實驗二 植物病害組織分離培養(yǎng)技術(shù)及植物病害癥狀觀察

實驗二植物病害組織分離培養(yǎng)技術(shù)及植物病害癥狀觀察第1頁/共30頁實驗二植物病原真菌組織分離培養(yǎng)技術(shù)及植物病害癥狀觀察

第2頁/共30頁一、實驗?zāi)康暮鸵螅?.掌握植物病害組織分離、無菌操作及常用病原物的培養(yǎng)和保存方法。2.通過觀察植物病害的典型癥狀，初步掌握植物病害的癥狀特點(diǎn)，并學(xué)習(xí)植物病害癥狀的描述方法。第3頁/共30頁二、材料及用具（1）植物病害組織體（自備），PDA平板培養(yǎng)基（已做好）。（2）超凈工作臺（內(nèi)有75%酒精（內(nèi)放脫脂棉球）、解剖刀、手術(shù)剪、鑷子、酒精燈、培養(yǎng)皿、滅菌紗布（2塊5cm×5cm）、培養(yǎng)皿（9cm）120套（2個班，2皿/人），5%乳酸瓶（60ml），1%漂白粉（0.1%升汞）瓶，無菌水、火柴等。第4頁/共30頁三、實驗內(nèi)容操作方法步驟：1.植物組織體的選擇：選擇發(fā)病植物體，發(fā)病部位病健交界處明顯，新鮮的植物組織體作為實驗材料。第5頁/共30頁2、分離過程：1）實驗進(jìn)行前先把周圍環(huán)境灑上少許水，地面潔凈，把超凈臺面擦干凈，打開超凈臺的紫外燈照射20－30分鐘，然后關(guān)閉紫外燈，打開鼓風(fēng)機(jī)，點(diǎn)燃酒精燈。第6頁/共30頁2）培養(yǎng)基在微波爐融化后，在超凈臺上把培養(yǎng)基倒入滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)，12ml/皿（為防止細(xì)菌污染，倒平板前每三角瓶內(nèi)加5%乳酸4-6滴），放置片刻待培養(yǎng)基自然冷卻。注意此步操作應(yīng)在酒精燈附近進(jìn)行。3）植物病害標(biāo)本，用自來水沖洗干凈，放入接種箱內(nèi)；雙手用70%酒精棉球擦拭消毒后，伸入接種箱內(nèi)開始操作。第7頁/共30頁4）打開3個培養(yǎng)皿（無菌的），依次倒入70%酒精、1%漂白粉、無菌水；取出滅菌解剖刀，蘸70%酒精并過酒精燈火焰后，待刀片冷卻后切取所需植物組織體，在病健交界處剪切成3mm2的大小（保證每人6塊，3塊/皿），用紗布包好，分別于70％酒精中浸5秒后，再在1%漂白粉（0.1％升汞溶液）中浸3－5分鐘進(jìn)行表面充分消毒，而后用滅菌水沖洗3次。第8頁/共30頁5）用消毒鑷子將植物組織塊（在干的無菌紗布中吸去多余的水分），移至PDA培養(yǎng)基平板上，3塊/皿。6）將接種好的平板做好標(biāo)記，置于25℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48小時后觀察結(jié)果。第9頁/共30頁玉米小斑病棉花輪紋病第10頁/共30頁要求：本次實訓(xùn)操作要求細(xì)心，規(guī)范，快速，準(zhǔn)確注意

（1）工作環(huán)境的清潔和消毒（2）分離用具的消毒（3）分離材料的選擇第11頁/共30頁植物病害癥狀觀察

植物病害病狀類型●

變色●

壞死●

腐爛●

萎蔫●

畸形第12頁/共30頁植物病害癥狀觀察

●變色第13頁/共30頁第14頁/共30頁第15頁/共30頁初始癥狀褐色小點(diǎn)，有暈圈

中期癥狀褐色斑點(diǎn)，有暈圈

后期癥狀葉正面點(diǎn)狀物散生排列（分生孢子盤）壞死第16頁/共30頁同心輪紋形病斑

①同心輪紋型：發(fā)病初期，正面出現(xiàn)黃褐色小點(diǎn)，逐漸擴(kuò)大成圓形，暗褐色、周圍黃色、外有綠色暈的病斑，病斑中出現(xiàn)同心輪紋狀排列的黑色小點(diǎn)。葉背面病部為暗褐色，周圍淺褐色，無明顯邊緣。第17頁/共30頁②針芒型：病斑似針芒向外擴(kuò)展，無一定邊緣，病斑小，但數(shù)量多，遍布葉片，后期葉片漸黃，病斑周圍及背部保持綠色。第18頁/共30頁③混合型：病斑很大，近圓形或不規(guī)則形，其上亦有小黑粒點(diǎn)，但不明顯地排列成同心輪紋狀，病斑暗褐色，后期中心為灰白色，但邊緣有的呈綠色?；旌闲停螤畈灰?guī)則。病斑較大，在葉邊緣及內(nèi)均發(fā)生

第19頁/共30頁梨黑星病第20頁/共30頁病害發(fā)生在主干和大枝上。（1）在光皮楊樹品種上，多圍繞皮孔產(chǎn)生直徑1厘米左右的水泡狀斑；（2）在粗皮楊樹品種上，通常并不產(chǎn)生水泡，而是產(chǎn)生小型局部壞死斑；（3）當(dāng)從干部的傷口、死芽和凍傷處發(fā)病時，形成大型的長條形或不規(guī)則形壞死班。

第21頁/共30頁桃穿孔病細(xì)菌穿孔病霉斑穿孔病褐斑穿孔病第22頁/共30頁菠菜猝倒病第23頁/共30頁大白菜軟腐病第24頁/共30頁茄子青枯病第25頁/共30頁棗瘋病癥狀：芽不正常萌發(fā)與生長所引起的枝葉叢生，以及嫩葉的明脈、黃化和卷成匙形等。病株花器各部分的著生部位不變?；ㄆ鞣底娆F(xiàn)象表現(xiàn)為花梗變長，花瓣變成小葉，有時變成小枝條，有時則不發(fā)生變態(tài)；雌蕊變成小枝條，其腋芽往往萌發(fā)，生成短而細(xì)的小枝。后來除了雌蕊變成的小枝和萼片腋芽萌發(fā)生成的枝條外，其余各部分大都脫落。這樣，果實就為小枝所取代，形成結(jié)果枝上的叢生癥狀。第26頁/共30頁番茄根結(jié)線蟲病第27頁/共30頁桃樹縮葉病第28頁/共30頁作業(yè)（1）敘述植物病害組織分離技術(shù)的操