電泳技術(shù)臨床應(yīng)用-完整版

使用范圍和檢測原理電泳技術(shù)就是利用在電場的作用下,由于待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小,形狀等性質(zhì)的差異,使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度,從而對樣品進(jìn)行分離,鑒定或提純的技術(shù).在生化檢測中,主要用于分離各類蛋白分子.第一頁，共190頁。發(fā)展歷程1809年俄國科學(xué)家列伊斯首先發(fā)現(xiàn)電泳現(xiàn)象1937年瑞典科學(xué)家Tiselius建立了界面電泳技術(shù),并首次證明了血清是由白蛋白及α,β,γ球蛋白組成的因此獲得1948年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng).1950年后,區(qū)帶電泳從發(fā)展到成熟.1980年以來,毛細(xì)管電泳逐漸受到重視第二頁，共190頁。常用的電泳技術(shù)濾紙電泳醋酸纖維素薄膜電泳凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳:瓊脂糖凝膠適用于蛋白質(zhì)和核酸的電泳支持介質(zhì),成本低,結(jié)果易保存.聚丙烯酰胺凝膠電泳:最常用的定性分析蛋白質(zhì)的電泳方法,特別是用于蛋白質(zhì)純度檢測和測定蛋白質(zhì)分子量,一般用于科研.毛細(xì)管電泳:經(jīng)典電泳技術(shù)和現(xiàn)代微柱分離相結(jié)合的產(chǎn)物第三頁，共190頁。電泳技術(shù)的醫(yī)學(xué)應(yīng)用蛋白質(zhì)電泳分析是實(shí)驗(yàn)室必備的檢測手段,可全面精確,描繪出患者蛋白質(zhì)的全貌.對疾病的早期診斷,療效觀察及預(yù)后判斷具有非常重要的臨床價(jià)值.第四頁，共190頁。蛋白的電泳檢測根據(jù)使用的染料或者是底物的不同，我們可以檢測到不同類型的蛋白:

血清蛋白 脂蛋白(運(yùn)送脂類)

各種酶類 血紅蛋白第五頁，共190頁。電泳技術(shù)在臨檢中的應(yīng)用急,慢性炎癥造血系統(tǒng)疾病:多發(fā)性骨髓瘤,巨免疫球蛋白血癥腎臟疾病肝臟疾病中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病:多發(fā)性硬化癥遺傳性疾病:地中海貧血代謝性疾病:糖尿病心血管疾病:心梗,動脈粥樣硬化惡性腫瘤第六頁，共190頁。正確解釋電泳結(jié)果

為臨床對疾病的判斷提供可靠參考第七頁，共190頁。第八頁，共190頁。gba2白蛋白a1:a1酸性糖蛋白,

a1抗胰蛋白酶:結(jié)合珠蛋白,

a2

巨球蛋白,

a脂蛋白,

銅藍(lán)蛋白:轉(zhuǎn)鐵蛋白,血液結(jié)合素,C3補(bǔ)體,b脂蛋白:免疫球蛋白血清蛋白電泳第九頁，共190頁。蛋白染色血清蛋白電泳后會呈現(xiàn)出5或者6條帶.染色后,每個(gè)條帶呈現(xiàn)出的不同程度的染色對應(yīng)著各自的蛋白濃度.如何檢測染色程度:

需要使用光密度儀.第十頁，共190頁。正常的電泳圖譜第十一頁，共190頁。

出現(xiàn)單克隆免疫球蛋白的電泳圖譜第十二頁，共190頁。蛋白電泳檢測的不同步驟制備膠片,加樣,啟動電源,開始電泳,染色,脫色,結(jié)果檢測第十三頁，共190頁。血清蛋白電泳的目的是什么?檢測異常:

含量的變化:條帶中蛋白含量的增加或減少 性質(zhì)的變化:異常條帶的出現(xiàn)第十四頁，共190頁。臨床意義將電泳作為常規(guī)檢測之一,基于蛋白含量的變化,有助于我們對以下疾病的篩查:

炎癥 營養(yǎng)不良 肺氣腫

第十五頁，共190頁。臨床意義對異常條帶的篩查,有助于我們檢測下列疾病:

骨髓瘤 巨球蛋白血癥(Waldenstrom) 細(xì)菌和病毒感染 在這些情況下,必須要做其他輔助測試,比如說免疫固定,使用不同類型的抗血清對異常蛋白進(jìn)行檢測.(對于后期治療有很重要的指導(dǎo)意義)

第十六頁，共190頁。電泳結(jié)果的臨床應(yīng)用及常見電泳結(jié)果分析電泳檢測第十七頁，共190頁。什么情況下必須進(jìn)行電泳檢測?A/G比例變化血液沉降速度發(fā)生異常變化出現(xiàn)惡性疾病征兆在免疫球蛋白定量檢測中發(fā)現(xiàn)某一種免疫球蛋白出現(xiàn)大量異常增加第十八頁，共190頁。電泳區(qū)帶分析第十九頁，共190頁。

雙白蛋白,或者一條寬峰,或者在白蛋白條帶出現(xiàn)附屬條帶可能是由以下原因造成:遺傳性雙白蛋暫時(shí)性的雙白蛋白血癥可能是由于藥物刺激導(dǎo)致的急性胰腺炎導(dǎo)致的雙白蛋白血癥:大量的胰酶的出現(xiàn)可以導(dǎo)致白蛋白降解白蛋白區(qū)帶第二十頁，共190頁。雙白蛋白血癥

第二十一頁，共190頁。雙白蛋白血癥第二十二頁，共190頁。第二十三頁，共190頁。在下列情況下白蛋白會出現(xiàn)下降:

-

腎病綜合癥,蛋白流失,胃腸病:檢查尿蛋白

-淋巴細(xì)胞增生綜合征

-營養(yǎng)不良

-肝臟功能不全

-慢性炎癥

-嚴(yán)重?zé)齻?/p>

-血液稀釋第二十四頁，共190頁。在下列情況中白蛋白會出現(xiàn)增加: -脫水癥狀

-血液濃縮

-白蛋白注射第二十五頁，共190頁。Alpha1globulins(α1球蛋白區(qū)帶)將會在下列情況下出現(xiàn)下降:

