第十一章抗生素類藥物分析演示文稿

第十一章抗生素類藥物分析演示文稿當(dāng)前1頁，總共35頁。優(yōu)選第十一章抗生素類藥物分析當(dāng)前2頁，總共35頁。

化學(xué)純度較低活性組分易發(fā)生變異穩(wěn)定性差3.來源4.抗生素的特點(diǎn)化學(xué)合成半合成生物合成（發(fā)酵）生產(chǎn)工藝復(fù)雜發(fā)酵過程不易控制，易受污染原因中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室一、概述當(dāng)前3頁，總共35頁。采用生物學(xué)法與物理化學(xué)法鑒別：理化方法、微生物法檢查：水分、異常毒性、熱原、細(xì)菌內(nèi)毒素、降壓物質(zhì)等含量/效價(jià)測(cè)定：

微生物法：與臨床療效吻合，靈敏度高，但操作復(fù)雜費(fèi)時(shí)；

理化方法：

準(zhǔn)確度與專屬性較高，且操作簡(jiǎn)便，但與臨床療效有偏差5.抗生素質(zhì)量分析一、概述中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室當(dāng)前4頁，總共35頁。1.

化學(xué)結(jié)構(gòu)包括青霉素類和頭孢菌素類青霉素類：6-APA為母核頭孢菌素類：7-ACA為母核中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室二、β–內(nèi)酰胺類當(dāng)前5頁，總共35頁。酸性較強(qiáng)（pKa2.5-2.8）臨床常用其堿金屬鹽（水溶性好）酸性(羧基)有多個(gè)手性碳旋光性青霉素類：苯環(huán)取代基頭孢菌素類：母核有共軛結(jié)構(gòu)UV（共軛）干燥條件較穩(wěn)定，溶液不穩(wěn)定穩(wěn)定性(內(nèi)酰胺)2、主要理化性質(zhì)降解失效氧化劑、酸、堿酶、金屬離子、Δ青霉素中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室二、β–內(nèi)酰胺類當(dāng)前6頁，總共35頁。

2、主要理化性質(zhì)中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室二、β–內(nèi)酰胺類當(dāng)前7頁，總共35頁。1）羥肟酸鐵反應(yīng)：

β–內(nèi)酰胺類羥肟酸顯色2）茚三酮反應(yīng)

α-氨基藍(lán)紫色3）雙縮脲反應(yīng)

β–內(nèi)酰胺類紫色4）光譜法（UV、NMR）5）色譜法（HPLC、TLC）NH2OH·HClNaOHFe3+H+茚三酮Δ

堿性酒石酸銅呈色反應(yīng)3、鑒別中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室二、β–內(nèi)酰胺類當(dāng)前8頁，總共35頁。3、鑒別-------------頭孢利定的NMR鑒別法(JP14)

NMR鑒別法單峰信號(hào)取本品50mg溶于0.5ml重水中，測(cè)定NMR光譜時(shí)，應(yīng)顯示多重峰信號(hào)多重峰信號(hào)δ=3.8附近

δ=6.9～7.5δ=7.9～9.0235強(qiáng)度比中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室二、β–內(nèi)酰胺類當(dāng)前9頁，總共35頁。3、鑒別-------------頭孢氨芐鑒別的TLC條件

CHP（2000）5mg/ml2μl硅膠G

0.1mol/L枸櫞酸液-0.2mol/LNa2HPO4-丙酮(120:80:3)0.1%茚三酮溶液顯色USP（24）25mg/ml5μl硅膠

醋酸乙酯-水-乙腈-冰HAc(48:18:14:14)短波長(zhǎng)UV光檢出BP（1999）0.4%(W/V)1μl

硅烷化硅膠HF25415.4%NH4Ac(pH6.2)-丙酮(85:15)254nm檢出中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室二、β–內(nèi)酰胺類當(dāng)前10頁，總共35頁。4、特殊雜質(zhì)檢查--------------聚合物、有關(guān)物質(zhì)、異構(gòu)體等色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)測(cè)定法頭孢他啶中聚合物測(cè)定頭孢呋辛酯中有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體的檢查色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)異構(gòu)體和有關(guān)物質(zhì)舉例：中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室二、β–內(nèi)酰胺類當(dāng)前11頁，總共35頁。頭孢他啶中聚合物測(cè)定-----------色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)葡聚糖凝膠G-10理論板數(shù)應(yīng)不低于900，拖尾因子在0.75～1.5254nm檢測(cè)流動(dòng)相A：含3.5%硫酸銨的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液藍(lán)色葡聚糖2000中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室當(dāng)前12頁，總共35頁。

