植物組織培養(yǎng)與細(xì)胞培養(yǎng)

植物組織培養(yǎng)與細(xì)胞培養(yǎng)開始于19世紀(jì)后半葉，當(dāng)時(shí)植物細(xì)胞全能性的概念還沒有完全確定，但基于對(duì)自然狀態(tài)下某些植物可以通過無性繁殖產(chǎn)生后代的觀察，人們便產(chǎn)生了這樣一種想法即能否將植物體的一部分在適當(dāng)?shù)臈l件下培養(yǎng)成一個(gè)完整的植物體，為此許多植物科學(xué)工作者開始了培養(yǎng)植物組織的嘗試。最初的問題仍然是集中在植物細(xì)胞有沒有全能性和如何使這種全能性表現(xiàn)出來。1839年Schwann提出細(xì)胞有機(jī)體的每一個(gè)生活細(xì)胞在適宜的外部環(huán)境條件下都有獨(dú)立發(fā)育的潛能。1853年trecul利用離體的莖段和根段進(jìn)行培養(yǎng)獲得了愈傷組織，愈傷組織是指一種沒有器官分化但能進(jìn)行活躍分裂的細(xì)胞團(tuán)，但這還不能證明細(xì)胞具有全能性，因?yàn)橛捎鷤M織沒能再生出完整植物體。1901年Morgan首次提出一個(gè)全能性細(xì)胞應(yīng)具有發(fā)育出一個(gè)完整植株的能力。所謂全能性細(xì)胞就是指具有完整的膜系統(tǒng)和細(xì)胞核的生活細(xì)胞，在適宜的條件下可通過細(xì)胞分裂與分化，再生出一個(gè)完整植株。White指出：如果一個(gè)給定的有機(jī)體的所有細(xì)胞都大致相同，并具有全能性，那么在有機(jī)體內(nèi)所觀察到的細(xì)胞分化必定是這些細(xì)胞對(duì)有機(jī)體內(nèi)微環(huán)境和周圍環(huán)境的反應(yīng)。就是說機(jī)體內(nèi)每個(gè)細(xì)胞所以沒有表現(xiàn)出全能性，是因?yàn)樵摷?xì)胞所處位置的不同，致使其某些功能被抑制（suppressed),這充分說明機(jī)體內(nèi)的微環(huán)境因素在細(xì)胞分化中起了十分重要的作用。按照現(xiàn)代發(fā)育生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)的理論，細(xì)胞分化是受基因在時(shí)間和空間兩個(gè)方面的調(diào)空，空間就是指細(xì)胞在機(jī)體內(nèi)所處的位置。不同位置的細(xì)胞，其基因的表達(dá)不同，細(xì)胞所表現(xiàn)出的形態(tài)結(jié)構(gòu)和行為就不同。如果將一個(gè)生活的細(xì)胞從植物體內(nèi)分離出來，使之脫離開原有的環(huán)境，細(xì)胞被抑制的功能將有望得以恢復(fù)，重新表現(xiàn)出全能性。基于這種認(rèn)識(shí)，科學(xué)工作者便萌生出了植物組織培養(yǎng)的念頭。Haberlandt(1902)首次提出細(xì)胞培養(yǎng)的概念，也是第一個(gè)用人工培養(yǎng)基對(duì)分離的植物細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)的人。與rechinger不同，Haberlandt相信切塊大小不會(huì)影響細(xì)胞增殖，但由于Haberlandt使用的培養(yǎng)液成分簡單，培養(yǎng)的細(xì)胞是高度分化的細(xì)胞，又沒采取消毒技術(shù)，所以實(shí)驗(yàn)失敗，培養(yǎng)的細(xì)胞雖然存活了幾個(gè)月但沒能分裂。