-蛋白流失

-肝功能不全

-先天性抗胰蛋白酶缺乏癥出現(xiàn)兩個(gè)條帶:

-抗胰蛋白酶的不同基因型出現(xiàn)增加:

-炎癥癥狀第二十六頁，共190頁。A1AT不同的基因型第二十七頁，共190頁。A1AT等電聚焦電泳第二十八頁，共190頁。急性炎癥電泳圖譜第二十九頁，共190頁。Alpha2globulins(α2球蛋白區(qū)帶)下列情況中出現(xiàn)下降:

-肝功能不全 -血管內(nèi)溶血第三十頁，共190頁。

出現(xiàn)兩個(gè)條帶: -溶血標(biāo)本(結(jié)合珠蛋白-血紅蛋白復(fù)合體)

-結(jié)合珠蛋白不同基因型 -出現(xiàn)單克隆免疫球蛋白(帶有大量負(fù)電荷)

*Alpha2條帶在電泳圖譜中,是一個(gè)很特殊的條帶.因?yàn)檫@一條帶中含有五種蛋白:HDL,Haptoglobin,Alpha2Macroglobulin,CeruloplasminandGcglobulin.由于結(jié)合珠蛋白有不同的基因表現(xiàn)型,增加了這一條帶的復(fù)雜程度.結(jié)合珠蛋白非常靠近Alpha1條帶;出現(xiàn)溶血時(shí)結(jié)合珠蛋白的遷移率會發(fā)生改變.同時(shí),由于HDL的含量或者是存放過久的標(biāo)本,HDL的遷移速度可能會更快.第三十一頁，共190頁。溶血的標(biāo)本第三十二頁，共190頁。出現(xiàn)在a2區(qū)域的單克隆免疫球蛋白第三十三頁，共190頁。下列情況下Alpha2區(qū)域會出現(xiàn)增加現(xiàn)象:

-炎癥癥狀 -腎病綜合征 -出現(xiàn)游離輕鏈

第三十四頁，共190頁。腎病綜合征第三十五頁，共190頁。第三十六頁，共190頁。第三十七頁，共190頁。Betaglobulins(β球蛋白區(qū)帶)在下列情況下會出現(xiàn)下降:

-肝功能不全

-C3長期缺乏或者C3代謝過快

(alsoinagingsample,C3denaturation,splittedinupto 4fractions:1betweena2andb, 1onb1,

1

onb2 and1ong)

第三十八頁，共190頁。在下列情況下會出現(xiàn)兩個(gè)條帶:

-長期存放的標(biāo)本或者是高膽固醇的標(biāo)本,LDL有不同的遷移率;從而導(dǎo)致LDL電泳是偏移Beta位置

第三十九頁，共190頁。

Beta球蛋白在下列情況下會出現(xiàn)增加現(xiàn)象:

-膽管阻塞

-腎病綜合征

-肝硬化

-缺鐵性貧血

-血球蛋白異常

-高脂蛋白血癥

-大量溶血

第四十頁，共190頁。β

脂蛋白第四十一頁，共190頁。酒精性肝硬化中的β-γ

橋第四十二頁，共190頁。第四十三頁，共190頁。第四十四頁，共190頁。第四十五頁，共190頁。出現(xiàn)在b

區(qū)域的單克隆免疫球蛋白第四十六頁，共190頁。游離輕鏈病第四十七頁，共190頁。Gammaglobulins(免疫球蛋白區(qū)帶)在下列情況中會出現(xiàn)下降現(xiàn)象:

-部分的或全部的免疫缺陷

-免疫抑制治療

-游離輕鏈病或非分泌型骨髓瘤第四十八頁，共190頁。第四十九頁，共190頁。第五十頁，共190頁。低免疫球蛋白血癥第五十一頁，共190頁。多克隆免疫球蛋白的增加:

-炎癥

-肝硬化

-亞急性和慢性感染檢測到其他條帶

-單克隆免疫球蛋白

-寡克隆免疫球蛋白

第五十二頁，共190頁。

高免疫球蛋白血癥第五十三頁，共190頁。血清蛋白021216－狼瘡病血清蛋白030127－酒精肝B-r橋第五十四頁，共190頁。

微量單克隆免疫球蛋白第五十五頁，共190頁。

大量單克隆免疫球蛋白第五十六頁，共190頁。

雙克隆免疫球蛋白第五十七頁，共190頁。與下列各類疾病相關(guān)的寡克隆免疫球蛋白(多個(gè)條帶):-自身免疫病-先天性免疫缺陷癥-病毒感染

(CHepatitis,HIVdisease,CMV(巨細(xì)胞病毒),EBV,…)-免疫抑制治療第五十八頁，共190頁。Oligoclonalpattern(寡克隆免疫球蛋白)第五十九頁，共190頁。血清蛋白電泳是

M蛋白(MonoclonalProtein)多克隆(polyclonalProtein)

寡克隆(OligoclonalProtein)

