細(xì)胞生物學(xué)第二章細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)

第二章

細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)METHODSANDTECHNIQUES現(xiàn)在是1頁\一共有103頁\編輯于星期三對細(xì)胞生命活動的研究成為當(dāng)今生命科學(xué)發(fā)展的瓶頸

細(xì)胞生命活動突變體分析突變體分析蛋白修飾分析基因表達(dá)多肽定性分析生物信息學(xué)序列測定雙向電泳分析DNA分離與克隆機(jī)器人技術(shù)

(robotics)

功能基因組學(xué)蛋白質(zhì)分離與制備蛋白質(zhì)組學(xué)現(xiàn)在是2頁\一共有103頁\編輯于星期三進(jìn)行初步觀察形成可驗(yàn)證的假說設(shè)計(jì)對照試驗(yàn)收集資料解釋結(jié)果作出合理結(jié)論查閱已有知識生物學(xué)研究模式生物不同物種享有共同分子機(jī)制現(xiàn)在是3頁\一共有103頁\編輯于星期三本章內(nèi)容提要第一節(jié)顯微技術(shù)一、光學(xué)顯微鏡二、電子顯微鏡三、顯微操作技術(shù)第二節(jié)生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)第三節(jié)細(xì)胞分離技術(shù)第四節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞雜交現(xiàn)在是4頁\一共有103頁\編輯于星期三第一節(jié)顯微技術(shù)光學(xué)顯微鏡與電子顯微鏡現(xiàn)在是5頁\一共有103頁\編輯于星期三—、光學(xué)顯微鏡現(xiàn)在是6頁\一共有103頁\編輯于星期三（一）普通光學(xué)顯微鏡1.構(gòu)成：①照明系統(tǒng)②光學(xué)放大系統(tǒng)③機(jī)械裝置2.原理：經(jīng)物鏡形成倒立實(shí)像，經(jīng)目鏡放大成虛像?，F(xiàn)在是7頁\一共有103頁\編輯于星期三StructureofMicroscope現(xiàn)在是8頁\一共有103頁\編輯于星期三LightPathwayofMicroscope現(xiàn)在是9頁\一共有103頁\編輯于星期三3.分辨力：指分辨物體最小間隔的能力。即區(qū)分開兩個質(zhì)點(diǎn)間的最小距離。光學(xué)顯微鏡的分辨力R=0.61λ/N．A．其中λ為入射光線波長；N．A．為鏡口率

＝ｎsinα/2；n=介質(zhì)折射率；α=鏡口角（樣品對物鏡鏡口的張角）。現(xiàn)在是10頁\一共有103頁\編輯于星期三表一、幾種介質(zhì)的折射率現(xiàn)在是11頁\一共有103頁\編輯于星期三顯微鏡的幾個光學(xué)特點(diǎn)：介質(zhì)折射率越接近鏡頭玻璃的（1.7）越好；sinα/2的最大值小于1；鏡口率最大約1.6；普通光線的波長為400~700nm，光鏡分辨力約為0.2μm，人眼的分辨力為0.2mm，因此顯微鏡的最大有效倍數(shù)為1000X?，F(xiàn)在是12頁\一共有103頁\編輯于星期三（二）熒光顯微鏡Fluorescencemicroscope特點(diǎn)：光源為短波光；有兩個特殊的濾光片；照明方式通常為落射式?，F(xiàn)在是13頁\一共有103頁\編輯于星期三現(xiàn)在是14頁\一共有103頁\編輯于星期三現(xiàn)在是15頁\一共有103頁\編輯于星期三Fluorescenceimage,DNAinblueandMicrotubulesingreen用于觀察能激發(fā)出熒光的結(jié)構(gòu)。用途：免疫熒光觀察、基因定位、疾病診斷?，F(xiàn)在是16頁\一共有103頁\編輯于星期三（三）激光共聚焦掃描顯微境

