NY-T 4225-2022 天然生膠 脂肪酸含量的測(cè)定 氣相色譜法

NY/T４２２５—２０２２前言本文件按照GB/T１１—２０２０?標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第１部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則?的規(guī)定起草.請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容有可能涉及專利.本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任.本文件由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)墾局提出.本文件由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部熱帶作物及制品標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口.本文件起草單位:中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所、海南省天然橡膠質(zhì)量檢驗(yàn)站.本文件主要起草人:王兵兵、潘琪、張福全、黃世清、廖祿生、盧光、李一民.ⅠNY/T４２２５—２０２２天然生膠脂肪酸含量的測(cè)定氣相色譜法警示———使用本文件的人員應(yīng)有正規(guī)實(shí)驗(yàn)室工作的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn).本文件并未指出所有可能的安全問題.使用者有責(zé)任采取適當(dāng)?shù)陌踩徒】荡胧?并保證符合國(guó)家有關(guān)法規(guī)規(guī)定的條件.１范圍本文件描述了天然生膠中脂肪酸含量的測(cè)定方法.本文件適用于天然生膠中肉豆蔻酸、棕櫚酸、十七烷酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、花生酸７的測(cè)定.種脂肪酸含量２規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款.其中,注日期的引用文件,僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件.GB/T６６８２分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T１５３４０天然、合成生膠取樣及其制樣方法３術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義.４原理天然生膠中的長(zhǎng)鏈脂肪酸(碳原子數(shù)≥１４)經(jīng)過甲酯化反應(yīng)后,再進(jìn)行萃取,然后對(duì)萃取物進(jìn)行氣相色譜分析,采用內(nèi)標(biāo)法定量計(jì)算各種脂肪酸的含量.５試劑警示———處理甲苯溶液應(yīng)在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行.除非另有規(guī)定,僅使用確認(rèn)的分析純?cè)噭?５１水,GB/T６６８２,二級(jí).５２甲苯(CAS１０８Ｇ８８Ｇ３),＝０８６６g/cm３,含量不低于９９５％(質(zhì)量分?jǐn)?shù)).ρ５３甲醇(CAS６７Ｇ５６Ｇ１),＝０７９１g/cm３,含量不低于９９５％(質(zhì)量分?jǐn)?shù)).ρ５４濃硫酸(CAS７６６４Ｇ９３Ｇ９),＝１８４g/cm,含量不低于９８０％(質(zhì)量分?jǐn)?shù)).３ρ５５無水硫酸鈉(CAS７７５７Ｇ８２Ｇ６),＝２６８g/cm３,含量不低于９９０％(質(zhì)量分?jǐn)?shù)).ρ５６碳酸氫鈉(CAS１４４Ｇ５５Ｇ８),＝２１６g/cm３,含量不低于９９８％(質(zhì)量分?jǐn)?shù)).ρ５７二氯甲烷(CAS７５Ｇ０９Ｇ２),色譜純,＝１３２５ρg/cm,含量不低于９９９％(質(zhì)量分?jǐn)?shù)),含５０mg/kg~３/１５０mgkg異戊烯穩(wěn)定劑.５８脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品,肉豆蔻酸(C１４H２８０２,CAS５７６７７Ｇ５２Ｇ８)、十五烷酸(C１５H３０O２,CAS１００２Ｇ８４Ｇ２)(內(nèi)標(biāo)物)、棕櫚酸(C１６H３２O２,CAS５７Ｇ１０Ｇ３)、十七烷酸(C１７H３４O２,CAS５０６Ｇ１２Ｇ７)、硬脂酸(C１８H３６O２,CAS５７Ｇ１１Ｇ４)、油酸(C１８H３４０２,CAS１１２Ｇ８０Ｇ１)、亞油酸(C１８H３２O２,CAS６０Ｇ３３Ｇ３)、花生酸(C２０:０,CAS５０６Ｇ３０Ｇ９),純度不低于９９％(質(zhì)量分?jǐn)?shù)).５９甲苯/甲醇共沸混合溶劑,將２７６mL甲苯(５２)置于１０００mL單標(biāo)線容量瓶(６９)中,并用甲醇(５３)稀釋至１０００mL,制得甲苯/甲醇共沸混合溶劑.１??