的首選檢測項(xiàng)目第六十頁，共190頁。什么是M蛋白M蛋白疾病(Monoclonalgammapathies,MG)是由于單一克隆漿細(xì)胞無限增殖產(chǎn)生的均一單克隆蛋白(Monoclonal-proteins)所導(dǎo)致的一組疾病M蛋白疾病的“M”含義是Myeloma,Macroglobulinemia,Malignantlymphoma和MonoclonalGammapathies均以“M”開頭.M蛋白在電泳上表現(xiàn)為高而狹窄的尖峰.第六十一頁，共190頁。第六十二頁，共190頁。表1646例M蛋白類型分類型別例數(shù)%IgG型骨髓瘤20531.73IgA型骨髓瘤9314.40IgM型骨髓瘤568.67IgD型骨髓瘤121.86重鏈病50.77輕鏈病21433.13半分子病10.157SIgM20.31BMG497.59雙M蛋白病81.24第六十三頁，共190頁。多發(fā)性骨髓瘤(MultipleMyeloma,MM)MM是造血系統(tǒng)的惡性腫瘤,占整個(gè)惡性腫瘤的1%常見于中、老年人(50-70歲居多,40歲以下少見).以往對此病認(rèn)識不足，漏診、誤診可達(dá)到70%以上.隨著壽命的延長對此病認(rèn)識的提高病例數(shù)顯著增加.第六十四頁，共190頁。MM臨床表現(xiàn)特點(diǎn)骨痛,骨骼腫塊與病理性骨折,骨質(zhì)疏松和溶骨現(xiàn)象貧血免疫功能低下,反復(fù)感染腎臟損害高鈣,高粘(血漿相對黏度6以上)高尿酸血癥表現(xiàn)MM的臨床表現(xiàn)多樣化,常常因此就診于骨科、腎臟內(nèi)科等,延誤診治第六十五頁，共190頁。多發(fā)性骨髓瘤的免疫學(xué)特征血中出現(xiàn)M蛋白,正常Ig水平明顯減低尿中出現(xiàn)M蛋白和輕鏈蛋白(BJP)骨髓中漿細(xì)胞明顯增加無免疫活性Ig導(dǎo)致免疫功能低下第六十六頁，共190頁。多發(fā)性骨髓瘤病人溶骨報(bào)告(骨盆)第六十七頁，共190頁。多發(fā)性骨髓瘤病人溶骨報(bào)告第六十八頁，共190頁。多發(fā)性骨髓瘤病人溶骨報(bào)告(顱骨)第六十九頁，共190頁。臨床實(shí)例第七十頁，共190頁。第七十一頁，共190頁。第七十二頁，共190頁。第七十三頁，共190頁。意義未明的單克隆免疫球蛋白疾病:BenignMC在法國,在對獻(xiàn)血者進(jìn)行檢測時(shí),會檢測到0,15%比例的單克隆免疫球蛋白攜帶者.

在老齡人群中檢測到的攜帶者比例更高(80歲以上人群).在對60到99歲人群的檢測顯示,出現(xiàn)Ig的比例從2,6%上升至19,2%.(平均值=5%)MGUS第七十四頁，共190頁。MGUS攜帶者特征:

-未出現(xiàn)臨床和影像學(xué)特征 -未出現(xiàn)不良反應(yīng),未檢測到血鈣升高,也未出現(xiàn)腎功能衰竭

-未見骨髓瘤的臨床特征 -單克隆免疫球蛋白<20g/l-其他免疫球蛋白都是正常的,同時(shí)在患者尿液中未檢測到本周氏蛋白 -單克隆免疫球蛋白的濃度隨著時(shí)間的推移未發(fā)生增加現(xiàn)象 -其他的免疫球蛋白的濃度也未隨時(shí)間推移而出現(xiàn)下降

在20%的情況中,MGUS將會轉(zhuǎn)化成惡性疾病(6-10years)第七十五頁，共190頁。Kylereport顯示,通過對1384名含有MGUS的患者的20–35(average:22years)年的跟蹤監(jiān)測發(fā)現(xiàn),24%的患者最終演變成惡性的淋巴細(xì)胞增生癥(multiplemyeloma,macroglobulinemia,amyloidosis,…).從檢測到單克隆免疫球蛋白,直到作出多發(fā)性骨髓瘤的診斷報(bào)告,這段時(shí)間是不定的,從2-29年(平均是10年左右).第七十六頁，共190頁。大量報(bào)告顯示,在下列情況中,發(fā)展成為惡性淋巴細(xì)胞增生疾病的可能性很小: -單克隆免疫球蛋白: IgG<15g/L IgA<10g/L IgM<5g/L -尿蛋白中未出現(xiàn)本周氏蛋白

-其他類型的免疫球蛋白未出現(xiàn)下降第七十七頁，共190頁。寡克隆免疫球蛋白

由于藥物原因?qū)е碌拿庖呷毕? -在器官或者骨移植之后 -自身免疫病:

(類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎,干燥綜合征(66%),系統(tǒng)性紅斑狼瘡….)

由于細(xì)菌或病毒感染導(dǎo)致的免疫缺陷:

-病毒:HIV(63%),EBV,CMV,viralhepatitis,… -細(xì)菌,寄生蟲感染:

(腦膜炎,腦炎,…)第七十八頁，共190頁。在一些腫瘤中:(慢性淋巴細(xì)胞性白血病CLL:29%)

在5%正常群體中(MGUS)

在多發(fā)性硬化患者中:(CSF90%)第七十九頁，共190頁。檢測結(jié)果闡述電泳的結(jié)果是以%的形式給出的,但是對于臨床診斷,結(jié)果必須要以濃度的形式給出g/L蛋白濃度出現(xiàn)異常時(shí),必須要進(jìn)行其它的補(bǔ)充檢測第八十頁，共190頁?；颊叩碾S訪

首次被發(fā)現(xiàn)的患者:

如果檢測到的異常M蛋白峰值不多,同時(shí)其他免疫球蛋白的含量未發(fā)生變化,也沒有臨床癥狀,懷疑可能是MGUS,

第一年每4至6個(gè)月對患者經(jīng)性隨訪,從第二年起,每年進(jìn)行一次隨訪.第八十一頁，共190頁。

已確診的患者:

如果電泳結(jié)果和先前檢測相同,利用異常峰值進(jìn)行量化以便于檢測異常M蛋白的濃度是否發(fā)生變化.

這種情況下的隨訪檢測,一定要選擇相同的技術(shù)方法.

如果隨訪結(jié)果顯示出現(xiàn)異常區(qū)帶,一定要進(jìn)行免疫固定電泳確認(rèn)這些異常蛋白的成分.第八十二頁，共190頁。第八十三頁，共190頁。IgGl單克隆免疫球蛋白(近正極端)第八十四頁，共190頁。IgG

k

單克隆免疫球蛋白,伴隨有k

型游離輕鏈本周氏蛋白檢測BENCEJONES蛋白檢測結(jié)果第八十五頁，共190頁。異常血清蛋白質(zhì)電泳圖譜的分型及其特征血清蛋白質(zhì)的圖譜類型

總蛋白Albα1α2βγ1.低蛋白血癥↓↓↓↓N↑N↓N↑2.腎病型↓↓↓↓↑↑↑不定3.肝硬化型↓N↑↓↓N↓N↓β-γ↑橋4.急性炎癥或急性時(shí)相反應(yīng)癥N↓N↑↑N5.慢性炎癥型