Haberlandt轉(zhuǎn)而對(duì)損傷修復(fù)發(fā)生興趣，提出激素作用的概念（leptohormone)，與維管組織特別是韌皮部有關(guān)；另一類是創(chuàng)傷激素(woundhomone)，與細(xì)胞損傷有關(guān)，為后來激素理論的建立和在組織培養(yǎng)中的廣泛應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。但自Haberlandt的實(shí)驗(yàn)之后直到1934年White培養(yǎng)番茄離體根尖的成功，其間的30多年里，植物組織培養(yǎng)技術(shù)幾乎沒有什么進(jìn)展。分析其原因，主要就是培養(yǎng)基的成分和實(shí)驗(yàn)所選取的材料不夠合適。1934年White用離體的番茄根建立了第一個(gè)活躍生長的無性系，使根的離體培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)首次獲得了真正的成功，并首次發(fā)現(xiàn)和提出B族維生素B1、維生素B6和煙酸的重要性。與此同時(shí)，Cautheret在山毛柳和黑楊形成層組織的培養(yǎng)中也發(fā)現(xiàn)了B族維生素的作用，并使培養(yǎng)獲得了成功。Nobecourt也用胡蘿卜建立了類似的連續(xù)生長的組織培養(yǎng)物。因此，Haberlandt、White和Nobecourt一起被譽(yù)為植物組織培養(yǎng)的奠基人。人們現(xiàn)在所用的若干培養(yǎng)方法和培養(yǎng)基，原則上都是他們在1939年所建立的方法和培養(yǎng)基演變的結(jié)果，幾乎所有的培養(yǎng)基中都添加了不同種類和不同數(shù)量的B族維生素。從此植物組織培養(yǎng)進(jìn)入快速發(fā)展時(shí)期。1941年，Overbeek、Conklin和Blakeslee等用附加椰乳到培養(yǎng)基中，獲得了Datura離體胚培養(yǎng)的成功。椰乳成分復(fù)雜，含有多種不同的有機(jī)物，后來的研究發(fā)現(xiàn)，其中在組織培養(yǎng)中起主要作用的是腺嘌呤類激素或類似物。1944年，Skoog報(bào)道DNA的降解產(chǎn)物腺嘌呤和腺苷可以促進(jìn)愈傷組織的生長，解除生長素對(duì)芽形成的抑制作用，誘導(dǎo)芽的形成。1948年，Caplin和Steward用實(shí)驗(yàn)證明椰乳與2,4-D配合，對(duì)培養(yǎng)的胡蘿卜和馬鈴薯組織的增殖起到明顯的促進(jìn)作用。在用煙草髓細(xì)胞誘導(dǎo)愈傷組織的實(shí)驗(yàn)中，Skoog,Miller等分離確定了6-呋喃氨基嘌呤對(duì)細(xì)胞分裂有促進(jìn)作用，并命名為“激動(dòng)素”（Kinetin)。之后，與此相關(guān)的同系物6-芐氨基嘌呤被合成，它也刺激培養(yǎng)物的細(xì)胞分裂。于是，出現(xiàn)了“細(xì)胞分裂素”這一集合名詞，專門用來指能刺激培養(yǎng)物細(xì)胞分裂的一組6-某基團(tuán)的氨基嘌呤化合物。爾后，玉米素、異戊烯基腺嘌呤和其他細(xì)胞分裂素等植物激素的相繼發(fā)現(xiàn)，更增加了細(xì)胞分裂素的種類。由于發(fā)現(xiàn)生長素和細(xì)胞分裂素相互配合能調(diào)節(jié)細(xì)胞的分裂與分化，控制器官的分化，生長素高時(shí)可誘導(dǎo)根的形成，細(xì)胞分裂素高時(shí)可促進(jìn)芽的分化，使植物組織培養(yǎng)的工作迅速取得突破。