大鼠血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)課件

大鼠血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!相關(guān)幫助需要相關(guān)抗體試劑的可以訪問(wèn)Fantibody全球抗體搜索引擎fantibody全球抗體搜索引擎是一個(gè)供公共檢索的抗體數(shù)據(jù)庫(kù)，其抗體信息數(shù)據(jù)來(lái)源于全球范圍的研究機(jī)構(gòu)與商業(yè)公司。該引擎由商品化抗體數(shù)據(jù)庫(kù)與抗體應(yīng)用評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)庫(kù)兩部分組成，以幫助研究者更高效的尋找并評(píng)估該抗體的性能。全球抗體搜索引擎是繼基因與蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)之后更為復(fù)雜的應(yīng)用型檢索平臺(tái)需要相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備、生物試劑、醫(yī)療器械、制藥設(shè)備、醫(yī)藥原料、體外診斷試劑及耗材與技術(shù)服務(wù)信息的，可以訪問(wèn)探生網(wǎng)biomean進(jìn)行咨詢，期待您的加入細(xì)胞培養(yǎng)方法組織塊培養(yǎng)法消化培養(yǎng)法器官培養(yǎng)法細(xì)胞培養(yǎng)方法組織塊培養(yǎng)法消化培養(yǎng)法器官培養(yǎng)法結(jié)合生化和化學(xué)手段把已經(jīng)剪切成較小體積的組織進(jìn)行進(jìn)一步分離，制成細(xì)胞懸液。主要有：胰蛋白酶法膠原酶法EDTA法細(xì)胞培養(yǎng)方法組織塊培養(yǎng)法消化培養(yǎng)法器官培養(yǎng)法體外培養(yǎng)細(xì)胞的分型貼附型:細(xì)胞貼附在支持物上生長(zhǎng)懸浮型：不貼附于支持物，呈懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)用品細(xì)胞培養(yǎng)液、培養(yǎng)基準(zhǔn)備“無(wú)菌”培養(yǎng)試劑的配制Hank’s液(單位g)CaCl20.14KCl0.4KH2PO40.06MgSO4.7H2O0.10NaCl8.0NaHCO30.35Na2HPO4.12H2O0.12D-glucose1.0Phenolred0.01將CaCl2先溶解在100mL的ddH2O中，其它成分溶在750mL的ddH2O中，混勻（用磁力攪拌器攪拌至溶解），定容至1000mL。高壓蒸氣消毒10分鐘，4℃冰箱保存。D-Hank’s液（單位：g）KCl0.40KH2PO40.06NaCl8.0NaHCO30.35Na2HPO4.12H2O0.08Phenolred0.02青霉素、鏈霉素液配制青霉素80萬(wàn)U加Hank’s液至80mL，終濃度1萬(wàn)u/mL鏈霉素100萬(wàn)U（相當(dāng)于1g）加Hank’s液至100mL，終濃度10mg/mL分裝后至-20℃冰箱保存。DMEM培養(yǎng)液900mLddH2O于1000mL容器中，將DMEM粉1包倒入容器中，盛粉袋用50mLddH2O分次沖洗，也倒入容器，磁力攪拌溶解。加NaHCO3調(diào)PH至7.2加青、鏈霉素至終濃度100u/mL和100ug/mL0.22umX50濾膜過(guò)濾（負(fù)壓泵抽吸），4℃冰箱保存。小牛、胎牛血清滅活55℃水浴箱30分鐘，置4℃冰箱保存滅活前放于-20℃冰箱保存待用臨用前加入DMEM液中操作步驟大鼠頸椎脫臼致死固定消毒胸腹部大組織鑷、組織剪切開(kāi)胸腹部皮膚另一組織鑷、組織剪切開(kāi)胸腹部，并切除部分胸壁以利暴露眼科鑷和眼科彎剪分離胸腹主動(dòng)脈并放入盛有Hank’s液的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，轉(zhuǎn)入無(wú)菌室。或先用生理鹽水漂洗，再放Hank’s液中，轉(zhuǎn)入無(wú)菌室眼科直鑷和彎鑷去除血凝塊和血管外膜層。放入另一盛有Hank’s液的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，剪去血管外的小分支用吸管把組織塊轉(zhuǎn)入玻璃培養(yǎng)皿中，均勻貼壁，組織塊的間距為0.5cm蓋好瓶蓋，輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，讓瓶底朝上，并向瓶?jī)?nèi)注入適量培養(yǎng)液，于37oC孵箱內(nèi)放置4～5小時(shí)，使得組織塊干涸，并與瓶底貼附將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn)平放，使組織塊完全浸入培養(yǎng)液中，繼續(xù)靜置3～5天，切勿移動(dòng)。待有細(xì)胞從組織塊周圍游離出后換液注意：初次傳代對(duì)胰酶敏感，加入消化液30s，即消化充分，以后2分鐘左右細(xì)胞消化完成后，用吸管反復(fù)抽吸打散細(xì)胞中止消化：加入DMEM培養(yǎng)液3滴管，用吸管反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞離心：1500X5分鐘倒掉液體，加D-Hank’s液洗一次，再加10mLDMEM培養(yǎng)液，用吸管抽吸吹打分散細(xì)胞，分裝于2個(gè)培養(yǎng)瓶。在倒置纖微鏡下可見(jiàn)圓形細(xì)胞。放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)血管平滑肌細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇凍存時(shí)間：較早期傳代，以防細(xì)胞因?yàn)閭鞔螖?shù)過(guò)多而造成細(xì)胞衰老或發(fā)生改變，以保持實(shí)驗(yàn)條件的一致性。凍存方法：凍存前24小時(shí)更換培養(yǎng)液，凍存時(shí)要將密閉好的凍存管依次放于：4oC2小時(shí)-20oC2.5小時(shí)液氮表面2小時(shí)浸入液氮培養(yǎng)細(xì)胞的鑒定1、形態(tài)學(xué)鑒定：用相差顯微鏡常規(guī)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)以及生長(zhǎng)規(guī)律。并依據(jù)常規(guī)制作電鏡標(biāo)本進(jìn)行觀察

電鏡觀察結(jié)果：細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，胞漿內(nèi)有肌絲，縱向排列，有密區(qū)，具備平滑