Laserconfocalscanningmicroscope,LCSM用激光作光源，逐點(diǎn)、逐行、逐面快速掃描；能顯示細(xì)胞樣品的立體結(jié)構(gòu)；分辨力是普通光學(xué)顯微鏡的3倍；用途類似熒光顯微鏡，但能掃描不同層次，形成立體圖像?，F(xiàn)在是17頁\一共有103頁\編輯于星期三laserconfocalscanningmicroscope,LCSM現(xiàn)在是18頁\一共有103頁\編輯于星期三激光共聚焦掃描顯微鏡光路圖現(xiàn)在是19頁\一共有103頁\編輯于星期三LCSMImageofaXenopusMelanophoremicrotubulecytoskeleton(green)andthenucleus(blue)現(xiàn)在是20頁\一共有103頁\編輯于星期三（四）暗視野顯微鏡darkfieldmicroscope聚光鏡中央有擋光片，視野背景是黑的，只允許被標(biāo)本反射和衍射的光線進(jìn)入物鏡，物體邊緣是亮的?？捎^察4~200nm的微粒子，分辨率比普通顯微鏡高50倍?，F(xiàn)在是21頁\一共有103頁\編輯于星期三（五）相差顯微鏡把透過標(biāo)本的可見光的光程差變成振幅差，從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對比度，使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見。在構(gòu)造上，相差顯微鏡有不同于普通光學(xué)顯微鏡兩個特殊之處。環(huán)形光闌（annulardiaphragm）：位于光源與聚光器之間。相位板（annularphaseplate）：物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板，可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ?，F(xiàn)在是22頁\一共有103頁\編輯于星期三原理現(xiàn)在是23頁\一共有103頁\編輯于星期三用途：觀察未經(jīng)染色的玻片標(biāo)本。現(xiàn)在是24頁\一共有103頁\編輯于星期三（六）偏光顯微鏡polarizingmicroscope用于檢測具有雙折射性的物質(zhì)，如纖維絲、紡錘體、膠原、染色體等。進(jìn)入顯微鏡的光線為偏振光，鏡筒中有檢偏器（與起偏器方向垂直的偏振片）。載物臺可以旋轉(zhuǎn)。淀粉現(xiàn)在是25頁\一共有103頁\編輯于星期三（七）微分干涉差顯微鏡Differentialinterferencecontrastmicroscope（DIC）1952年Nomarski發(fā)明，利用兩組平面偏振光的干涉，加強(qiáng)影像的明暗效果，能顯示結(jié)構(gòu)的三維立體投影。標(biāo)本可略厚一點(diǎn)，折射率差別更大，故影像的立體感更強(qiáng)。現(xiàn)在是26頁\一共有103頁\編輯于星期三

Figure3-11.Fourtypesoflightmicroscopy.(A)Theimageofafibroblastincultureobtainedbythesimpletransmissionoflightthroughthecell,atechniqueknownasbright-fieldmicroscopy.Theotherimageswereobtainedbytechniquesdiscussedinthetext:(B)phase-contrastmicroscopy,(C)Nomarskidifferential-interference-contrastmicroscopy,and(D)dark-fieldmicroscopy.現(xiàn)在是27頁\一共有103頁\編輯于星期三（八）倒置顯微鏡inversemicroscope物鏡與照明系統(tǒng)顛倒；用于觀察培養(yǎng)的活細(xì)胞，通常具有相差或DIC物鏡，有的還具有熒光裝置。

現(xiàn)在是28頁\一共有103頁\編輯于星期三（九）當(dāng)代顯微鏡的發(fā)展趨勢采用組合方式，集普通光鏡、相差、熒光、暗視野、DIC、攝影裝置于一體；自動化與電子化。現(xiàn)在是29頁\一共有103頁\編輯于星期三二、電子顯微鏡現(xiàn)在是30頁\一共有103頁\編輯于星期三電子顯微鏡的基本構(gòu)造現(xiàn)在是31頁\一共有103頁\編輯于星期三1.原理以電子束作光源，電磁場作透鏡。電子束波長與加速電壓(通常50~120KV)的平方根成反比；由電子照明系統(tǒng)、電磁透鏡成像系統(tǒng)、真空系統(tǒng)、記錄系統(tǒng)、電源系統(tǒng)等5部分構(gòu)成；分辨力0.2nm，放大倍數(shù)可達(dá)百萬倍；用于觀察超微結(jié)構(gòu)（小于0.2μm）。（一）透射電子顯微鏡transmissionelectronmicroscope,TEM現(xiàn)在是32頁\一共有103頁\編輯于星期三表二、不同光線的波長現(xiàn)在是33頁\一共有103頁\編輯于星期三TEMLIGHTPATHWAY現(xiàn)在是34頁\一共有103頁\編輯于星期三電鏡與光鏡的比較