1958年美國的Steward和德國的Reinert分別由培養(yǎng)的胡蘿卜細(xì)胞誘導(dǎo)形成了胚狀體，1965年由Vasil和Hildebrandt用單個(gè)分離的細(xì)胞培養(yǎng)獲得整個(gè)植株的再生，從而使植物細(xì)胞全能性的理論真正得到了科學(xué)的證實(shí)。從此之后，一批又一批植物的組織或器官通過培養(yǎng)的方法獲得了再生植株。20世紀(jì)60年代，在植物組織培養(yǎng)方面的另外兩項(xiàng)成就就是劃分小孢子培養(yǎng)和原生質(zhì)體培養(yǎng)的成功。Guha和Maheshwari（1966，1967），Rourgin和Nitsch（1967）先后利用煙草和胡蘿卜的小孢子培養(yǎng)獲得單倍體植株，并成功地實(shí)現(xiàn)了染色體的加倍，使這種同源二倍體植株在5個(gè)月內(nèi)收獲到種子。Cocking等用純化的纖維素酶和果膠酶處理煙草細(xì)胞，獲得原生質(zhì)體，通過調(diào)節(jié)滲透壓的方法控制原生質(zhì)體膨脹，使培養(yǎng)獲得成功，得到了再生植株。自20世紀(jì)60年代始，植物組織與細(xì)胞培養(yǎng)逐漸走向了工廠化和商品化階段?，F(xiàn)在已不能確切統(tǒng)計(jì)有多少種植物通過組織培養(yǎng)的方法獲得了再生植株，因?yàn)閹缀趺刻於加锌赡艹霈F(xiàn)利用新的植物種類獲得培養(yǎng)成功的報(bào)道。植物組織培養(yǎng)已經(jīng)變成了一種常規(guī)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，廣泛應(yīng)用于植物的脫毒、快繁、基因工程、細(xì)胞工程、遺傳研究、次生代謝物質(zhì)的生產(chǎn)、工廠化育苗等多個(gè)方面；從高級(jí)的研究機(jī)構(gòu)、大專院校到普通的生物技術(shù)公司，甚至農(nóng)民專業(yè)戶都在不同程度的利用或開展組織培養(yǎng)工作。植物組織培養(yǎng)已經(jīng)走過了近百年的歷程。它的歷史不僅證明了植物的每一個(gè)生活細(xì)胞都含有一種植物的全部遺傳信息，在一定的條件下可以發(fā)育成一個(gè)完整的植株，而且在一定范圍內(nèi)人們可以按照意愿，改變和調(diào)節(jié)植物的發(fā)育。但這種調(diào)節(jié)和改變知識(shí)局部的，主要是通過改變培養(yǎng)基中的激素和培養(yǎng)條件，從遺傳基礎(chǔ)上的徹底改造僅僅是開始。但是，生命的奧秘是很深遠(yuǎn)的，植物也如此，科學(xué)家至今仍不能實(shí)現(xiàn)對(duì)所有植物的組織培養(yǎng)再生，對(duì)基因型對(duì)組培成功的影響至今仍迷惑不解，而且對(duì)已經(jīng)獲得成功的植物，也還是有很多問題沒有解決。即便像煙草和擬南芥這樣的模式植物，也沒能實(shí)現(xiàn)讓它們在組培容器中遂愿的生長發(fā)育和開花結(jié)實(shí)。人們對(duì)植物的認(rèn)識(shí)、了解和掌握，仍然處于必然王國階段，單就其組織培養(yǎng)而言，還有十分漫長的道路要走。編輯本段植物組培的應(yīng)用前景1、快速繁殖某些稀有植物或有較大經(jīng)濟(jì)價(jià)值的植物依靠自然條件在較短時(shí)間內(nèi)繁殖稀有植物和經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高的植物，受到地理環(huán)境和季節(jié)的限制，很難達(dá)到快速、高效的目的；特別對(duì)于在短時(shí)期內(nèi)需要達(dá)到一定數(shù)量，才能創(chuàng)造應(yīng)有價(jià)值的植物，時(shí)間就是效益，只有通過組織培養(yǎng)的方法才能滿足這一要求。