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文檔簡介

利用大腸桿菌生產(chǎn)胰島素基因工程育種胰島素作用機理胰島素是機體內(nèi)唯一降低血糖的激素，也是唯一同時促進糖原、脂肪、蛋白質(zhì)合成的激素。作用機理屬于受體酪氨酸激酶機制。（一）調(diào)節(jié)糖代謝胰島素能促進全身組織對葡萄糖的攝取和利用，并抑制糖原分解和糖原異生，因此，胰島素有降低血糖的作用。促進肌肉、脂肪組織等處的靶細胞細胞膜載體將血液中的葡萄糖轉(zhuǎn)運入細胞。通過共價修飾增強磷酸二酯酶活性、降低cAMP水平、升高cGMP濃度，從而使糖原合成酶活性增加、磷酸化酶活性降低，加速糖原合成、抑制糖原分解。通過激活丙酮酸脫氫酶磷酸酶而使丙酮酸脫氫酶激活，加速丙酮酸氧化為乙酰輔酶A，加快糖的有氧氧化。通過抑制PEP羧激酶的合成以及減少糖異生的原料，抑制糖異生。抑制脂肪組織內(nèi)的激素敏感性脂肪酶，減緩脂肪動員，使組織利用葡萄糖增加。（三）調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)代謝胰島素一方面促進細胞對氨基酸的攝取和蛋白質(zhì)的合成，一方面抑制蛋白質(zhì)的分解，因而有利于生長。腺垂體生長激素的促蛋白質(zhì)合成作用，必須有胰島素的存在才能表現(xiàn)出來。因此，對于生長來說，胰島素也是不可缺少的激素之一。（四）其它功能胰島素可促進鉀離子和鎂離子穿過細胞膜進入細胞內(nèi)；可促進脫氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)及三磷酸腺苷(ATP)的合成。生產(chǎn)步驟1.提取目的基因2.提取質(zhì)粒3.基因重組4.將質(zhì)粒送回大腸桿菌5.胰島素的產(chǎn)生2.提取質(zhì)粒從大腸桿菌的細胞質(zhì)中提取質(zhì)粒,質(zhì)粒為環(huán)狀。此質(zhì)粒將作為胰島素基因的載體。

1.堿裂解法：此方法適用于小量質(zhì)粒DNA的提取，提取的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切、PCR擴增、銀染序列分析。2.煮沸法3.基因重組取出目的基因與質(zhì)粒,先利用同種限制性內(nèi)切酶將質(zhì)粒切開,再使用DNA連接酶將目的基因與質(zhì)?！翱p合”,形成一個能表達出胰島素的DNA質(zhì)粒。4.將質(zhì)粒送回大腸桿菌在大腸桿菌的培養(yǎng)液中加入含有Ca+的物質(zhì),如CaCl2,這使細胞會吸收外源基因.此時將重組的質(zhì)粒也放入培養(yǎng)液中,大腸桿菌便會將重組質(zhì)粒吸收.將大腸桿菌用氯化鈣處理，以增大大腸桿菌細胞壁的通透性，使含有目的基因的重組質(zhì)粒能夠進入受體

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