顯微鏡分辨本領(lǐng)光源透鏡真空成像原理LMTEM200nm100nm0.1nm可見光（400-700）紫外光（約200nm)電子束（0.01-0.9）玻璃透鏡玻璃透鏡電磁透鏡不要求真空不要求真空要求真空1.33x10-5～1.33x10-3Pa利用樣品對光的吸收形成明暗反差和顏色變化利用樣品對電子的散射和透射形成明暗反差現(xiàn)在是35頁\一共有103頁\編輯于星期三電鏡與光鏡光路圖比較現(xiàn)在是36頁\一共有103頁\編輯于星期三TRANSMISSIONELECTRONMICROSCOPE，TEM現(xiàn)在是37頁\一共有103頁\編輯于星期三2.制樣技術(shù)1）超薄切片超薄切片厚度僅50nm左右，用超薄切片機(jī)（ultramicrotome）制作。通常以鋨酸和戊二醛固定樣品，丙酮逐級脫水，環(huán)氧樹脂包埋，以熱膨脹或螺旋推進(jìn)的方式切片，重金屬（鈾、鉛）鹽染色?，F(xiàn)在是38頁\一共有103頁\編輯于星期三現(xiàn)在是39頁\一共有103頁\編輯于星期三現(xiàn)在是40頁\一共有103頁\編輯于星期三2）負(fù)染技術(shù)用重金屬鹽(如磷鎢酸)染色；吸去染料干燥后，樣品凹陷處鋪了一層重金屬鹽，而凸的出地方?jīng)]有染料沉積，從而出現(xiàn)負(fù)染效果，分辨力可達(dá)1.5nm左右。NegativeStainedArchaebacteria現(xiàn)在是41頁\一共有103頁\編輯于星期三Examplesofnegtivelystainedandmetal-shadowedspecimens.Electronmicrographsofatobaccorattlevirusafternegtivestainingwithpotassiumphosphotungstate(a)orshadowcastingwithchromium(b).現(xiàn)在是42頁\一共有103頁\編輯于星期三3）冰凍蝕刻freeze-etching亦稱冰凍斷裂。標(biāo)本置于干冰或液氮中冰凍。然后斷開，升溫后，冰升華，暴露斷面結(jié)構(gòu)。向斷面噴涂一層蒸汽鉑和碳。然后將組織溶掉，把鉑和碳的膜剝下來，此膜即為復(fù)膜（replica）?，F(xiàn)在是43頁\一共有103頁\編輯于星期三anonionroottipcellwithnoetching.斷面的三種處理方法：蝕刻（etching）、不蝕刻（noetching）、深度蝕刻（deepetching）現(xiàn)在是44頁\一共有103頁\編輯于星期三培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)面的深度蝕刻電鏡照片，示