NY/T４２２５—２０２２５１０飽和碳酸氫鈉溶液,稱?。叮礸碳酸氫鈉(５６),精確至０１g,置于５００mL廣口錐形燒瓶(６８)中,加入４００mL溫度為６０℃的蒸餾水,攪拌溶解冷卻后,制得飽和碳酸氫鈉溶液.５１１內(nèi)標(biāo)十五烷酸溶液,準(zhǔn)確稱取(１２５０±０００１)g的十五烷酸標(biāo)準(zhǔn)品,置于２５０mL單標(biāo)線容量瓶(６９)中,并用甲苯/甲醇共沸混合溶劑(５９)稀釋至２５０mL,制得內(nèi)標(biāo)十五烷酸溶液.６儀器設(shè)備實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器及以下儀器設(shè)備.６１實(shí)驗(yàn)室開煉機(jī).６２水浴鍋,(７５±０２)℃.６３電子天平,精確至０１mg.６４氣相色譜儀,帶有氫火焰離子化FID檢測(cè)器.６５蛇形回流冷凝器,長(zhǎng)度為３００mm,磨口為２４/４０.６６圓底燒瓶,容量為１００mL,磨口為２４/４０.６７錐形分液漏斗,容量為２５０mL.６８廣口錐形燒瓶,容積為５００mL.６９單標(biāo)線容量瓶,容量分別為５０mL、２５０mL和１０００mL.６１０高形燒杯,容量為１００mL.６１１玻璃止沸珠.６１２一次性無菌注射針管,規(guī)格為１０mL.６１３有機(jī)相濾膜,材質(zhì)為尼龍６６,孔徑為０４５μm.７試驗(yàn)步驟警示———甲酯化萃取操作應(yīng)在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行.７１取樣和試樣制備按GB/T１５３４０的規(guī)定取樣并對(duì)生膠樣品進(jìn)行均勻化.稱取均勻化樣品(１０±２)g,在()下２７±３℃通過實(shí)驗(yàn)室開煉機(jī)(６１)過輥１０次;每次過輥時(shí),應(yīng)將膠片打卷或?qū)φ?調(diào)節(jié)輥距,使膠片最終厚度約２５mm,再剪成小細(xì)條(約１mm×１０mm)狀試樣待測(cè)備用.進(jìn)行雙份平行測(cè)定.７２試樣的甲酯化反應(yīng)準(zhǔn)確稱取均勻化處理后的細(xì)條狀生膠試樣３０g(m０)(精確至０１mg),置于１００mL圓底燒瓶中,然后依次加入３個(gè)玻璃止沸珠()、６１１５５mL甲苯/甲醇共沸混合溶劑(５９)、１mL內(nèi)標(biāo)十五烷酸溶液(５１１)和０５ml濃硫酸(５４),再將圓底燒瓶(６６)置于水浴鍋(６２)中并將其與蛇形回流冷凝器(６５)連接(調(diào)整冷凝水流速,以確?；亓魍耆?,打開水浴鍋使試樣溶液在７５℃下回流反應(yīng)１８h,得到試樣的甲酯化溶液.回流冷凝器裝置如圖１所示.７３脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品的甲酯化反應(yīng)準(zhǔn)確稱取每種脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品各００５g(mi)(精確到０１mg),置于圓底燒瓶中作為校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品,然后依次加入標(biāo)引序號(hào)說明:３個(gè)玻璃止沸珠(６１１５５mL甲苯/甲醇共沸混合溶劑１———冷凝水進(jìn)口;２———冷凝水出口.)、(５９)、１mL內(nèi)標(biāo)十五烷酸溶液(５１１)和０５mL濃硫酸圖１回流冷凝器裝置圖(５４),在７５℃下的水浴鍋內(nèi)回流反應(yīng)１８h,得到校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)２??NY/T４２２５—２０２２品混合物的甲酯化溶液.７４甲酯化產(chǎn)物的萃取將７２和７３所得到的甲酯化溶液分別轉(zhuǎn)移至高型燒杯(６１０)中,加熱濃縮至２０mL左右,加入６７５７１０mL飽和碳酸氫鈉溶液(５１０),搖勻倒入２５０mL錐形分液漏斗();將１０mL二氯甲烷()和２mL水加入燒杯(促進(jìn)溶液快速萃取分層),潤(rùn)洗后倒入分液漏斗.待溶液完全分層后,用干凈的１００mL高形燒杯回收底相溶液(P１),再次加入１０mL二氯甲烷和２mL水進(jìn)行二次萃取,用同一只燒杯回收二次萃取溶液的底相溶液(P２),得到混合底相溶液(P１＋P２)后,再加入５g無水硫酸鈉(５５),旋轉(zhuǎn)燒杯確保水分被完全吸干.將脫水后的混合底相溶液轉(zhuǎn)移至５０mL單標(biāo)線容量瓶(６９)中,使用二氯甲烷稀釋至刻度,靜置澄清后,用１０mL一次性無菌注射針管(６１２)抽取約９mL澄清液,取下注射針頭,換上０４５μm有機(jī)相濾膜(６１３),推動(dòng)注射器,分別過濾并收集所得試樣與脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品的萃取待測(cè)溶液.７５氣相色譜分析７５１氣相色譜參考條件７５１１色譜柱,甲基聚硅氧烷非極性毛細(xì)管柱.７５１２載氣,氮?dú)?流速１mL/min,分流比２５∶１.７５１３進(jìn)樣口溫度,２３０℃.７５１４檢測(cè)器溫度,２５０℃.７５１５柱溫箱溫度,初始溫度１５０℃,以２℃/min升溫至２１０℃后保持５min,再以５０℃/min升溫至２３０℃后保持５min.