↓↑↑↑6.彌漫性肝損害型↓N↓↓↑↓↑7.彌漫寬γ球蛋白血癥型↑↓N↑↑8.M蛋白血癥型

在α-γ區(qū)帶中出現(xiàn)M蛋白峰-M區(qū)帶峰9.高α2（β）球蛋白血癥↓↑↑↑10.妊娠型（高α型）↓N↓↑↑N11.蛋白質(zhì)缺陷型個(gè)別區(qū)帶出現(xiàn)特征性缺乏第八十六頁，共190頁。免疫固定電泳

結(jié)果分析指南

第八十七頁，共190頁。在血清蛋白電泳時(shí),檢測到異常條帶的出現(xiàn),或者是某一個(gè)條帶的蛋白出現(xiàn)異常增加

電泳結(jié)果顯示為低免疫球蛋白血癥,或者免疫球蛋白定量結(jié)果顯示可能是游離輕鏈病

尿蛋白檢測結(jié)果異常(檢測到單克隆游離輕鏈),查看患者是否做過血清蛋白電泳,如果有必要需要進(jìn)行血清的免疫固定電泳

什么情況下必須要進(jìn)行免疫固定電泳檢測?第八十八頁，共190頁。正常血清標(biāo)本第八十九頁，共190頁。第九十頁，共190頁。第九十一頁，共190頁。IgGl單克隆免疫球蛋白(近負(fù)極端)第九十二頁，共190頁。IgGl單克隆免疫球蛋白(近正極端)第九十三頁，共190頁。IgG

k

單克隆免疫球蛋白,伴隨有k

型游離輕鏈本周氏蛋白檢測BENCEJONES蛋白檢測結(jié)果第九十四頁，共190頁。出現(xiàn)在a2區(qū)域的IgAl

第九十五頁，共190頁。出現(xiàn)兩個(gè)異常蛋白帶:利用Beta巰基乙醇處理后,結(jié)果為IgA

l單克隆免疫球蛋白BME/Fluidiltreatment第九十六頁，共190頁。BME/Fluidiltreatment檢測結(jié)果顯示為3個(gè)IgAl:利用Beta巰基乙醇處理后,結(jié)果為IgAl單克隆免疫球蛋白第九十七頁，共190頁。IgA

k單克隆免疫球蛋白伴隨有k

型游離輕鏈characterizedonHYDRAGELBENCEJONESBJassay第九十八頁，共190頁。IgM

k單克隆免疫球蛋白第九十九頁，共190頁。在每一個(gè)電泳條帶上都能見到加樣點(diǎn)痕跡:使用BME處理在BME處理過以后,結(jié)果顯示為IgM

k單克隆免疫球蛋白BME/Fluidiltreatment第一百頁，共190頁。寡克隆免疫球蛋白IgG(k+l)第一百零一頁，共190頁。雙克隆免疫球蛋白IgG

k和

IgA

k第一百零二頁，共190頁。免疫固定結(jié)果顯示為單獨(dú)的

l

成分:需要使用抗

l游離輕鏈和/或抗IgD和IgE的抗血清確認(rèn)

該結(jié)果為

l型游離輕鏈BJassaycharacterizedonHYDRAGELBENCEJONES第一百零三頁，共190頁。免疫固定結(jié)果顯示為2個(gè)獨(dú)立的

l

成分:需要使用抗

l游離輕鏈和/或抗IgD和IgE的抗血清確認(rèn)該結(jié)果為單克隆IgDl,并伴隨有

l游離輕鏈BJassaycharacterizedonHYDRAGELBENCEJONES第一百零四頁，共190頁。免疫固定結(jié)果確認(rèn):IgEl單克隆免疫球蛋白免疫固定結(jié)果顯示為單獨(dú)的

l成分:需要使用抗

l游離輕鏈和/或抗IgD和IgE的抗血清確認(rèn)第一百零五頁，共190頁。特殊病例第一百零六頁，共190頁。在免疫球蛋白區(qū)域檢測到異常條帶,但是免疫固定檢測結(jié)果卻為陰性在使用抗-纖維蛋白原的抗血清結(jié)果顯示為陽性第一百零七頁，共190頁。第一百零八頁，共190頁。尿蛋白的電泳研究第一百零九頁，共190頁。腎單位的生理結(jié)構(gòu)和各類生理蛋白1百萬個(gè)腎單位每天過濾180升的血漿，同時(shí)產(chǎn)生大約1.5升的尿液。腎小管的廢棄物排放最后形成的尿液含有1/3的白蛋白和2/3球蛋白腎小管重新吸收白蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白免疫球蛋白小分子蛋白腎小球過濾白蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白免疫球蛋白小分子蛋白小分子蛋白第一百一十頁，共190頁。尿蛋白:定義在生理學(xué)角度講，正常的人的尿蛋白量在50至120mg/24

h(大約在100mg/L)

主要的蛋白是白蛋白(少于30mg/L)病理上的腎功能疾?。寒?dāng)尿蛋白量大于150mg/24

h

而此時(shí)，尿蛋白的成分也是不定的。第一百一十一頁，共190頁。導(dǎo)致尿蛋白含量增加的原因生理上的因素:間歇性的(站立過久,正餐以后,運(yùn)動過后,壓力之下)腎前性:高血壓,發(fā)燒,心臟或肝臟功能衰退,…

蛋白濃度升高(尿蛋白含量過高)腎性:腎小球或腎小管受到損傷(或者兩個(gè)同時(shí)受到損傷)腎后性:泌尿系統(tǒng)出現(xiàn)損傷第一百一十二頁，共190頁。第一百一十三頁，共190頁。腎前性的尿蛋白第一百一十四頁，共190頁。尿蛋白含量增加某一種蛋白含量出現(xiàn)異常升高，超出了腎小管對于這一蛋白的再吸收能力。原因自由輕鏈,主要是在單克隆免疫球蛋白疾病中beta2微球蛋白,淋巴組織增生綜合征溶菌酶,在一些急性髓細(xì)胞白血病血紅蛋白,在結(jié)合珠蛋白飽和后出現(xiàn)的溶血現(xiàn)象中血清粘蛋白,又稱為Alpha酸性糖蛋白，在支氣管癌患者中肌紅蛋白,在橫紋肌出現(xiàn)溶解患者中上述各類情況均可導(dǎo)致出現(xiàn)腎病