頭孢他啶中聚合物測(cè)定-----------色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)葡聚糖凝膠G-10峰面積的RSD應(yīng)小于5.0%254nm檢測(cè)流動(dòng)相B：0.01%十二烷基硫酸鈉溶液頭孢他啶對(duì)照品溶液中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室當(dāng)前13頁，總共35頁。

頭孢他啶中聚合物測(cè)定-----------測(cè)定法葡聚糖凝膠G-10254nm檢測(cè)流動(dòng)相A：含3.5%硫酸銨的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液頭孢他啶樣品（20mg/ml）外標(biāo)法計(jì)算，本品含頭孢他啶聚合物以頭孢他啶計(jì)不得超過0.3%AS中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室當(dāng)前14頁，總共35頁。

頭孢他啶中聚合物測(cè)定-----------測(cè)定法葡聚糖凝膠G-10254nm檢測(cè)流動(dòng)相B：0.01%十二烷基硫酸鈉溶液頭孢他啶對(duì)照品溶液AR外標(biāo)法計(jì)算，本品含頭孢他啶聚合物以頭孢他啶計(jì)不得超過0.3%中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室當(dāng)前15頁，總共35頁。頭孢呋辛酯中有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體的檢查頭孢呋辛酯A，B異構(gòu)體之間、頭孢呋辛酯A異構(gòu)體與頭孢呋辛酯△2-異構(gòu)體之間的分離度應(yīng)大于1.5；色譜條件：ODS分析柱；0.2mol/L磷酸二氫銨-甲醇（62:38）為流動(dòng)相；流速1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)278nm。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：理論板數(shù)按頭孢呋辛酯A異構(gòu)體峰計(jì)算，應(yīng)不低于1500。中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室當(dāng)前16頁，總共35頁。40020600302010時(shí)間(min)峰高(mAU)654A異構(gòu)體B異構(gòu)體113.95411.9192.401B異構(gòu)體峰的相對(duì)保留時(shí)間約為0.85，A異構(gòu)體峰的相對(duì)保留時(shí)間為1.0。供試品色譜圖中,A異構(gòu)體峰的面積與A、B異構(gòu)體峰的面積和之比應(yīng)為0.48～0.55。頭孢呋辛酯中有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體的檢查中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室異構(gòu)體當(dāng)前17頁，總共35頁。供試品溶液：0.2mg/ml(流動(dòng)相溶）對(duì)照溶液:供試品溶液，加流動(dòng)相稀釋成6g/ml

對(duì)照溶液進(jìn)樣20l，調(diào)節(jié)儀器靈敏度，使主成分峰高約為記錄儀滿量程的10%取供試品溶液和對(duì)照品溶液各20l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時(shí)間的2.5倍供試品溶液如顯雜質(zhì)峰，量取各雜質(zhì)峰面積的和，不得大于對(duì)照溶液主峰的面積中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室頭孢呋辛酯中有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體的檢查有關(guān)物質(zhì)當(dāng)前18頁，總共35頁。5、含量測(cè)定-----------碘量法（ChP2000）二、β–內(nèi)酰胺類中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室原理：青霉素與頭孢菌素本身不與碘反應(yīng)，但其堿性降解產(chǎn)物可消耗碘青霉素族頭孢菌素族NaOH水解4I2H+8I-I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6定量過量剩余當(dāng)前19頁，總共35頁。5、含量測(cè)定

-----------碘量法（ChP2000）中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室反應(yīng)分兩步進(jìn)行：水解反應(yīng)(按化學(xué)計(jì)算量進(jìn)行)氧化-還原反應(yīng)(無定量關(guān)系，受溫度、pH值和時(shí)間等因素影響，應(yīng)嚴(yán)格控制反應(yīng)條件并采用標(biāo)準(zhǔn)品平行對(duì)照測(cè)定)當(dāng)前20頁，總共35頁。5、含量測(cè)定

-----------碘量法（ChP2000）中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室因樣品中雜質(zhì)會(huì)消耗碘，故應(yīng)作空白試驗(yàn)。加入樣品，不加堿；其余試劑（醋酸鹽緩沖液，碘液，硫代硫酸鈉）都要加堿。空白試驗(yàn):空白試驗(yàn)與經(jīng)典空白試驗(yàn)不同：當(dāng)前21頁，總共35頁。5、含量測(cè)定