用組織培養(yǎng)法繁殖植物，這是組織培養(yǎng)應(yīng)用于生產(chǎn)的主要的和成效最大的實(shí)例。首先是在蘭花上的成功應(yīng)用。自Morel在1960年得到蘭花組織培養(yǎng)苗后，很快應(yīng)用于生產(chǎn)，形成了組織培養(yǎng)法繁殖蘭花工業(yè)。由于組織培養(yǎng)法繁殖植物的明顯特點(diǎn)是快速，每年可以數(shù)以百萬倍速度繁殖，因此對(duì)一些繁殖系數(shù)低，不能用種子繁殖的名特優(yōu)植物品種的繁殖，尤為意義重大。2、脫毒植物中有很多都帶有病毒，嚴(yán)重影響植物的產(chǎn)量和品質(zhì)，給農(nóng)業(yè)帶來災(zāi)害。特別是無性繁殖植物，如馬鈴薯、草莓、大蒜、康乃馨等，由于病毒是通過維管束傳導(dǎo)的，因此利用這些植物營養(yǎng)器官繁殖，就會(huì)把病毒帶到新的植物個(gè)體上而發(fā)生病害。但是也證明感病植株并不是每個(gè)部位都帶有病毒，如莖尖生長點(diǎn)尚未分化成維管束的部分，可能不帶病毒。若利用組織培養(yǎng)法進(jìn)行莖尖培養(yǎng)，再生的植株有可能不帶病毒，從而獲得脫病毒的苗，再用這種苗進(jìn)行繁殖，則種植的植物就不會(huì)或極少發(fā)生病毒病。所獲得的脫毒苗一定要經(jīng)過鑒定，確認(rèn)不帶病毒才能使用。使用組織培養(yǎng)法獲得脫毒苗已經(jīng)在草莓、葡萄、康乃馨等獲得成功，產(chǎn)生明顯的經(jīng)濟(jì)效應(yīng)。3、植物種質(zhì)資源的保存、挽救瀕于滅絕的植物長期以來人們想了很多方法來保存植物，如儲(chǔ)存果實(shí)，儲(chǔ)存種子，儲(chǔ)存塊根、塊莖、種球、鱗莖；用常溫、低溫、變溫、低氧、充惰性氣體等，這些方法在一定程度上收到了好的或比較好的效果，但仍存在許多問題。主要問題是付出的代價(jià)高，占的空間大，保存時(shí)間短，而且易受環(huán)境條件的限制。植物組織培養(yǎng)結(jié)合超低溫保存技術(shù)，可以給植物種質(zhì)保存帶來一次大的飛躍。因?yàn)楸４嬉粋€(gè)細(xì)胞就相當(dāng)與保存一粒種子，但所占的空間僅為原來的幾萬分之一，而且在-193度的液氮中可以長時(shí)間保存，不像種子那樣需要年年更新或經(jīng)常更新。環(huán)境的不斷變化使許多種類的植物面臨著滅絕的危險(xiǎn)，而且許多種植物已經(jīng)滅絕，留給人類的只是一種遺憾。如何挽救這些植物，還有許許多多的動(dòng)物，已成為世人關(guān)注的問題。實(shí)踐證明，通過組織培養(yǎng)的方法可以使一部分瀕危的植物種類得到延續(xù)和保存；如果在結(jié)合超低溫保存技術(shù)，就可以使這些植物得到較為永久性的保存。其實(shí)，對(duì)大多數(shù)普通植物來說，用組織培養(yǎng)的方法保存其種質(zhì)材料，也具有十分重要的意義。因?yàn)?，人們現(xiàn)在無法預(yù)知哪些植物會(huì)面臨滅頂之災(zāi)，或許今天看似繁茂的植物，明天就可能被沙漠、洪水、大火或戰(zhàn)爭吞沒。4、通過花藥和花粉培養(yǎng)獲得單倍體植株、縮短育種年限通過花藥和花粉組織培養(yǎng)可以獲得單倍體植物，大大縮短了育種時(shí)間。使新品種的培育過程大大簡化5、胚胎培養(yǎng)的應(yīng)用在遠(yuǎn)源雜交中，雜交后形成的胚珠往往在未成熟狀態(tài)時(shí)，就停止生長，不能形成有生活力的種子，因而雜交不孕，這給遠(yuǎn)緣雜交造成極大困難。