科研課題申請書講課稿

:::::201412 月dC6、轉(zhuǎn)移復發(fā)預后和裸鼠模型上去甲藥是否重誘導探的治療藥判斷預后提高我國治療水平具有重要意義。鍵（）立項依據(jù)內(nèi)容1、項目立項依據(jù)的食有密,密相但目前對發(fā)發(fā)展精確尚不完全清此,探索改變發(fā)發(fā)展治療藥判斷預后提高我國治療水平具有重要意義。cadherinCadherin細極性及形態(tài)形成以及參與間識別和信號傳機制(1,2,3,4)。經(jīng)典Cadherin如E-cadherin和N-cadherin 由外結(jié)合Cadherin所名u即3或。n-n分特征密切相關（670將n重新入缺失E-cadherin達腫瘤則腫瘤增殖及侵犯力顯著1n（23，48推測n在這些腫瘤中可扮演腫瘤抑制基因角色,但尚無人對在不同腫瘤中基因及機制進行研究2003（黃志勇最新研究明將基因入缺失大鼠腦膠質(zhì)母C6達n6，在大鼠腦膠質(zhì)母瘤中腫瘤抑制基因功并進一步揭示抑制機制是通過誘達致使腫瘤于G2期阻滯該文發(fā)于udury1為進一步研究發(fā)病機制中起著重要作用（0，1，2，3。n基因在乳基化導致基因失活，進而導致其蛋白表達水平顯著下降n(25)Riou16q2413個常常在肝癌中缺失表達的基因的轉(zhuǎn)錄研究發(fā)現(xiàn)，PLC/PRF/C,TONG和HA22TNGH四種肝癌細胞株中缺失表達，但n（（）進一步研究顯示T-cadherin基因啟動子在肝癌中高度甲基化，而E-cadherin基因啟動子在肝癌中不發(fā)生甲基化，表明在Cadherin細胞粘附分子超家族中T-cadherin基因啟動子甲基化在肝癌中具有高度特異性,且基因啟動子甲基化與n（26n啟動子甲基化是2ug/ml去甲基化藥-deoxycytidine共孵6天能使皮膚鱗癌細胞株恢復n（。但目前對基因失活與肝癌惡性分化程度、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移及復發(fā)等惡性生學特征的關系，以及應用去甲基化是否能誘導、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性特征全世界尚無研究報基因功能調(diào)查缺失是否能的標本基因失活與惡性化程度、轉(zhuǎn)移及復發(fā)等惡性生物學特征關系基因失活與臨床預后及裸鼠模型上證實是否去甲基化藥物能誘導、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性生物學特征觀察其潛治療作用和可能毒副基因與C6惡性生物學特征關系及其機豐富經(jīng)驗預期該研究成果能國際先進水平。主要參考文獻：AngstBD,CandMageeAI.Thecadherinsuperfamily:diversityinformandfunction.JCellSci.,2001,114:629-641KemlerR.Classiccadherins.Semin.CellBiol.,1992,3:149-155KollerE,RanschB.DifferentialtargetingofandN-cadherininepithelialcells.JBiolChem.,1996,271:30061-30067M.Cadherin cell adhesion receptor as a regulator.Science1991,251:1451-1455Angst,B.D.,c.,andMagee,A.L.TheT-cadherinsuperfamily:diversityinfromandfunction.J.CellSci2001,114:629-641Berx,plex:animportantgatekeeperinbreastcancertumorigenesisandmalignantprogression.BreastCancerRes.2001,3::289-293.Bremnes,R.M.,VeveR.,Gabrielson,E.etal.High-throughputtissuemicroarrayanalysisusedtoevaluatebiologyandprognosticsignificanceoftheE-cadherinpathwayinnon-small-celllungcancer.J.Clin.Oncol.2002,20:2417-2428.Handschuh,CandidusS.,LuberB.,etal.Tumour-associatedE-cadherinmutationsaltercellularcellularadhesionandincreasecellularmotility.Oncogene1999,18:4301-4312.Levenberg,S.,A.,KamZ.,etal.p27isinvolvedinN-cadherin-mediatedcontactinhibitionofcellgrowthandS-phaseentry.Oncogene1999,18::869-876.AlteredexpressionofE-cadherininhepatocellularcarcinoma:correlationwithgeneticalteration,beta-cateninexpression,andclinicalfeatures