Clathrin衣被現(xiàn)在是45頁\一共有103頁\編輯于星期三現(xiàn)在是46頁\一共有103頁\編輯于星期三（二）掃描電子顯微鏡20世紀(jì)60年代問世，用來觀察標(biāo)本表面結(jié)構(gòu)；分辨力為6~10nm，因人眼的分辨力（區(qū)別熒光屏上距離最近兩個光點(diǎn)的能力）為0.2mm，掃描電鏡的有效放大倍率為0.2mm/10nm=20000X?，F(xiàn)在是47頁\一共有103頁\編輯于星期三Figure3-23.Scanningelectronmicroscopy.Scanningelectronmicrographofthestereociliaprojectingfromahaircellintheinnerearofabullfrog(A).Forcomparison,thesamestructureisshownbydifferential-interference-contrastlightmicroscopy(B)andbythin-sectionelectronmicroscopy(C).現(xiàn)在是48頁\一共有103頁\編輯于星期三Scanningelectronmicroscope（SEM）現(xiàn)在是49頁\一共有103頁\編輯于星期三工作原理：是用一束極細(xì)的電子束掃描樣品，在樣品表面激發(fā)出次級電子，次級電子的多少與樣品表面結(jié)構(gòu)有關(guān)，次級電子由探測器收集，信號經(jīng)放大用來調(diào)制熒光屏上電子束的強(qiáng)度，顯示出與電子束同步的掃描圖像。為了使標(biāo)本表面發(fā)射出次級電子，標(biāo)本在固定、脫水后，要噴涂上一層重金屬膜，重金屬在電子束的轟擊下發(fā)出次級電子信號。現(xiàn)在是50頁\一共有103頁\編輯于星期三現(xiàn)在是51頁\一共有103頁\編輯于星期三SEMLIGHTPATHWAY現(xiàn)在是52頁\一共有103頁\編輯于星期三人類紅細(xì)胞現(xiàn)在是53頁\一共有103頁\編輯于星期三酵母現(xiàn)在是54頁\一共有103頁\編輯于星期三人類精子現(xiàn)在是55頁\一共有103頁\編輯于星期三（三）掃描隧道顯微鏡

scanningtunnelingmicroscope，STM原理：根據(jù)隧道效應(yīng)設(shè)計(jì)，當(dāng)原子尺度的針尖在不到一個納米的高度上掃描樣品時，此處電子云重疊，外加一電壓（2mV~2V），針尖與樣品之間形成隧道電流。電流強(qiáng)度與針尖和樣品間的距離有函數(shù)關(guān)系，將掃描過程中電流的變化轉(zhuǎn)換為圖像，即可顯示出原子水平的凹凸形態(tài)。分辨率：橫向?yàn)?.1~0.2nm，縱向可達(dá)0.01nm。用途：三態(tài)（固態(tài)、液態(tài)和氣態(tài)）物質(zhì)均可進(jìn)行觀察?，F(xiàn)在是56頁\一共有103頁\編輯于星期三掃描隧道顯微鏡原理引自http://www.iap.tuwien.ac.at現(xiàn)在是57頁\一共有103頁\編輯于星期三STMimageofaDNAmolecule現(xiàn)在是58頁\一共有103頁\編輯于星期三SchematicdrawingofAFM現(xiàn)在是59頁\一共有103頁\編輯于星期三三、顯微操作技術(shù)

micromanipulationtechnique是在倒置顯微鏡下利用顯微操作器進(jìn)行細(xì)胞或早期胚胎操作的一種方法。包括細(xì)胞核移植、顯微注射、嵌合體技術(shù)、胚胎移植以及顯微切割等。細(xì)胞核移植技術(shù)已有幾十年的歷史，1952年，Briggs和King等將不同階段的蛙胚細(xì)胞核注入去核的蛙卵，構(gòu)建核移植胚。Gordon（1962）證明原腸胚以后的細(xì)胞核移植能發(fā)育到成體。1997年，Wilmut等克隆了綿羊Dolly?，F(xiàn)在是60頁\一共有103頁\編輯于星期三顯微操作儀現(xiàn)在是61頁\一共有103頁\編輯于星期三轉(zhuǎn)基因顯微操作過程

現(xiàn)在是62頁\一共有103頁\編輯于星期三電鏡三維重構(gòu)技術(shù) 電子顯微術(shù)、電子衍射與計(jì)算機(jī)圖象處理相結(jié)合而形成的具有重要應(yīng)用前景的一門新技術(shù)。 電鏡三維重構(gòu)技術(shù)與X-射線晶體衍射技術(shù)及核磁共振分析技術(shù)相結(jié)合，是當(dāng)前結(jié)構(gòu)生物學(xué)（StructuralBiology）