７５１６進(jìn)樣量,１μL.７５２標(biāo)準(zhǔn)品的測(cè)定移取２mL校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品混合物萃取待測(cè)溶液(７４)至進(jìn)樣瓶,按７５１的色譜條件進(jìn)行氣相色譜檢測(cè),得到內(nèi)標(biāo)十五烷酸甲酯的峰面積(An),各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品脂肪酸甲酯的峰面積(Ai)及各脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品的相應(yīng)出峰時(shí)間(見附錄A).７５３樣品的測(cè)定移?。瞞L試樣萃取待測(cè)溶液(７４)至進(jìn)樣瓶,每個(gè)試樣萃取液使用氣相色譜法進(jìn)行雙份平行測(cè)定,得到生膠試樣萃取溶液中內(nèi)標(biāo)十五烷酸甲酯的峰面積(Bn),各個(gè)脂肪酸甲酯的峰面積(Bi).通過與校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品混合物圖譜比對(duì)定性,與內(nèi)標(biāo)物十五烷酸的峰面積比對(duì)定量,計(jì)算出試樣中各個(gè)脂肪酸甲酯的含量(Wi).８結(jié)果表示８１標(biāo)準(zhǔn)品的校準(zhǔn)響應(yīng)因子按式()１計(jì)算各標(biāo)準(zhǔn)品脂肪酸甲酯的響應(yīng)因子(Rfi).Rfi＝An×mi()１Ai×mn式中:Rfi———脂肪酸甲酯i的響應(yīng)因子;An———校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品混合物萃取溶液中內(nèi)標(biāo)十五烷酸甲酯的峰面積;mi———校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品混合物萃取溶液中脂肪酸甲酯i的質(zhì)量數(shù)值,單位為克();gAi———校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品混合物萃取溶液中脂肪酸甲酯i的峰面積;mn———校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品混合溶液中內(nèi)標(biāo)十五烷酸甲酯的質(zhì)量數(shù)值,單位為克(g).８２試樣中每種脂肪酸的含量生膠試樣中脂肪酸i的含量(Wi),按式()２計(jì)算.Wi＝Bi×mn×Rfi()２Bn×m０式中:３??NY/T４２２５—２０２２Wi———生膠試樣中脂肪酸i的含量數(shù)值,單位為百分號(hào)(％);Bi———生膠試樣萃取溶液中脂肪酸甲酯i的峰面積;mn———生膠試樣萃取溶液中內(nèi)標(biāo)十五烷酸甲酯的質(zhì)量數(shù)值,單位為克(g);Rfi———脂肪酸甲酯i的響應(yīng)因子;Bn———生膠試樣萃取溶液中內(nèi)標(biāo)十五烷酸甲酯的峰面積;m０———生膠試樣的質(zhì)量數(shù)值,單位為克(g).雙份平行測(cè)定結(jié)果的相對(duì)偏差不應(yīng)大于１０％.試驗(yàn)結(jié)果以雙份平行測(cè)定結(jié)果的平均值表示,數(shù)值精確至小數(shù)點(diǎn)后兩位.８３試樣中總脂肪酸的含量生膠試樣中脂肪酸的總含量(W),按式()３計(jì)算.∑Wi()３W＝式中:W———生膠試樣中脂肪酸的總含量數(shù)值,單位為百分號(hào)(％);Wi———生膠試樣中脂肪酸i的含量數(shù)值,單位為百分號(hào)(％).雙份平行測(cè)定結(jié)果的相對(duì)偏差不應(yīng)大于１０％.試驗(yàn)結(jié)果以雙份平行測(cè)定結(jié)果的平均值表示,數(shù)值精確至小數(shù)點(diǎn)后兩位.９試驗(yàn)報(bào)告試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)包括下列內(nèi)容:a)本文件編號(hào);b)標(biāo)識(shí)樣品的所有詳細(xì)內(nèi)容;c)測(cè)定結(jié)果;d)可能影響試驗(yàn)結(jié)果的任何異常現(xiàn)象;e)試驗(yàn)日期.４??

NY/T４２２５—２０２２附錄A(資料性)８種脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液參考圖譜標(biāo)引序號(hào)說明:１———肉豆蔻酸;２———十五烷酸;３———棕櫚酸;４———十七烷酸;５———亞油酸;６———油酸;７———硬脂酸;８———花生酸.圖A１８種脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液參考色譜圖５??NY/T４２２５—２０２２參考文獻(xiàn)[]１IchiharaK,FukubayashiYPreparationoffattyacidmethylestersforgasＧliquidchromatograp