.Hepatology2002,36:692-701Vleminckx,K.,L.,MareelJr.M.,etal.GeneticmanipulationofE-cadherinexpressionbyepithelialtumorcellsrevealsaninvasionsuppressorrole.Cell1991,66::107-119.RiouP,SaffroyR,ComoyJ,etal.Investigationinlivertissuesandcelllinesofthetranscriptionof13genesmappingtothe16q24thatarefrequentlydeletedinhepatocellularcarcinoma.ClinCancerRes.2002Oct;8(10):3178-86.Sato,M.,Mori,Sakurada,A.,etal.TheH-cadherin(CDH13)geneisinactivatedinhumanlungcancer.HumGenet1998,103:96-101Lee,acadherinwithgrowthinhibitoryfunctionsanddiminishedexpressioninhumanbreastNat.Med1996,2:776-782Delgado,J.,etal.LossofH-cadherinproteinexpressioninhumannon-smallcelllungcancerisassociatedwithtumorigenicity.Clin.Cancer22、項目的研究內(nèi)容、研究目標，以及擬解決的關鍵問題一、研究T-cadherin在肝癌中的基因功能將基因?qū)肴笔П磉_的肝癌細胞株HepG2，使其表達分子，研究表達分子的肝癌細胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性生物學特征的變化，證實是否將缺失表達的HepG2細胞和轉(zhuǎn)染后表達的HepG2細胞于皮下接種裸鼠，在裸鼠肝癌模型上進一步證實基因的腫瘤抑制基因功能。研究否在肝癌細胞株存在與在C6細胞中一致的分子機制，即分子通過誘導表達致使肝癌細胞于G2二、在臨床切除的肝癌標本中研究T-cadherin基因失活與肝癌惡性分化程度、轉(zhuǎn)移及復發(fā)等惡性生物學特征的關系，在人肝癌中揭示T-cadherin基因失活與肝癌的惡性生物學特征及預后的關系。研究50例臨床手術切除的肝癌標本及癌周肝組織中（失活與肝癌惡性分化程度、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移（包括合并門靜脈癌栓和衛(wèi)星灶形成）的關系。2復發(fā)或肝外轉(zhuǎn)移的肝癌病例的標本20（失活與肝癌復發(fā)和轉(zhuǎn)移的關系。肝癌型上證實基化-deoxycytidine能的毒副作用。33、擬采取的研究方案及可行性分析一、研究T-cadherin（T-cad）在肝癌中的基因功能的技術路線1.構(gòu)建T-cad表達載體pcDNA3.T-cad↓lipofectinHepG2↓G418分子的陽性克隆↓Westernblot鑒定轉(zhuǎn)染后T-cad蛋白表達↓比較表達T-cad的陽性克隆與不表達T-cad的肝癌細胞的生物學特征:細胞增殖計數(shù)3H標胸腺嘧啶攝取率測定克隆增殖試驗細胞粘試驗細胞聚集試驗的肝癌細胞的生物學特征裸鼠皮下分別接種（-）的肝癌細胞（各20裸鼠的生存期基因在肝癌中腫瘤抑制功能的分子機制陽性和陰性的肝癌細胞的細胞周期變化blot檢測細胞周期調(diào)控蛋白p53,p21,p27,cyclinD的表達變化c.P21G2、基因失活與臨床惡性化程度、轉(zhuǎn)移及復發(fā)等惡性生物學特征關系技術路線收集臨床手術切除標本及50例aPCRb.比較與組織缺失（基因失活）與人發(fā)生關系。c.比較不病例表水平與腫瘤病理級、內(nèi)轉(zhuǎn)移（包括合并門靜脈栓和衛(wèi)星灶形成）的關系。2~5cm之間、無內(nèi)外轉(zhuǎn)移、行根治性切除后采用治療方案別選取切除術后半年內(nèi)復發(fā)或轉(zhuǎn)移以及2年內(nèi)未復發(fā)或轉(zhuǎn)移20例回顧水平與腫瘤復發(fā)和轉(zhuǎn)移關系三、去甲基化藥物及其治療學意義技術路線1.明株HepG2,PLC/PRF/C,和HA22TNGH 缺失采用Herman 已報檢實5’3下5’35’3采用nt平表達缺失2.的與去藥2l）6天后blot;采用殖計數(shù)、3H標胸腺嘧啶攝取率測定、克隆殖試驗、粘附試驗聚集試驗檢測學特征變3.啟高度（數(shù)1x107）分別接種60只裸鼠06只，每組分別按0.5ug、1ug、2ug、4ug、8ug/克體重每日皮下注射5-aa-’e共注射周對照組僅注射生理鹽水，觀察不同組裸鼠腫瘤生長速度、腫瘤轉(zhuǎn)移發(fā)生時間、累及器官及頻率及裸鼠生存期。4、項目特色及創(chuàng)新之處癌表達顯著下降、缺失報導分這些腫瘤中可能扮演腫瘤抑制基因角色。申請人（黃志勇）最新研究首次證實angZhiyongMolecularandCellularBiology2003,23:566-578n研究工作基礎，該研究將進一步揭示分子在肝癌中的基因功能和其分子機制，具有世界先進性和獨創(chuàng)性。Cadherin