(尤其是含有自由輕鏈的本周氏尿蛋白)第一百一十五頁，共190頁。>67kDa<67kDa尿蛋白含量增加第一百一十六頁，共190頁。腎性尿蛋白分析第一百一十七頁，共190頁。在HYDRAGEL5PROTEINURIE

凝膠上主要的尿蛋白的電泳條帶區(qū)域分析起源于腎小管的各類蛋白(分子量<67kDa)起源于腎小球的各類蛋白(分子量>67kDa)白蛋白(分子量:67kDa)a1-微球蛋白

(MW:33kDa)游離輕鏈

(MW25kDa)轉(zhuǎn)鐵蛋白

(MW:80kDa)Cystatin(MW:11kDda)b2-微球蛋白

(MW:12kDa)溶菌酶

(MW:15kDa)視黃醇結(jié)合蛋白(MW:21kDa)游離輕鏈的二聚體(MW50kDa)IgG(MW:160kDa)IgA(MW:165kDa)結(jié)合珠蛋白加樣位置a2-巨球蛋白

(MW:900kDa)注:(CystatinC),血清半胱氨酸蛋白酶抑制劑C第一百一十八頁，共190頁。腎小球過濾小分子蛋白,分子量小于67

kDa,被過濾到尿液中.其他決定各種蛋白被過濾的因素:分析形狀,帶電量,血漿濃度.還有一些血液動力學(xué)因素可影響蛋白的過濾.第一百一十九頁，共190頁。腎小球損傷經(jīng)常出現(xiàn)于成人及兒童患者中,表現(xiàn)為尿蛋白含量出現(xiàn)增加現(xiàn)象

(大于1

g/24-h)原因糖尿病感染性損傷(細(xì)菌感染,乙肝患者,水痘,梅毒,單核白血球增多癥

,…)其他系統(tǒng)性疾病(自動免疫系統(tǒng),癌癥,…)中毒現(xiàn)象(重金屬,藥物中毒,…)此時(shí),我們可以在尿蛋白中發(fā)現(xiàn)白蛋白和其他大分子量蛋白(大于67

kDa)。第一百二十頁，共190頁。第一百二十一頁，共190頁。臨床示例第一百二十二頁，共190頁。腎小管的再次吸收功能在腎小球中被過濾掉的小分子蛋白，分子量小于67

kDa,將會在腎小管內(nèi)被重新吸收(內(nèi)吞作用).

99%的在腎小球內(nèi)被過濾的蛋白,都將會被重新吸收利用.

例如,

18

g/24-h白蛋白將會被過濾掉;

30

mg/L

白蛋白在人的尿液中被發(fā)現(xiàn).

第一百二十三頁，共190頁。腎小管損傷腎小管損傷將會改變其對小蛋白分子的重新吸收能力

(小于67

kDa的蛋白)通常是暫時(shí)性的,并且少于0.5

g/24-hours原因遺傳原因(Fanconi’ssyndrome)免疫球蛋白單克隆擴(kuò)增(骨髓瘤)藥物作用(抗癌藥物)中毒現(xiàn)象(重金屬)白蛋白(<30%)及其它小分子蛋白(小于67

kDa)都將會在尿液中被找到.第一百二十四頁，共190頁。第一百二十五頁，共190頁。>67kDa<67kDa腎小管損傷<67kDa>67kDa第一百二十六頁，共190頁。>67kDa<67kDa混合性損傷第一百二十七頁，共190頁。第一百二十八頁，共190頁。臨床示例第一百二十九頁，共190頁。腎小球、腎小管均受損傷。臨床示例第一百三十頁，共190頁。5PROTEINURIE14.3KDa26.6KDa150KDa66KDa第一百三十一頁，共190頁。第一百三十二頁，共190頁。輕鏈病多表現(xiàn)為腎臟損害，極易誤診為慢性腎炎。我們認(rèn)為輕鏈有3種形式出現(xiàn)在血清或尿中；一是正常的輕鏈過剩（Kappa和Lambda同時(shí)出現(xiàn)），多出現(xiàn)于慢性肝病，紅斑狼瘡等多克隆增殖中。二是伴隨輕鏈。三是單一輕鏈，血和尿中只出現(xiàn)單一增殖的大量輕鏈。第一百三十三頁，共190頁。第一百三十四頁，共190頁。第一百三十五頁，共190頁。關(guān)于本周氏蛋白的檢測進(jìn)行血清蛋白電泳時(shí),已經(jīng)了解患者的血清蛋白電泳信息(血液中檢測到單克隆免疫球蛋白),

不建議進(jìn)行尿蛋白濃縮.當(dāng)懷疑患者出現(xiàn)淀粉樣病變或者輕鏈沉淀病時(shí)(血清中未檢測到單克隆免疫球蛋白),這種情況下，需要濃縮尿蛋白確認(rèn)是否出現(xiàn)了本周氏蛋白.濃縮還是不濃縮

?第一百三十六頁，共190頁。BenceJonesprotein漿細(xì)胞增生癥影響血液中出現(xiàn)游離輕鏈尿液中出現(xiàn)起因結(jié)果腎小管損傷淀粉樣病變輕鏈沉淀病骨髓瘤巨球蛋白血癥CLL慢性白血病MGUS.....第一百三十七頁，共190頁。下列參數(shù)會影響本周氏蛋白的毒性:等電點(diǎn)(pI):

-WhenthepIis>6,theBenceJoneswillinteractstronglywiththeTamm-Horsfallprotein.

-IfthepIislow,therewillbelittleinteractionwithTHP.輕鏈形成的聚合體:-(polymerscanreachaMWof900kD).