——主要研究生物大分子空間結(jié)構(gòu)及其相互關(guān)系的主要實(shí)驗(yàn)手段?，F(xiàn)在是63頁\一共有103頁\編輯于星期三現(xiàn)在是64頁\一共有103頁\編輯于星期三第二節(jié)生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)一、細(xì)胞化學(xué)技術(shù)現(xiàn)在是65頁\一共有103頁\編輯于星期三組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)染色方法用于對某些細(xì)胞成分進(jìn)行定性和定位研究。（一）固定物理固定：血膜空氣干燥、冷凍干燥?；瘜W(xué)固定：如甲醇、乙醇、丙酮、甲醛、戊二醛和鋨酸等試劑。顯示多糖常用乙醇固定，顯示酶類多用甲醛丙酮緩沖液固定?，F(xiàn)在是66頁\一共有103頁\編輯于星期三（二）顯示方法金屬沉淀法：如磷酸酶分解磷酸酯底物后，反應(yīng)產(chǎn)物最終生成CoS或PbS有色沉淀，而顯示出酶活性。Schiff反應(yīng)：醛基可使Schiff試劑中的無色品紅變?yōu)榧t色。用于顯示糖和脫氧核糖核酸（Feulgen反應(yīng)）。聯(lián)苯胺反應(yīng)：過氧化酶分解H202。產(chǎn)生新生氧，后者再將無色聯(lián)苯胺氧化成聯(lián)苯胺藍(lán)，進(jìn)而變成棕色化合物。脂溶染色法：借蘇丹染料溶于脂類而使脂類顯色。茚三酮反應(yīng)：顯示蛋白質(zhì)?，F(xiàn)在是67頁\一共有103頁\編輯于星期三二、免疫細(xì)胞化學(xué)immunocytochemistry是利用抗體同特定抗原專一結(jié)合的原理，對抗原進(jìn)行定位測定的技術(shù)。常用的標(biāo)記物有熒光素和酶。免疫熒光法（immunofluorescenttechnique）：如異硫氰酸熒光素、羅丹明等。酶標(biāo)免疫法（enzyme-labeledantibodymethod）：如辣根過氧化物酶?，F(xiàn)在是68頁\一共有103頁\編輯于星期三特異蛋白抗原的定位與定性

免疫熒光技術(shù)： 快速、靈敏、有特異性，但其分辨率有限。

蛋白電泳(SDS)

與免疫印跡反應(yīng)(Western-Blot)

免疫電鏡技術(shù)：免疫鐵蛋白技術(shù)免疫酶標(biāo)技術(shù)免疫膠體金技術(shù)

