動(dòng)物體細(xì)胞培養(yǎng)

動(dòng)物體細(xì)胞培養(yǎng)第1頁/共22頁一個(gè)大面積燒傷的病人，自體健康皮膚非常有限，使用其他人皮膚會(huì)產(chǎn)生排異反應(yīng)，那么怎么才能獲得大量的自體健康皮膚？體外培養(yǎng)人體細(xì)胞構(gòu)建的人造皮膚第2頁/共22頁動(dòng)物細(xì)胞工程

其中，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。動(dòng)物細(xì)胞工程

常用的技術(shù)手段動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞核移植動(dòng)物細(xì)胞融合生產(chǎn)單克隆抗體第3頁/共22頁離體的植物器官、組織、細(xì)胞脫分化愈傷組織再分化根芽植物體植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和植物細(xì)胞一樣嗎？第4頁/共22頁一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)概念：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體內(nèi)取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和增殖。第5頁/共22頁思考1、為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料？2、為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞？3、用什么方法對(duì)動(dòng)物組織進(jìn)行處理？說明動(dòng)物細(xì)胞間的物質(zhì)主要是什么成分？4、用胃蛋白酶可以嗎？5、用蛋白酶處理這一過程需要控制時(shí)間嗎？6、體外培養(yǎng)的細(xì)胞有何特點(diǎn)？第6頁/共22頁動(dòng)物細(xì)胞生長特性細(xì)胞貼壁：懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。

要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼附。細(xì)胞的接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。第7頁/共22頁細(xì)胞貼壁過程第8頁/共22頁繼續(xù)思考7、什么是原代培養(yǎng)？8、什么是傳代培養(yǎng)？9、傳代培養(yǎng)為什么要在10代以內(nèi)？10代以后會(huì)有什么現(xiàn)象？動(dòng)物組織用酶消化后的初次培養(yǎng)。將原代細(xì)胞重新用酶消化后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。一般來說，細(xì)胞在傳至10至50代的時(shí)候，增殖逐漸緩慢，以至于完全停止，這時(shí)，部分細(xì)胞的細(xì)胞核型可能會(huì)發(fā)生變化，獲得不死性。所以，正常細(xì)胞培養(yǎng)通常在10代以內(nèi)，以保持細(xì)胞正常的二倍體核型第9頁/共22頁動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程取動(dòng)物組織處理組織制成細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中（原代培養(yǎng)）傳代培養(yǎng)動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織剪碎、用膠原蛋白或是胰蛋白酶原代培養(yǎng)：動(dòng)物組織用酶消化后的初次培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：將原代細(xì)胞重新用酶消化后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。（10代左右）細(xì)胞貼壁生長、細(xì)胞接觸抑制第10頁/共22頁動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件1、無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素、動(dòng)物血清等）3、溫度和PH

溫度36.5+0.5度，pH7.2～7.44、氣體環(huán)境

O2和CO2（95%空氣和5%CO2

）第11頁/共22頁1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基有何獨(dú)特之處？2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個(gè)體？為什么？主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清等。獨(dú)特之處有：1、液體培養(yǎng)基2、成分中有動(dòng)物血清等不能，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多思考3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要經(jīng)過脫分化的過程嗎？一般而言，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不需要脫分化的過程概念：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體內(nèi)取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和增殖。第12頁/共22頁動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)概念理解概念：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體內(nèi)取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和增殖。原理：細(xì)胞增殖第13頁/共22頁動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用生產(chǎn)蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等健康細(xì)胞培養(yǎng)：如獲得大量自身的皮膚細(xì)胞，用于植皮。用于檢測(cè)有毒物質(zhì)用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)第14頁/共22頁練一練1、用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞

A.容易產(chǎn)生各種變異

B．具有更強(qiáng)的全能性

C.取材十分方便

D．分裂增殖的能力強(qiáng)D第15頁/共22頁小試牛刀1、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到細(xì)胞表面

時(shí)，細(xì)胞會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的

。此時(shí)，瓶壁上形成的細(xì)胞層數(shù)是

。要使貼壁的細(xì)胞從瓶壁上分離下來，需要用酶處理，可用的酶是

。相互接觸

接觸抑制單層（或一層）胰蛋白酶第16頁/共22頁2、隨著細(xì)胞傳代次數(shù)的增多，絕大部分細(xì)胞分裂停止，進(jìn)而出現(xiàn)

的現(xiàn)象；但極少數(shù)細(xì)胞可以連續(xù)增殖，其中有些細(xì)胞會(huì)因遺傳物質(zhì)發(fā)生改變而變成

細(xì)胞，該種細(xì)胞的黏著性

，細(xì)胞膜表面蛋白質(zhì)（糖蛋白）的量

。衰老甚至死亡不死性降低減少第17頁/共22頁3、現(xiàn)用某種大分子染料，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)，觀察到死細(xì)胞被染色，而活細(xì)胞不染色，原因是

。

4、檢查某種毒物是否能改變細(xì)胞染色體的數(shù)目，最好選用細(xì)胞分裂到

期的細(xì)胞用顯微鏡進(jìn)行觀察。由于活細(xì)胞的膜具有選擇透過性，大分子染料不能進(jìn)入活細(xì)胞內(nèi)，故活細(xì)胞不能著色（或由于死細(xì)胞的膜喪失了選擇透過性，大分子染料能夠進(jìn)入死細(xì)胞內(nèi)而著色）中第18頁/共22頁5、在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，通常在

條件下保存細(xì)胞。因?yàn)樵谶@種條件下，細(xì)胞中

的活性降低，細(xì)胞

的速率降低。6、給患者移植經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)形成的皮膚組織后，發(fā)生了排斥現(xiàn)象，這是因?yàn)闄C(jī)體把移植的皮膚組織當(dāng)作

進(jìn)行攻擊。冷凍（或超低溫、液氮）酶抗原新陳代謝第19頁/共22頁比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基成分培養(yǎng)結(jié)果細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)植物激素營養(yǎng)物質(zhì)動(dòng)物血清植物體或細(xì)胞產(chǎn)品大量產(chǎn)生細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較第20頁/共22頁2.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物細(xì)胞培養(yǎng)的重