輕鏈的初級結(jié)構(gòu):

-Theprimarystructureofthefreelightchainsisalsoinvolvedinthetoxicity.Thisisduetothevariableregionofthelightchain.第一百三十八頁，共190頁。尿液的檢測原則當(dāng)血液中檢測到M蛋白時(shí): -進(jìn)行24H尿蛋白檢測 -電泳+IF/BJ -對異常峰進(jìn)行鑒定 -對患者進(jìn)行隨訪,目的是確認(rèn)藥后療效和腎臟損傷程度第一百三十九頁，共190頁。原尿檢測

(HR3Program)Hydragel15HR(高分辨試劑檢測)第一百四十頁，共190頁。濃縮尿液檢測(HR2Program)Hydragel15HR(高分辨試劑檢測)第一百四十一頁，共190頁。HydragelBenceJones(本周氏蛋白檢測)第一百四十二頁，共190頁?？偟哪虻鞍?0,3g/L腎小管型損傷檢測到:-微量白蛋白,-3個(gè)腎小管型小分子蛋白-多克隆的kandl

型輕鏈,沒有重鏈與之對應(yīng)本周氏蛋白檢測陰性第一百四十三頁，共190頁。重點(diǎn):對患者定期隨訪檢測,便于及時(shí)掌握患者腎臟損傷程度

總結(jié)第一百四十四頁，共190頁。電泳技術(shù)在同工酶分析方面的應(yīng)用TheAssayandtheClinicalApplicationofIsoenzymes第一百四十五頁，共190頁。同工酶的定義同工酶是以多種分子形式存在于機(jī)體的催化功能相同分子結(jié)構(gòu)不同第一百四十六頁，共190頁。檢測同工酶的目的檢測同工酶活力比單測定酶的總活力更具有臟器特異性和高靈敏性等優(yōu)點(diǎn),因而提高了臨床診斷價(jià)值早期診斷某些疾病,陽性率高,特異性強(qiáng)可以估計(jì)病情嚴(yán)重性和判斷預(yù)后第一百四十七頁，共190頁。同工酶的命名國際化學(xué)聯(lián)合會(InternationalUnionofpureandAppliedChemistryIUPAC)建議:1、在命名同工酶時(shí)應(yīng)采用規(guī)定的酶的名稱2、如同工酶電泳圖上各主要區(qū)帶旁還分出若干亞區(qū)帶時(shí),可以用a,b,c,d注于主要區(qū)帶的右下方.3、經(jīng)明確鑒定過的特異同工酶,可以附加諸如分子量,穩(wěn)定性,亞單位等參數(shù).4、同工酶不應(yīng)該用組織的分布來加以注解(如腦型，心肌型等)因?yàn)檫@類同工酶在別的生物機(jī)體中不一定存在于同一組織中。第一百四十八頁，共190頁。目前廣泛應(yīng)用于臨床檢測中的同工酶乳酸脫氫酶同工酶(Lactatedehydrogenase,LDH)肌酸激酶同工酶(Creatinekinase,CK)堿性磷酸酶同工酶(Alkalinephosphatase,ALP)天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartatetransaminase,AST)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(γ-glutamyltransferase,GGT)-淀粉酶同工酶(

-Amylase,AMY)第一百四十九頁，共190頁。同工酶的分析方法由于同工酶的一級結(jié)構(gòu)(氨基酸序列)及高級結(jié)構(gòu)(構(gòu)象)的不同,因此,一種酶的各個(gè)同工酶在化學(xué),物理化學(xué),生物化學(xué)等方面的性質(zhì)也就有所差異,這些差異就提供了分析和鑒定同工酶的理論基礎(chǔ)在研究同工酶的所有方法中，電泳法的使用最為廣泛。因?yàn)榇朔ê啽?、快速、分離效果良好，并且一般不會破壞酶的天然狀態(tài)第一百五十頁，共190頁。乳酸脫氫酶同工酶(LDH)乳酸脫氫酶是能催化乳酸脫氫生成丙酮酸的酶每種LD同功酶都是由4個(gè)亞單位(肽鏈)組成的四聚物.這些亞單位中,有兩類分別專屬M(fèi)(肌肉)和H(心臟). H4=LD1 H3M=LD2 H2M2=LD3 HM3=LD4 M4=LD5第一百五十一頁，共190頁。乳酸脫氫酶同工酶(LDH)組成與分布

LDH1～5H,M,MW140,000.

LDH1,2:心肌,腎,紅細(xì)胞

LDH3:肺,脾,胰,甲狀腺,腎上腺,淋巴結(jié)

LDH4,5:骨骼肌,肝

LDHx:睪丸,精子檢測方法--------瓊脂糖電泳法

原理:以瓊脂糖膠作為介質(zhì),LDH可分離出五種同工酶區(qū)帶,根據(jù)其電泳遷移率的快慢,將遷移最快的命名為LDH1,依次為LDH2,LDH3,LDH4和LDH5,最后顯色,掃描確定其百分率.參考值LDH128.4±5.3%LDH241.0±5.0%LDH319.0±4.0%LDH46.6±3.5%LDH54.6±3.0%第一百五十二頁，共190頁。第一百五十三頁，共190頁。臨床意義LDH1和LDH2升高：見于急性心肌梗塞(LDH1／LDH2>1)、病毒性心肌炎、風(fēng)濕性心肌炎和克山病LDH5和LDH4升高：

(1)急性肝炎：LDH5明顯升高，LDH4輕度增高；

(2)急性肝萎縮：LDH5和LDH4都明顯升高；

(3)慢性肝炎，肝硬化：LDH5輕度升高；

(4)骨骼肌急性損傷、皮肌炎：LDH5和LDH4都升高；

(5)前列腺癌：LDH5升高，LDH5／LDH1>1LDH的五種同工酶都升高：見于胃癌、結(jié)腸癌和胰腺癌.第一百五十四頁，共190頁。肌酸激酶同工酶（ISO-CK）

肌酸激酶(CK)同工酶的組成

CK是由M和B兩種亞單位組成的二聚體,在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)質(zhì)內(nèi)共有三種同工酶：CK-MM,CK-MB和CK-BB。在細(xì)胞線粒體內(nèi)還有另一種同工酶，稱為CK-Mt。這幾種同工酶的分子量雖然相同，但免疫特性不同，電泳遷移率也不同。第一百五十五頁，共190頁。

肌酸激酶(CK)同工酶的組成

(廣泛存在于各類組織中,與ATP形成有關(guān))

