)告“相應(yīng)細(xì)菌陰性篩選結(jié)果”第四十二頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

（五）膿汁（病灶分泌物）微生物存在于周圍環(huán)鏡中，也存在于皮膚、粘膜表面，它們通過破損的皮膚或粘膜進(jìn)入通常無菌的組織引起感染，在一個(gè)或多個(gè)解剖部位形成小膿庖或包裹性膿腫。細(xì)菌和真菌（條件致病菌或致病菌）都可導(dǎo)致炎性滲出，滲出物由白細(xì)胞、入侵病原體、體液及纖維蛋白混合組成，即：膿汁。病毒感染很少出現(xiàn)膿性分泌物。第四十三頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日1．膿汁（含創(chuàng)傷分泌物）中常見的病原菌革蘭氏陽(yáng)性菌革蘭氏陰性菌葡萄球菌腸桿菌科細(xì)菌鏈球菌假單胞菌消化鏈球菌腐敗謝瓦納拉菌炭疽芽胞桿菌擬桿菌破傷風(fēng)芽胞梭菌梭桿菌產(chǎn)氣莢膜梭菌嗜血桿菌潰瘍棒狀桿菌產(chǎn)堿桿菌結(jié)核分枝桿菌無色桿菌放線菌、奴卡菌弧菌屬細(xì)菌念珠菌氣單胞菌第四十四頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

2．標(biāo)本采集與運(yùn)送⑴標(biāo)本采集與運(yùn)送膿腫包括閉合和開放性，即感染傷口、穿透?jìng)凇⑿g(shù)后傷口、燒傷及褥瘡等。在采集膿汁標(biāo)本前，用無菌生理鹽水擦去表面分泌物以避免污染。開放性傷口盡量抽吸深部膿液，閉合性膿腫抽吸膿腫壁。若需要厭氧培養(yǎng)，最好進(jìn)行床前接種迅速放入?yún)捬醮鼮楹谩?/p>

(2)標(biāo)本運(yùn)送膿汁或厭氧袋，室溫下2小時(shí)內(nèi)，最長(zhǎng)不超過24小時(shí)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室。

第四十五頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

3．分離培養(yǎng)與鏡檢膿汁標(biāo)本在培養(yǎng)的同時(shí)應(yīng)涂片做革蘭氏染色鏡檢，特殊情況或醫(yī)生要求，需行直接鏡檢及抗酸染色鏡檢。革蘭氏染色鏡檢有助于確定培養(yǎng)檢查范圍，評(píng)價(jià)標(biāo)本質(zhì)量。若見大量上皮細(xì)胞，則很可能為表皮污染，此時(shí)生長(zhǎng)的菌落意義較小；大量多形核白細(xì)胞或吞噬細(xì)胞則提示有感染存在。

第四十六頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

根據(jù)鏡檢檢查結(jié)果和/或感染部位，選擇接種合適的培養(yǎng)基。所有膿汁或滲出液標(biāo)本應(yīng)至少接種三種培養(yǎng)基。

⑴營(yíng)養(yǎng)血瓊脂培養(yǎng)基：分離葡萄球菌及鏈球菌等。有條件最好置含5～10%二氧化碳環(huán)境中，35～37℃孵育至少48小時(shí)。

(2)選擇培養(yǎng)基（麥康凱或伊紅美藍(lán)瓊脂等）：分離革蘭氏陰性桿菌。35～37℃孵育至少48小時(shí)。⑶營(yíng)養(yǎng)肉湯管：如巰基乙酸鹽肉湯或庖肉培養(yǎng)基，供需氧菌及厭氧菌生長(zhǎng)，35～37℃孵育，至少培養(yǎng)10天。第四十七頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日

4．結(jié)果分析及報(bào)告

陰性結(jié)果：培養(yǎng)48小時(shí)后，平皿和肉湯均無菌生長(zhǎng)，報(bào)告“48小時(shí)無菌生長(zhǎng)”。特殊原因，培養(yǎng)基放置更長(zhǎng)時(shí)間仍無菌生長(zhǎng)，報(bào)告為“X天無菌生長(zhǎng)”。

陽(yáng)性結(jié)果：根據(jù)鑒定及藥敏試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告。

第四十八頁(yè)，共五十四頁(yè)，編輯于2023年，星期日四、

臨床常見細(xì)菌的分離鑒定

1．形態(tài)與培養(yǎng)特性

⑴革蘭氏染色：在生長(zhǎng)有細(xì)菌的平皿上挑取可疑病原菌純菌落涂片,革蘭氏