-----------碘量法（ChP2000）中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室試驗(yàn)條件:（I2氧化）弱酸性（pH4.5）20分鐘后，耗碘量隨時(shí)間的變化較小堿↑I2→IO3-+I-酸↑某些藥物與碘生成復(fù)鹽沉淀溫度（24～26℃）溫度＞38℃時(shí)未水解的供試品亦消耗碘反應(yīng)時(shí)間：（20分鐘）當(dāng)前22頁，總共35頁。5、含量測(cè)定

-----------碘量法（ChP2000）中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室含量％＝×

×

對(duì)照品％V樣空-V樣W對(duì)V對(duì)空-

V對(duì)W樣靈敏度高：樣品:碘=1:8反應(yīng)條件、實(shí)驗(yàn)操作要求高1份含量V對(duì)、V對(duì)空V樣、V樣空加試劑次序、反應(yīng)時(shí)間、滴定速度相同特點(diǎn)：當(dāng)前23頁，總共35頁。5、含量測(cè)定

-----------電位配位滴定法（汞量法）中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室原理：青霉素不與汞鹽反應(yīng)，其堿性降解產(chǎn)物可與Hg2+絡(luò)和。Hg++2R-SH(RS)2Hg+2H+方法說明：

a、空白試驗(yàn)與碘量法類似，加樣品，不加NaOHb、與碘量法相比，汞量法不需對(duì)照試驗(yàn)當(dāng)前24頁，總共35頁。5、含量測(cè)定

-----------其他常用方法中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室酸堿滴定法：應(yīng)用廣泛硫醇汞鹽法羥肟酸比色法HPLC法：應(yīng)用廣泛咪唑HgCl2（λmax324～345nm）青霉素青霉烯酸硫醇汞鹽NH2OHH+Fe3+β–內(nèi)酰胺類紅色當(dāng)前25頁，總共35頁。5、含量測(cè)定

（例）-----------阿莫西林克拉維酸鉀片中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室填充劑流動(dòng)相檢測(cè)波長(zhǎng)峰形阿莫西林峰與克拉維酸峰的分離度應(yīng)大于3.5色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)十八烷基硅烷鍵合硅膠磷酸鹽緩沖液-甲醇(95:5)流速為0.7ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm當(dāng)前26頁，總共35頁。5、含量測(cè)定

（例）-----------阿莫西林克拉維酸鉀片中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室取本品10片，置1000ml量瓶中，加水適量，振搖使溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液10l注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取阿莫西林對(duì)照品與克拉維酸對(duì)照品各適量，加水溶解，制成每1ml中含阿莫西林0.5mg和克拉維酸0.25mg的混合溶液，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積分別計(jì)算供試品中C16H19N3O5S和C8H9NO5的含量。測(cè)定法：當(dāng)前27頁，總共35頁。中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室1.

化學(xué)結(jié)構(gòu)三、氨基糖苷類都是以氨基環(huán)醇與氨基糖縮合而成的苷；分子結(jié)構(gòu)中都含有多羥基；均為堿性抗生素；鏈霉素當(dāng)前28頁，總共35頁。中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室臨床應(yīng)用其硫酸鹽堿性(氨基)（糖）：有多個(gè)手性碳旋光性(糖)水溶性溶解度(氨基、羥基)強(qiáng)酸、堿條件均可水解穩(wěn)定性(苷)2、主要理化性質(zhì)三、氨基糖苷類當(dāng)前29頁，總共35頁。中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室3、鑒別三、氨基糖苷類茚三酮反應(yīng)：具羥基胺類，α-氨基酸性質(zhì)鏈霉素+

水和茚三酮藍(lán)紫色鏈霉素N-甲基葡萄糖胺N-甲基葡萄糖胺（Elson-Morgan）反應(yīng)：紅色水解對(duì)二甲氨基苯甲醛乙酰丙酮OH-當(dāng)前30頁，總共35頁。中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥分教研室OH-重排Fe3+8-羥基喹啉NaOBrOH-水解坂口（Sakaguchi）反應(yīng)：(鏈霉胍特有）麥芽酚（Maltol)反應(yīng)：(鏈霉糖特有）三、氨基糖苷類-------鑒別鏈霉素麥芽酚紫紅色鏈霉素鏈霉胍