十九世紀(jì)二十年代末，Laibach用胚培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)亞麻種間雜種胚，第一個(gè)獲得了雜種植物，這一成功為在遠(yuǎn)緣時(shí)克服雜交不親和的障礙提供了一項(xiàng)有用的技術(shù)。這項(xiàng)技術(shù)發(fā)展至今，已經(jīng)相當(dāng)成熟，可以說多數(shù)植物的成熟或未成熟胚通過培養(yǎng)都可獲得成功。幼胚培養(yǎng)已經(jīng)可使5個(gè)細(xì)胞大小的極幼齡的胚狀結(jié)構(gòu)培養(yǎng)成植株。但胚珠培養(yǎng)的研究不多，單個(gè)胚珠培養(yǎng)尚存在許多問題，需作深化研究。遠(yuǎn)緣雜交中，由于生理上和遺傳上的障礙而不能雜交成功，可采用試管受精加以克服，即將母本胚珠離體培養(yǎng)，使異種花粉在胚珠上萌發(fā)受精，產(chǎn)生的雜種胚在試管中發(fā)育成完整植株。用胚乳培養(yǎng)可獲得三倍體植株，為誘導(dǎo)形成三倍體植物開辟了一條新途徑。三倍體加倍后得到六倍體，可育成多倍體品種。6、細(xì)胞融合通過原生質(zhì)體融合，可部分克服有性雜交不親和性，而獲得體細(xì)胞雜種，從而創(chuàng)造新種或育成優(yōu)良品種。7、培養(yǎng)細(xì)胞突變體的應(yīng)用培養(yǎng)細(xì)胞處在不斷分生狀態(tài)，它就容易受培養(yǎng)條件和外加壓力（如射線、化學(xué)物質(zhì)）的影響而產(chǎn)生突變，從中可以篩選出有用的突變體，從而育成新品種。目前用這種方法已經(jīng)篩選到抗病、抗鹽、高蛋白、高產(chǎn)等突變體，有些已經(jīng)用于生產(chǎn)。8、用于遺傳學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、組織學(xué)、胚胎學(xué)、基因工程、生物工程等地研究要揭開生命活動(dòng)的秘密，需要多科學(xué)、多技術(shù)的相互配合，其中植物組織培養(yǎng)技術(shù)是不可缺少的，它為遺傳學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物工程等提供了一種有效、快速的方法。因?yàn)橐沂旧膴W秘，首先要研究單個(gè)基因的作用，研究它在細(xì)胞內(nèi)是如何組裝的，如何與其它基因發(fā)生聯(lián)系，如何表達(dá)和調(diào)控等。分離單個(gè)基因，對(duì)它DNA進(jìn)行測序，再對(duì)其中的某些堿基實(shí)行突變，然后還需要將基因送到受體細(xì)胞當(dāng)中，看表達(dá)情況，以確定其功能。接受基因的受體細(xì)胞要產(chǎn)生再生植株，就需要通過組織培養(yǎng)的方法才能實(shí)現(xiàn)。9、利用組織培養(yǎng)的材料作為植物生物反應(yīng)器中國的中草藥是一份人類寶貴的財(cái)富，但很多種中草藥資源匱乏，產(chǎn)量不足，甚至瀕于滅絕。如果能利用組織和細(xì)胞培養(yǎng)的方法在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)生產(chǎn)，不再依附于自然環(huán)境，不僅可以解決現(xiàn)有困難，而且可以通過篩選高產(chǎn)有效成分的細(xì)胞系，來提高其藥用價(jià)值。