藥物分析第十五章甾體激素類藥物分析

激素（Hormone，荷爾蒙）是人體內(nèi)各種內(nèi)分泌腺所分泌的一種生物活性物質(zhì)。激素作用于特定的稱為靶器官的組織、細(xì)胞上而發(fā)揮作用。如果激素分泌出現(xiàn)平衡失調(diào)，可使人體發(fā)生病變，如甲亢、糖尿病等。第一頁，共60頁。

概述甾體激素類藥物均具有環(huán)戊烷駢多氫菲母核。第二頁，共60頁。第一節(jié)基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì)按照C10,C13,C17取代基不同分類第三頁，共60頁。按藥理作用分類第一節(jié)基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第四頁，共60頁?！?–3–酮基（紫外吸收）天然皮質(zhì)激素：氫化可的松孕甾烷母核有21個(gè)碳原子C17–醇酮基（還原性）孕甾烷母核第一節(jié)基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第五頁，共60頁。311172021氫化可的松(hydrocortisone)醋酸地塞米松(dexamethasoneacetate)16α-甲基21-酯化17α-羥基9α-氟3-酮1,2-雙鍵11β-羥基20-酮第一節(jié)基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第六頁，共60頁。第一節(jié)基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第七頁，共60頁。A環(huán)Δ4-3-酮基,為共軛體系,在波長240nm附近有紫外吸收,部分藥物在C1-C2之間有雙鍵,也有紫外吸收腎上腺皮質(zhì)激素類藥物結(jié)構(gòu)特征ABDC1234第一節(jié)基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第八頁，共60頁。C17位上為α-醇酮基,具有還原性.多數(shù)藥物有C17-α-羥基,部分藥物α-醇羥基與酸成酯.第一節(jié)基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第九頁，共60頁。部分藥物的C6或C9位由鹵素取代,呈相應(yīng)的鹵化物反應(yīng)第一節(jié)基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第十頁，共60頁。部分藥物C11位上有羥基或酮基取代第一節(jié)基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第十一頁，共60頁。甲睪酮(methyltestosterone)丙酸睪酮(testosteronepropionate)苯丙酸諾龍(nandrolonephenylpropionate)17β-羥基第一節(jié)基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第十二頁，共60頁。甲睪酮(methyltestosterone)A環(huán)Δ4-3-酮基C17位上為羥基,部分藥物的羥基被酯化雄性激素上的母核為19個(gè)碳原子,蛋白同化激素在C10位上一般無角甲基,母核只有18個(gè)碳原子第一節(jié)基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第十三頁，共60頁。A環(huán)Δ4-3-酮基C17位上有甲酮基或乙炔基.

孕甾烷母核有21個(gè)碳原子

口服被迅速破壞失效，只能肌注△4–3–酮基第一節(jié)基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第十四頁，共60頁。黃體酮(progesterone)醋酸甲地孕酮(megestrolacetate)米非司酮(mifepristone)第一節(jié)基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第十五頁，共60頁。天然的雌性激素：雌二醇

雌甾烷母核有18個(gè)碳原子

A環(huán)為苯環(huán)，C3位上有酚羥基，C17位上有羥基

結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，口服無效第一節(jié)基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第十六頁，共60頁。結(jié)構(gòu)修飾

炔雌醇

戊酸雌二醇

苯甲酸雌二醇乙炔基引入，使仲醇變叔醇，增加空間位阻，阻礙酶對藥物的氧化代謝，可口服17位羥基酯化，酯在體內(nèi)緩慢水解，延效3位羥基酯化，酯在體內(nèi)緩慢水解，延效可口服高效長效第十七頁，共60頁。人工合成代用品：非甾體化合物己烯雌二酚高效、長效第一節(jié)基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第十八頁，共60頁。△4–3–酮C17–α–醇酮基C17–β–羥基C17–甲酮基A環(huán)為3–OH苯環(huán)腎上腺皮質(zhì)激素++雄性與蛋白同化激素++雌性激素++孕激素++鑒別反應(yīng)UV、羰基試劑、氨基脲反應(yīng)還原性（堿性酒石酸酮、氨制AgNO3）可成酯與亞硝基鐵氰化鈉、間二硝基苯反應(yīng)UV、與重氮苯磺酸鹽反應(yīng)特殊官能團(tuán)與分析方法第十九頁，共60頁。第二節(jié)理化性質(zhì)與鑒別試驗(yàn)白色至微黃色粉末或結(jié)晶性粉末。三氯甲烷中微溶至易溶；甲醇或乙醇中微溶乙醚或植物油極微溶水中不溶1.性狀與溶解度第二十頁，共60頁。第二節(jié)理化性質(zhì)與鑒別試驗(yàn)2、熔點(diǎn)一具有鑒定的意義；二則可以反映藥物的純度。炔諾酮：熔點(diǎn)202～208℃3.比旋度甾體激素多具有手型碳原子，具有旋光性。4.吸收系數(shù)第二十一頁，共60頁。第二節(jié)鑒別試驗(yàn)（一）強(qiáng)酸的呈色反應(yīng)強(qiáng)酸：H2SO4、H3PO4、HClO4、HCl原理：酮基先質(zhì)子化，形成正碳離子，再與HSO4-作用呈色。甾體激素類藥物硫酸、磷酸、高氯酸、鹽酸呈色第二十二頁，共60頁。顯色熒光加水稀釋氫化可的松棕黃色至紅色

