高效液相色譜法測定鄰苯二甲酸酯試驗報告VIP

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1553607胡藝蕾

試驗時間：2023年4月1日試驗溫度：19.0℃

一、試驗目的

1、了解高效液相色譜儀的組成及其工作原理和基本操作。2、對鄰苯二甲酸酯進行分開和測定。

3、探究不同滾動相及不同滾動相比例對流速、柱壓、保存時間及分開度的影響。4、了解液相色譜法定量測定的原理。

二、試驗原理

1、試驗采用的反相液固吸附色譜法，其分開機理是：當滾動相通過吸附劑時，在吸附劑（固體相）表面發(fā)生了溶質分子取代吸附劑上的溶劑分子的吸附作用。固體相為非極性分子，如十八烷基鍵合相，滾動相為極性分子。

2、組分分子與吸附劑之間作用力的強弱決定它的保存時間。溶質分子官能團的性質和分子結構的空間效應都會影響其出峰的順序。本次試驗為鄰苯二甲酸酯，其分子官能團都一致，但由于DMP其官能團相鄰的烷基較小，導致其保存值最小，因此出峰順序為：DMP(鄰苯二甲酸二甲酯)>DEP(鄰苯二甲酸二乙酯)>DBP.(鄰苯二甲酸二丁酯)。

3、在吸附色譜中，滾動相的洗脫能力與溶劑的極性有關，極性越大，洗脫強度也越大。本次試驗使用的三個滾動相的極性大小為：水>乙腈>甲醇。尋常選擇二元混合溶劑作為滾動相。4、定量分析中，定量峰與其他峰之間的分開程度稱為分開度R:

尋常用塔板數(shù)n來描述色譜的柱效：

三、試驗儀器與試劑1、儀器

Agilent1260高效液相色譜儀：脫氣機：真空室內半透膜管路，對滾動相進行脫氣四元泵：二元泵各控制一種溶劑

可設置的流速范圍：0.001–10mL/min0.001mL/min步進UV檢測器：用于檢測通過樣品后的紫外光

類型：雙光束光路設計

光源：氘燈波長范圍：190–600nm

手動進樣器：進樣20μL

色譜柱：填料:十八烷（適合中性、弱酸堿）4.6×100mm,3.5μm2、試劑

滾動相：純水、甲醇、乙腈樣品：DMP、DEP、DBP

四、試驗步驟

1、開啟電腦，開啟脫氣機、泵、檢測器等的電源，啟動軟件。

2、預先脫氣（直到導管中無氣泡），設定波長：220nm。3、設定流速、滾動相比例等參數(shù)，選擇適合的滾動相。4、進樣閥柄置于“LOAD〞，進樣針用乙醇洗滌2-3次，取樣，進樣，將進樣閥扳至“INJECT〞。5、保存并處理數(shù)據(jù)。

五、試驗結果1、樣品：DMP1:20水溶液20μL滾動相的比例為：高純水：30%乙腈：70%流速：1.00ml/min

2、樣品：DMP1:10水溶液20μL滾動相的比例為：高純水：30%乙腈：70%流速：1.00ml/min

3、樣品：DMP1:20水溶液10μL滾動相的比例為：高純水：30%乙腈：70%流速：1.00ml/min

比較1和2的峰面積和峰高可以發(fā)現(xiàn)，在進量一定時，峰面積和峰高與樣品的濃度成正比。比較1和3可發(fā)現(xiàn)，在樣品濃度一致時，峰面積和峰高與樣品的進量成正比。因此我們可以得出結論，峰面積和峰高與參與樣品的物質的量成正比，這也是液相色譜法進行定量分析的依據(jù)。對這三組數(shù)據(jù)畫出標準曲線：

250020001500100050000.000.501.001.502.002.50y=151.3x+36.69R2=0.997標準曲線圖y=1204.x-129.3R2=0.998峰面積峰高由標準曲線可以看出：

峰面積和峰高與樣品的量基本成線性關系，且峰面積的相關性比峰高的相關性要高，更適合用于定量分析。

4、樣品：混合樣品1:10水溶液20μL滾動相的比例為：高純水：30%甲醇：70%流速：1.00ml/min

計算分開度和塔板數(shù)

R12=2.292-1.519/(0.0995+0.1174)/2=7.128R23=11.259-2.292/(0.3067+0.1174)/2=42.29nDMP=16*(1.519/0.0995)^2=3.729E3nDEP=16*(2.292/0.1174)^2=6.098E3nDBP=16*(11.259/0.3067)^2=2.156E4

5、樣品：混合樣品1:10水溶液20μL滾動相的比例為：高純水：30%乙腈：70%流速：1.00ml/min

計算分開度和塔板數(shù)

R12=5.087R23=33.59

nDMP=2.415E3nDEP=1.052E4nDBP=2.408E4

6、樣品：混合樣品1:10水溶液20μL滾動相的比例為：高純水：30%乙腈：70%流速：0.70ml/min

計算分開度和塔板數(shù)

RDMP=2.781-2.088/(0.1200+0.0993)/2=6.320RDEP=8.004-2.781/(0.0993+0.2087)/2=33.92nDMP=16*(2.088/0.1200)^2=3.633E3nDEP=16*(2.781/0.0993)^2=1.255E4nDBP=16*(8.004/0.2087)^2=2.353E4

7、樣品：混合樣品1:10水溶液20μL滾動相的比例為：高純水：10%乙腈：90%流速：1.00ml/min

計算分開度和塔板數(shù)R12=1.680R23=9.123

nDMP=1.454E3nDEP=2.815E3nDBP=1.353E4

根據(jù)上述結果我們可以發(fā)現(xiàn)，DMP和DEP的分開度比DEP和DBP的分開度要小。

比較結果4和5可以發(fā)現(xiàn)，使用乙腈的保存時間較甲醇短，這說明洗脫能力乙腈>甲醇。但是使用甲醇的分開度較使用乙腈的分開度高。

比較結果5和6可以發(fā)現(xiàn)，減小流速會增加保存時間，但同時分開度會增加，塔板數(shù)也會增加。

比較結果5和7可以發(fā)現(xiàn)，增加二元滾動相中乙腈的比例，會使得保存時間縮短，但由于對DEP和DBP的影響要大于對DMP的影響，因此DMP和DEP的峰發(fā)生了重疊，導致分開度下降

六、思考與探討

1、為什么要預先脫氣？

①輸液量能夠均勻確鑿，壓力波動??；②保存時間及色譜峰面積的重現(xiàn)性會更好；③氣泡會在譜圖中出現(xiàn)尖峰，脫氣后能使基線穩(wěn)定；④保護色譜柱，防止填料氧化；2、為什么使用二元溶液作為滾動相？

利用不同比例滾動相對分開度和出峰時間的影響（往往是相反的作用）進行梯度洗脫。通過程序設定，不同時間（不同物質）來設定滾動相中甲醇和水的比例，既達到較好的分開度，又能縮短不必要的時間4、為什么會前伸/拖尾？

1、色譜柱被污染2、樣品過載3、樣品溶劑過強

5、操作注意：

1.本試驗采用紫外來做檢測器，由于查閱資料可知鄰苯二甲酸酯的最大