應(yīng)用：通過對分泌蛋白的定位，可以確定某種蛋白的分泌動態(tài)；胞內(nèi)酶的研究；膜蛋白的定位與骨架蛋白的定位等現(xiàn)在是69頁\一共有103頁\編輯于星期三三、放射自顯影術(shù)用于研究標(biāo)記化合物在機(jī)體、組織和細(xì)胞中的分布、定位、排出以及合成、更新、作用機(jī)理、作用部位等等。原理：將放射性同位素標(biāo)記的化合物導(dǎo)入生物體內(nèi)，經(jīng)過一段時間后，制取切片，涂上鹵化銀乳膠，經(jīng)放射性曝光，使乳膠感光。一般用14C和3H標(biāo)記。常用3H-TDR來顯示DNA，用3H-UDR顯示RNA；用3H氨基酸研究蛋白質(zhì)，用3H甘露糖、3H巖藻糖研究多糖。14C半衰期為5730年，3H為12.5年。現(xiàn)在是70頁\一共有103頁\編輯于星期三現(xiàn)在是71頁\一共有103頁\編輯于星期三四、分子雜交技術(shù)具有互補(bǔ)核苷酸序列的兩條單鏈核苷酸分子片段，在適當(dāng)條件下，通過氫鍵結(jié)合，形成DNA-DNA，DNA-RNA或RNA-RNA雜交的雙鏈分子。這種技術(shù)可用來測定單鏈分子核苷酸序列間是否具有互補(bǔ)關(guān)系。（一）原位雜交（insituhybridization）。用于檢測染色體上的特殊DNA序列。最初是使用放射性DNA探針，后來又發(fā)明了免疫探針法?，F(xiàn)在是72頁\一共有103頁\編輯于星期三人類染色體端粒DNA的熒光原位雜交照片現(xiàn)在是73頁\一共有103頁\編輯于星期三（二）Southern雜交是體外分析特異DNA序列的方法，操作時先用限制性內(nèi)切酶將核DNA或線粒體DNA切成DNA片段，經(jīng)凝膠電泳分離后，轉(zhuǎn)移到醋酸纖維薄膜上，再用探針雜交，通過放射自顯影，即可辨認(rèn)出與探針互補(bǔ)的特殊核苷序列。將RNA轉(zhuǎn)移到薄膜上，用探針雜交，則稱為Northern雜交?，F(xiàn)在是74頁\一共有103頁\編輯于星期三六、PCR技術(shù)PCR即：polymerasechainreaction。反應(yīng)體系：①樣品DNA；②引物（primer），約15-20個核苷酸；③4種dNTP；④TagDNA聚合酶，來自于嗜熱水生菌Thermusaquaticus，最適作用溫度75~80℃，短時間在95℃下不失活。⑤緩沖體系和Mg2+。反應(yīng)過程：①變性：約90-95℃；②復(fù)性：約60℃左右；③延伸：70-75℃；④重復(fù)“變性——復(fù)性——延伸”過程20-30次循環(huán)?，F(xiàn)在是75頁\一共有103頁\編輯于星期三PCR原理現(xiàn)在是76頁\一共有103頁\編輯于星期三第三節(jié)細(xì)胞分離技術(shù)現(xiàn)在是77頁\一共有103頁\編輯于星期三一、離心技術(shù)是分離細(xì)胞器及各種大分子基本手段。轉(zhuǎn)速10~25kr/min的離心機(jī)稱為高速離心機(jī)。轉(zhuǎn)速>25kr/min，離心力>89Kg者稱為超速離心機(jī)。超速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速可達(dá)100000r/min，離心力超過500kg?，F(xiàn)在是78頁\一共有103頁\編輯于星期三（一）差速離心Differentialcentrifugation特點(diǎn)：介質(zhì)密度均一；速度由低向高，逐級離心。用途：分離大小相差懸殊的細(xì)胞和細(xì)胞器。沉降順序：核——線粒體——溶酶體與過氧化物酶體——內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高基體——核蛋白體?？蓪⒓?xì)胞器初步分離，常需進(jìn)一步通過密度梯離心再行分離純化?，F(xiàn)在是79頁\一共有103頁\編輯于星期三現(xiàn)在是80頁\一共有103頁\編輯于星期三LowspeedHighspeedDifferentialcentrifugation現(xiàn)在是81頁\一共有103頁\編輯于星期三（二）密度梯度離心用介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，將細(xì)胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部，通過離心力場的作用使細(xì)胞和細(xì)胞成分分層、分離。類型：速度沉降、等密度沉降。常用介質(zhì)：氯化銫、蔗糖、多聚蔗糖。分離活細(xì)胞的介質(zhì)要求：1）能產(chǎn)生密度梯度，且密度高時，粘度不高；2）PH中性或易調(diào)為中性；3）濃度大時滲透壓不大；4）對細(xì)胞無毒?，F(xiàn)在是82頁\一共有103頁\編輯于星期三1.速度沉降velocitysedimentation用途：分離密度相近而大小不等的細(xì)胞或細(xì)胞器。特點(diǎn)：介質(zhì)密度較低，介質(zhì)的最大密度應(yīng)小于被分離生物顆粒的最小密度。原理：介質(zhì)密度梯度平緩，分離物按各自的沉降系數(shù)以不同的速度沉降而達(dá)到分離?，F(xiàn)在是83頁\一共有103頁\編輯于星期三2.等密度沉降isopycnicsedimentation用途：分離密度不等的顆粒。特點(diǎn)：介質(zhì)密度高，陡度大，介質(zhì)最高密度大于被分離組分的最大密度。力場比速率沉降法大10~100倍，需要高速或超速離心。原理：樣品各成分在連續(xù)梯度的介質(zhì)中經(jīng)過一定時間的離心則沉降到與自身密度相等的介質(zhì)處，并停留在那里達(dá)到平衡，從而將不同密度的成分分離。現(xiàn)在是84頁\一共有103頁\編輯于星期三Velocity(A)andEquilibrium(B)sedimentation現(xiàn)在是85頁\一共有103頁\編輯于星期三二、流式細(xì)胞術(shù)用途：對單個細(xì)胞進(jìn)行快速定量分析與分選的一門技術(shù)。原理：包在鞘液中的細(xì)胞通過高頻振蕩控制的噴嘴，形成包含單個細(xì)胞的液滴，在激光束的照射下，這些細(xì)胞發(fā)出散射光和熒光，經(jīng)探測器檢測，轉(zhuǎn)換為電信號，送入計(jì)算機(jī)處理，輸出統(tǒng)計(jì)結(jié)果，并可根據(jù)這些性質(zhì)分選出高純度的細(xì)胞亞群，分離純度可達(dá)99%。包被細(xì)胞的液流稱為鞘液，所用儀器稱為流式細(xì)胞計(jì)（flowcytometer）?，F(xiàn)在是86頁\一共有103頁\編輯于星期三現(xiàn)在是87頁\一共有103頁\編輯于星期三三、細(xì)胞電泳原理：在一定PH值下細(xì)胞表面帶有凈的正或負(fù)電荷，能在外加電場的作用下發(fā)生泳動。各種細(xì)胞或處于不同生理狀態(tài)的同種細(xì)胞荷電量有所不同，故在一定的電場中的泳動速度不同。用途：檢測細(xì)胞生理狀態(tài)、分離不同種類的細(xì)胞。現(xiàn)在是88頁\一共有103頁\編輯于星期三第四節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞雜交一、細(xì)胞培養(yǎng)現(xiàn)在是89頁\一共有103頁\編輯于星期三（一）動物細(xì)胞培養(yǎng)群體培養(yǎng)（massculture）：將含有一定數(shù)量細(xì)胞的懸液置于培養(yǎng)瓶中，讓細(xì)胞貼壁生長，匯合（confluence）后形成均勻的單細(xì)胞層；克隆培養(yǎng)（clonalculture）：培養(yǎng)高度稀釋的細(xì)胞懸液，細(xì)胞貼壁生長，每一個細(xì)胞形成一個細(xì)胞集落，稱為克隆?，F(xiàn)在是90頁\一共有103頁\編輯于星期三群體培養(yǎng)（左）和克隆培養(yǎng)（右）