骨骼肌:主要為CK-MM,不含CK-BB,僅有少量CK-MB（＜3％）

心肌:主要為CK-MM,CK-MB占CK總量的14％-42％

腦組織以及其中含平滑肌器官:幾乎全部是CK-BB，它同時(shí)也是人胚胎中CK的主要存在形式。

MacroCKTypeICKBBApplicationpointCKMBCKMMMacroCKTypeII腦組織及其它平滑肌:CK-BB0%心肌細(xì)胞:CK-MB0~3%骨骼肌細(xì)胞:CK-MM97~100%CK-MB的陽性決定水平為5%

第一百五十六頁，共190頁。

免疫抑制法測定

原理：用羊抗CK-M抗體與病人血清共同溫育，血清中的CK-M亞單位全部被抑制，測定剩余的非M-CK活性，即代表CK-BB和CK-MB中的B亞基，也包括CK-Mt

活性，由于正常人和心臟，肌肉疾患病人血清中CK-BB和CK-Mt的含量極低，故一般忽略不計(jì)，此時(shí)測得的非M-CK活性實(shí)際上代表CK-MB中的B亞基活性，乘以2即為CK-MB活性。

第一百五十七頁，共190頁。第一百五十八頁，共190頁。CK同工酶的臨床意義

1．急性心肌梗塞

（1）CK總活性在急性心肌梗塞后的4小時(shí)便開始升高，至20-30小時(shí)達(dá)高峰，3-5天后下降至基礎(chǔ)水平。此酶為診斷心肌梗塞的一個(gè)極靈敏指標(biāo)。

4小時(shí)20-30小時(shí)3-5天第一百五十九頁，共190頁。（2）CK-MB主要存在于心肌細(xì)胞內(nèi)，急性心肌梗塞后先于CK總活力1-2小時(shí)升高，12-20小時(shí)達(dá)峰值，如無并發(fā)癥3天后回復(fù)至正常水平，如果胸痛病人患者在48小時(shí)內(nèi)CK-MB尚在正常水平活力不足總CK的2%，即可排除急性心肌梗塞的診斷

若已下降的CK-MB再度上升，提示可能有新

的心肌梗塞發(fā)生。

1-2小時(shí)12-20小時(shí)3天后第一百六十頁，共190頁。（1）肌營養(yǎng)不良

骨骼肌中富含CK，以CK-MM為主，故各型肌營養(yǎng)不良均可引起CK活力升高，發(fā)病年齡越早，予后也越差。其中半數(shù)以上可檢出CK-MB，（CK-MB/CK＜5%)而心電圖都無陽性發(fā)現(xiàn)，說明并非心肌受累。

（2）肌肉創(chuàng)傷及肌肉注射

肌肉創(chuàng)傷可使CK活力升高，無CK-MB出現(xiàn)，CK-MM是骨骼肌損傷的特異指標(biāo)。肌肉注射青霉素，利血平，腎上腺素等藥物期間，約有1/3的病人在12-48小時(shí)內(nèi)總CK活力升高，一般可持續(xù)3-6天，檢測CK同工酶，可見主要是CK-MM占優(yōu)勢，提示這是肌肉創(chuàng)傷所至。

2．神經(jīng)肌肉系統(tǒng)疾病第一百六十一頁，共190頁。3.巨CK的臨床評價(jià)-巨CK1巨CK1

是一種同工酶(抗體)與自身抗體的復(fù)合物最多的是CK-BB與IgG或IgA的復(fù)合物.也有少數(shù)為CK-MM與IgG的復(fù)合物。CK-BB-IgG或IgA。老年人、風(fēng)濕和心臟病、肌炎患者。在做冠脈造影的患者中巨CK1的發(fā)生率13.8％，認(rèn)為至少部分起源于血管壁。3例低血鉀性肌病婦女。1例急性橫紋肌溶解，肌肉內(nèi)肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶缺乏。認(rèn)為巨CK1與自身免疫性疾病無明顯聯(lián)系。第一百六十二頁，共190頁。3.巨CK的臨床評價(jià)-巨CK2巨CK2是一種低聚的線粒體CK，又稱CK-Mt，存在于細(xì)胞線粒體膜上，當(dāng)線粒體崩解時(shí)，線粒體的小碎片進(jìn)入血液，使CK-Mt成低聚狀態(tài)。眾多文獻(xiàn)認(rèn)為巨CK2不會在健康人血中出現(xiàn)，它與惡性腫瘤密切相關(guān)，可作為腫瘤的標(biāo)志物。原發(fā)性肺癌巨CK2檢出率為56.8%。肺癌組CEA(人癌胚抗原)測定的陽性率40.0%。手術(shù)切除后巨CK2轉(zhuǎn)為陰性，提示將巨CK2和CEA聯(lián)合檢測，用于檢出肺癌有無周圍淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有價(jià)值。巨CK2亦可為胃腸道惡性腫瘤的標(biāo)志物，13例結(jié)腸癌患者，手術(shù)前有9例血清出現(xiàn)巨CK2；21例結(jié)腸癌或胃癌轉(zhuǎn)移的患者中16例檢出巨CK2。第一百六十三頁，共190頁。MMMBBBMacroCK1第一百六十四頁，共190頁。4.CK-BB《急性顱腦損傷患者血清CK—BB監(jiān)測的臨床意義》華西醫(yī)學(xué)－1997年12月2期何永生，葉長寧，四川省人民醫(yī)院神經(jīng)外科

目的；探討急性顱腦損傷患者血清ＣＫ－ＢＢ活性及動態(tài)變化的臨床意義。方法：逐日監(jiān)測５０例急性腦傷患者血清ＣＫ－ＢＢ活性，與臨床指標(biāo)對比評價(jià)其臨床價(jià)值，并分析其變化規(guī)律與治療轉(zhuǎn)歸，預(yù)后的關(guān)系，結(jié)果：血清ＣＫ－ＢＢ在傷后早期升高，且與傷情成正比相關(guān)，ＣＫ－ＢＢ較快恢復(fù)正常是治療有效、無并發(fā)癥和預(yù)后良好的標(biāo)志。第一百六十五頁，共190頁。急性顱腦損傷患者血清CK—BB監(jiān)測的臨床意義華西醫(yī)學(xué)－1997年12月2期何永生，葉長寧，四川省人民醫(yī)院神經(jīng)外科

