果膠裂解酶試劑盒說明書

QQ1019057849QQ1019057849果膠裂解酶（pectinatelyases，PL）試劑盒說明書微量法100T/48S注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。測定意義：萊貿(mào)生物科技（上海）有限公司網(wǎng)址：QQ:1019057849微信：Kimmy520電話膠裂解酶（EC0）是果膠酶的重要組成部分，是一種能降解植物細(xì)胞壁，導(dǎo)致植物組織軟化甚至死亡的解聚酶，來源比較廣泛，主要來源于微生物，可用于果汁、果酒的澄清，提高水果出汁率，植物病毒的純化，紙漿的漂白和紡織品的生物精煉，在減少環(huán)境污染和降低能源消耗方面具有潛在的應(yīng)用價值。測定原理：萊貿(mào)生物科技（上海）有限公司網(wǎng)址：QQ:1019057849微信：Kimmy520電話膠裂解酶作用于果膠中的α-1,4糖苷鍵，生成在還原端C4和C5之間位置具有不飽和鍵的不飽和寡聚半乳糖醛酸，在235nm處有特征吸收峰。萊貿(mào)生物科技（上海）有限公司網(wǎng)址：QQ:1019057849微信：Kimmy520電話備實驗用品及儀器：天平、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、恒溫水浴鍋。試劑組成和配制：提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。試劑一：液體6mL×1瓶，4℃保存。試劑二：液體6mL×1瓶，4℃保存。試劑三：液體6mL×1瓶，4℃保存。酶液提?。?．組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。2．細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。3.培養(yǎng)液：直接測定。

測定操作表：分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長至235nm，蒸餾水調(diào)零。操作表對照管測定管試劑一（μL）120試劑二（μL）12040℃溫育3min酶液（μL）2020混勻，40℃反應(yīng)30min試劑三（μL）6060混勻于微量石英比色皿/96孔板（UV板）測定235nm處吸光值A(chǔ)，△A=A測定管-A對照管。酶活性計算公式：用微量石英比色皿測定的計算公式如下1.組織中PL活性（1）按照蛋白濃度計算酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每毫克蛋白每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。PL活性（nmol/min/mgprot）=△A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T=64.1×△A÷Cpr（2）按照樣本質(zhì)量計算酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每克組織每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。PL活性（nmol/min/g鮮重）=△A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T=64.1×△A÷W2.細(xì)菌、真菌PL活性酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每104個細(xì)胞每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。PL活性（nmol/min/104cell）=△A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T=64.1×△A÷細(xì)胞數(shù)量3.培養(yǎng)液PL活性酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。PL活性（nmol/min/mL）=△A÷（ε×d）×V反總÷V樣÷T=64.1×△Aε：不飽和半乳糖醛酸摩爾消光系數(shù)：5200L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.02mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，30min用96孔板測定的計算公式如下1.組織中PL活性（1）按照蛋白濃度計算酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每毫克蛋白每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。PL活性（nmol/min/mgprot）=△A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T=128.2×△A÷Cpr（2）按照樣本質(zhì)量計算酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每克組織每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。PL活性（nmol/min/g鮮重）=△A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T=128.2×△A÷W2.細(xì)菌、真菌PL活性酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每104個細(xì)胞每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。PL活性（nmol/min/104cell）=△A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T=128.2×△A÷細(xì)胞數(shù)量3.培養(yǎng)液PL活性酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。PL活性（nmol/min//mL）=△A÷（ε×d）×V反總÷V樣÷T=128.2×△Aε：不飽和半乳糖醛酸摩