綠色黃色至橙黃色炔雌醇橙紅黃綠玫紅絮狀↓炔雌醚橙紅黃綠紅色↓潑尼松黃→橙—黃色漸變藍(lán)綠色潑尼松龍深紅—灰色絮狀↓地塞米松淡紅棕色—顏色消失苯甲酸雌二醇黃綠色藍(lán)色淡橙色與硫酸顯色反應(yīng)第二十三頁，共60頁。1.C17-α-醇酮基——還原性A.呈色反應(yīng)C17-α-醇酮基四氮唑鹽OH-呈色B.沉淀反應(yīng)C17-α-醇酮基氨制硝酸銀銀鏡反應(yīng)C17-α-醇酮基堿性酒石酸銅Cu2O↓（多倫試液）（斐林試液）第二十四頁，共60頁。2.C3–酮基和C20–酮基甾酮類2,4-二硝基苯肼呈色異煙肼、硫酸苯肼異煙腙（黃色）睪酮異煙雙腙（黃色）黃體酮第二十五頁，共60頁。成腙反應(yīng)中

C20–酮基受C18甲基的空間位阻影響，反應(yīng)較慢，需加熱或較長時(shí)間放置，才完成反應(yīng)。

C3–酮基空間位阻最小，最易起反應(yīng)，室溫下生成單腙。第二十六頁，共60頁。3.甲酮基或活潑亞甲基藍(lán)紫色黃體酮適用：具有甲酮基或活潑亞甲基的甾體激素類藥物。能與亞硝基鐵氰化鈉、間二硝基酚、芳香醛反應(yīng)呈色。黃體酮專屬性反應(yīng)。黃體酮其他甾體亞硝基鐵氰化鈉藍(lán)紫色淡橙色或不顯色又稱為堿性硝普鈉反應(yīng)。堿性甲酮基：第二十七頁，共60頁。有機(jī)氟Fˉ有機(jī)破壞有機(jī)氯4、鹵元素的呈色反應(yīng)茜素氟藍(lán)—硝酸亞鈰硝酸—硝酸銀呈藍(lán)紫色

ClˉAgCl氯原子結(jié)合在母核環(huán)上第二十八頁，共60頁。適用：雌激素類藥物。5.酚羥基的呈色反應(yīng)能與重氮苯磺酸發(fā)生偶合反應(yīng)，生成紅色偶氮染料。JP利用此反應(yīng)鑒別苯甲酸雌二醇第二十九頁，共60頁。6.乙炔基↓炔雌醇白含炔基的甾體激素，炔諾酮，炔雌醇等第三十頁，共60頁。原理：一些甾體激素類藥物具有醋酸酯、戊酸酯及已酸酯的結(jié)構(gòu)，可先行水解，根據(jù)水解產(chǎn)物來鑒別。7、酯的水解產(chǎn)物的反應(yīng)適用：本類藥物C3、C17或C21位上羥基的酯結(jié)果：醋酸酯水解后生成的醋酸可與乙醇反應(yīng)，生成有香氣醋酸乙酯。戊酸或己酸酯類水解后可生成有特臭的戊酸或己酸，進(jìn)行鑒別。第三十一頁，共60頁。△４-3-酮240nm左右280nm左右苯環(huán)其他共軛結(jié)構(gòu)200-760nm有特征吸收?？梢?guī)定最大吸收波長、A、吸收系數(shù)、A大/A小。原理方法第三十二頁，共60頁。

曲安息龍丙酸倍氯米松溶劑甲醇乙醇濃度20μg/ml20μg/ml結(jié)果判斷在238nm處有最大吸收在239nm處有最大吸收，A為0.57～0.60，在239nm與263nm處的吸收度比值為2.25～2.45示例第三十三頁，共60頁。結(jié)構(gòu)特征：酚羥基

C17–OHC17–乙炔基例:炔雌醇第三十四頁，共60頁。1505cm-13505cm-13300cm-1ν1590cm-13610cm-1酚羥基醇羥基1615cm-1苯環(huán)的骨架振動(dòng)第三十五頁，共60頁。eg2：黃體酮結(jié)構(gòu)特征：△４-3-酮C17-酮基第三十六頁，共60頁。1700cm-1C=O20位酮基1665cm-13位酮基1615cm-1870cm-1C-H雙鍵第三十七頁，共60頁。TLC法HPLC應(yīng)用甾體激素類藥物原料與制劑的鑒別甾體激素類藥物原料與制劑的鑒別（如：醋酸曲安奈德軟膏、醋酸氟輕松軟膏）方法對照品法對照品法結(jié)果判斷要求供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色和位置與對照品溶液的主斑點(diǎn)相同要求在含量測定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品峰的tR與對照品峰的tR一致第三十八頁，共60頁。第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查