目的：探討急性顱腦損傷患者血清ＣＫ－ＢＢ活性及動態(tài)變化的臨床意義。方法：逐日監(jiān)測５０例急性腦傷患者血清ＣＫ－ＢＢ活性，與臨床指標(biāo)對比評價(jià)其臨床價(jià)值，并分析其變化規(guī)律與治療轉(zhuǎn)歸，預(yù)后的關(guān)系，結(jié)果：血清ＣＫ－ＢＢ在傷后早期升高，且與傷情成正比相關(guān)，ＣＫ－ＢＢ較快恢復(fù)正常是治療有效、無并發(fā)癥和預(yù)后良好的標(biāo)志。第一百六十六頁，共190頁。動態(tài)監(jiān)測缺氧缺血性腦病患兒血清CK-BB的臨床意義中國誤診學(xué)雜志－2002年

第2卷第12期鄭紅英

目的：探討缺氧缺血性腦病(HIE)新生兒血清腦型肌酸激酶同工酶(CK-BB)和心型肌酸激酶同工酶(CK-MB)的活性變化,以了解CK-BB和CK-MB對HIE患兒的檢測價(jià)值.方法：在出生后1～3d檢測HIE患兒CK、CK-BB、CK-MB活性,與正常新生兒作對比,分析各項(xiàng)指標(biāo)與病情、轉(zhuǎn)歸、預(yù)后的關(guān)系.結(jié)果：中度、重度HIE患兒血清CK-BB、CK與正常新生兒相比有顯著性升高;重度組CK-MB比正常組顯著升高.CK-BB活性迅速下降者,治療有效,預(yù)后良好;CK-BB活力持續(xù)升高,患兒預(yù)后差,CK-MB升高患兒常伴有心肌功能損害.結(jié)論：血清CK-BB是診斷HIE的可靠、特異性指標(biāo),動態(tài)監(jiān)測新生兒CK-BB、CK-MB活性對病情估計(jì)、判斷療效及預(yù)后評估有重要價(jià)值.第一百六十七頁，共190頁。羊水Ⅲ°混濁新生兒肌酸磷酸激酶同功酶改變及臨床意義

當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2007年6月傅發(fā)展，浙江省蒲江縣人民醫(yī)院目的

探討羊水Ⅲ°混濁新生兒肌酸磷酸激酶及其同功酶的改變及意義。方法

24例羊水Ⅲ°混濁新生兒暫無心腦肺等臟器并發(fā)癥作為實(shí)驗(yàn)組，24例正常新生兒作為對照組，出生后48小時(shí)內(nèi)測定CK、CK-MB、CK-BB。

結(jié)果

兩組差異有顯著性（P＜0.01）。結(jié)論

CK-BB主要存在于腦部神經(jīng)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的胞漿中，只有在神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞受損時(shí)才釋放到細(xì)胞外。由于宮內(nèi)缺氧導(dǎo)致血腦屏障功能受損，因而大量CK-BB通過血腦屏障進(jìn)入血液循環(huán)，使血清中水平升高。CK-BB在血中表達(dá)水平越高，持續(xù)時(shí)間越長，表明腦損害病情越重，因其有較高的特異性與靈敏性，在腦缺氧損害時(shí)，CK-BB可作為早期診斷、病情估計(jì)及判斷預(yù)后的評價(jià)指標(biāo)。

第一百六十八頁，共190頁。新生兒缺氧缺血性腦病血清CK-BB水平與腦實(shí)質(zhì)CT值的相關(guān)性研究中國優(yōu)生與遺傳雜志，2006年第14卷05期張愛梅,劉長云,呂祖芳,段全紀(jì)目的：探討新生兒血清肌酸激酶腦型同工酶(CK-BB)的水平與腦實(shí)質(zhì)CT值對缺氧缺血性腦病(HIE)的診斷價(jià)值.方法：采用比色法對49例HIE患兒和32例對照組新生兒血清CK-BB水平進(jìn)行動態(tài)測定.同時(shí)采用日本東芝Aqilion螺旋CT掃描機(jī)單純頭顱平掃,在CT診斷分度的同時(shí)測定腦實(shí)質(zhì)CT值.結(jié)果：生后24小時(shí)內(nèi)HIE組血清CK-BB水平與對照組相比明顯增高(P均<0.01),且HIE各組之間差異有顯著性意義(P均<0.01);生后48及72小時(shí)重度HIE組血清CK-BB水平仍高于對照組(P<0.01),與輕、中度HIE組與對照組相比差異有非常顯著性意義(P<0.01).輕、中、重度HIE患兒腦實(shí)質(zhì)CT值均明顯低于對照組(均P<0.01),且HIE各組之間差異有顯著性意義(P均<0.01).相關(guān)分析發(fā)現(xiàn),HIE組生后24小時(shí)內(nèi)患兒血清CK-BB水平與腦實(shí)質(zhì)CT值呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.747,P<0.01).結(jié)論：血清CK-BB水平監(jiān)測可作為HIE診斷及評價(jià)腦損傷程度的早期預(yù)測指標(biāo),與腦實(shí)質(zhì)CT值結(jié)合可對窒息后缺氧缺血性腦病做出早期而正確的診斷,為早期治療提供依據(jù).第一百六十九頁，共190頁。腦脊液蛋白研究第一百七十頁，共190頁。中樞合成免疫球蛋白是中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾患的一個(gè)重要信號，主要用于對中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾患進(jìn)行診斷和鑒別診斷如：多發(fā)性硬化癥、癡呆、脊髓炎、副腫瘤性腦炎、神經(jīng)性梅毒等現(xiàn)階段臨床上診斷中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變主要依靠影像學(xué)結(jié)合臨床分析，但是，在病變早期影像學(xué)及常規(guī)檢查常無法診斷然而中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變患者腦脊液中免疫球蛋白IgG增加卻發(fā)生較早因此實(shí)驗(yàn)中對腦脊液中IgG進(jìn)行蛋白電泳，形成的典型寡克隆區(qū)帶對上述疾病的早期診斷而言，是重要的、必不可少的依據(jù)第一百七十一頁，共190頁。瓊脂糖凝膠電泳和免疫固定原理相結(jié)合利用高分辨技術(shù)在瓊脂糖凝膠上對腦脊液蛋白進(jìn)行電泳分離(血清中的免疫球蛋白的濃度應(yīng)該被稀釋到和腦脊液中Ig