現(xiàn)在是91頁\一共有103頁\編輯于星期三原代培養(yǎng)（primaryculture）：即：培養(yǎng)來自動物機(jī)體的細(xì)胞群。將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到新的容器中培養(yǎng)稱為傳代或傳代培養(yǎng)（passage），每代細(xì)胞分裂約3-6次。細(xì)胞系（cellline）：原代培養(yǎng)細(xì)胞成功傳代即為細(xì)胞系。從腫瘤組織培養(yǎng)建立的細(xì)胞群或培養(yǎng)過程中發(fā)生突變或轉(zhuǎn)化的細(xì)胞，在培養(yǎng)條件下可無限繁殖

.細(xì)胞株（cellstrain）：從培養(yǎng)細(xì)胞中篩選出的具有特定性質(zhì)或標(biāo)志的細(xì)胞群。克?。╟lone）：亦稱無性系。指由同一個祖先細(xì)胞通過有絲分裂產(chǎn)生的遺傳性狀一致的細(xì)胞群?，F(xiàn)在是92頁\一共有103頁\編輯于星期三表三、實(shí)驗(yàn)室中常用的幾種細(xì)胞系細(xì)胞系名稱細(xì)胞類型來源3T3成纖維細(xì)胞小鼠HeLa宮頸癌上皮細(xì)胞HenriettaLacks

BHK21成纖維