雜質(zhì)來源：原料、中間體、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物以及試劑和溶劑。

其他甾體：有些雜質(zhì)與該甾體激素藥物結(jié)構(gòu)類似，也具有一定的藥理作用而又互不相同，因此在甾體激素類藥物的質(zhì)量控制中，“其他甾體”的限度檢查顯得很重要。第三十九頁，共60頁。檢查方法：判定方法：規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色1、TLC法（自身對照法）eg：氫化可的松中其他甾體的檢查供試液：本品+氯仿-甲醇（9：1）濃度：3.0mg/ml

對照液：供試液（3.0mg/ml）+氯仿-甲醇（9：1）60μg/ml

層析：供試液對照液點(diǎn)樣、展開、斑點(diǎn)檢出。判斷：供試液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得多于3個(gè)，其顏色與對照液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。第四十頁，共60頁。氫化可的松中其他甾體檢查對照品60μg/ml供試品3.0mg/ml第四十一頁，共60頁。≤圖A中峰1面積的四分之三判定方法：規(guī)定雜質(zhì)峰數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)峰面積2、HPLC法（自身對照法）第四十二頁，共60頁。

雜質(zhì)來源：地塞米松、氟輕松和曲安奈得等甾體激素類藥物，在生產(chǎn)中使用二氧化硒(SeO2)脫氫工藝，藥物可能引入雜質(zhì)硒。

方法：

結(jié)果判斷：供試品溶液的吸光度不得大于硒對照溶液的吸光度（0.005％～0.01％）

。第四十三頁，共60頁。eg：地塞米松磷酸鈉方法：GC色譜法雜質(zhì)來源：地塞米松磷酸鈉生產(chǎn)中，使用大量甲醇和丙酮。結(jié)果判斷：不得出現(xiàn)甲醇峰，甲醇含量≤0.3％丙酮規(guī)定不得過≤5.0%第四十四頁，共60頁。方法：對照品（KH2PO4），磷鉬酸比色法

雜質(zhì)來源：地塞米松磷酸鈉生產(chǎn)過程中，由磷酸酯化時(shí)殘存的過量磷酸鹽。結(jié)果判斷：供試品溶液的吸光度不得大于對照溶液的吸光度。740nm原理：供試液+鉬酸銨+1-氨基-2-萘酚-4-磺酸鉬藍(lán)第四十五頁，共60頁。第四節(jié)含量測定第四十六頁，共60頁。有色甲瓚四氮唑鹽醇酮基-a-17COH-（一）四氮唑鹽比色法（1）原理：腎上腺皮質(zhì)激素類C17-α－醇酮基強(qiáng)還原性。氯化三苯四氮唑（TTC）三苯甲瓚↓深紅第四十七頁，共60頁。25℃氫氧化四甲基銨對照液供試液ATTC40～45′暗（2）方法：對照品法（3）影響因素A.基團(tuán)對反應(yīng)速度的影響C11=O＞C17－OHC21－OH未酯化＞C21-OH酯化第四十八頁，共60頁。B、溶劑和水分的影響

以無水無醛的乙醇為溶劑，水含量大時(shí)，呈色減慢，不超過5％對結(jié)果沒有影響。C、O2與光線的影響避光、隔絕空氣、快速、充N2除去O2D、堿的種類及加入順序以氫氧化四甲基銨的結(jié)果最佳加入順序：皮質(zhì)激素溶液四氮唑鹽堿試液皮質(zhì)激素與堿接觸會(huì)部分分解第四十九頁，共60頁。E.溫度與時(shí)間室溫（25℃）反應(yīng)40～45minF.干擾物的影響選擇性的測定C17位未被氧化和降解的藥物氧化物和水解產(chǎn)物不發(fā)生反應(yīng)第五十頁，共60頁。1.原理異煙腙（黃）HCl420nm（二）異煙肼比色法C3-酮基+異煙肼H2O腎上腺皮質(zhì)激素雄性激素蛋白同化激素孕激素第五十一頁，共60頁。2.方法：對照品法60℃異煙肼無水甲醇對照液供試液A暗60′酸性第五十二頁，共60頁。3.影響因素A.反應(yīng)速度（反應(yīng)專屬性）C3=O＞C17=O、C20=OC11=O不反應(yīng)B.溶劑的選擇異煙肼鹽酸鹽→受溶解度的影響無水甲醇無水乙醇甲醇對試劑的穩(wěn)定性好甲醇呈色強(qiáng)度較無水乙醇中高乙醇對植物油的溶解度小第五十三頁，共60頁。C.水分、溫度、O2與光線的影響

含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓

O2與光線對反應(yīng)的影響不大

t℃↑→ν↑D.酸的種類和濃度及異煙肼的濃度酸:異煙肼=2:1吸光度最大第五十四頁，共60頁。Δ4-3-酮基的甾體激素在室溫不到1h即可定量地與酸性異煙肼反應(yīng)；