比如用培養(yǎng)的人參懸浮細(xì)胞，來生產(chǎn)人參皂苷，已在日本等國家形成規(guī)模。利用培養(yǎng)的植物細(xì)胞和組織細(xì)胞作為生物反應(yīng)器，也可以生產(chǎn)某些蛋白質(zhì)、氨基酸、抗生素、疫苗等，如用生食蔬菜生產(chǎn)乙肝疫苗正在實(shí)驗(yàn)中。10、用于其它未知科學(xué)的研究現(xiàn)代科學(xué)發(fā)展非常迅速，很多現(xiàn)在預(yù)想不到的事情都有可能發(fā)生，新發(fā)明、新發(fā)現(xiàn)、新創(chuàng)造層出不窮，今天認(rèn)為不可能的東西明天就可能變成現(xiàn)實(shí)。植物組織培養(yǎng)也同樣具有許多尚未發(fā)掘出的潛力，說不定有一天人們會(huì)在三角瓶內(nèi)種出大南瓜?？傊?，現(xiàn)在的植物組織培養(yǎng)仍然處于發(fā)展階段，遠(yuǎn)遠(yuǎn)沒有達(dá)到它的高峰期，很多機(jī)理人們還沒有搞清楚，它的潛力還遠(yuǎn)遠(yuǎn)沒有發(fā)揮出來。相信在今后的幾十年內(nèi)，組織培養(yǎng)將會(huì)有更大的發(fā)展，在農(nóng)業(yè)、制藥業(yè)、加工業(yè)等方面將會(huì)發(fā)揮更大的作用，創(chuàng)造出更大的經(jīng)濟(jì)效益。編輯本段組織培養(yǎng)的分類按外植體分,植物組織培養(yǎng)可分以下幾類:1、胚胎培養(yǎng)植物的胚胎培養(yǎng)，包括胚培養(yǎng)、胚乳培養(yǎng)、胚珠和子房培養(yǎng)，以及離體受精的胚胎培養(yǎng)技術(shù)等。2、器官和組織培養(yǎng)器官培養(yǎng)是指植物某一器官的全部或部分或器官原基的培養(yǎng)，包括莖段、莖尖、塊莖、球莖、葉片、花序、花瓣、子房、花藥、花托、果實(shí)、種子等。組織培養(yǎng)有廣義和狹義之分。廣義：包括各種類型外植體的培養(yǎng)。狹義：包括形成層組織、分生組織、表皮組織、薄壁組織和各種器官組織，以及其培養(yǎng)產(chǎn)生的愈傷組織。3、細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)包括利用生物反應(yīng)器進(jìn)行的，旨在促進(jìn)細(xì)胞生長和生物合成的大量培養(yǎng)系統(tǒng)和利用單細(xì)胞克隆技術(shù)促進(jìn)細(xì)胞生長、分化直至形成完整植株的單細(xì)胞培養(yǎng)。4、原生質(zhì)體培養(yǎng)植物原生質(zhì)體是被去掉細(xì)胞壁的由質(zhì)膜包裹的、具有生活力的裸細(xì)胞。編輯本段組織培養(yǎng)的步驟一、培養(yǎng)基配制配制培養(yǎng)基有兩種方法可以選擇，一是購買培養(yǎng)基中所有化學(xué)藥品，按照需要自己配制；二是購買商品的混合好的培養(yǎng)基基本成分粉劑，如MS、B5等。自己配制可以節(jié)約費(fèi)用，但浪費(fèi)時(shí)間、人力、且有時(shí)由于藥品的質(zhì)量問題，給實(shí)驗(yàn)帶來麻煩。就目前國內(nèi)的情況看，大部分還是自己配制。為了方便起見，現(xiàn)以MS培養(yǎng)基為例介紹配置培養(yǎng)基的主要過程。1、配制幾種母液（1）配制MS大量元素母液一般將大量元素分別配制成100倍的母液，使用時(shí)再分別稀釋100倍。分別稱取NH4NO3165gKH2PO417gKNO3190gCaCl2·2H2O44gMgSO4·7H2O37g各自配成1L的母液。倒入1L試劑瓶中，存放于冰箱中。（2）配制MS微量元素母液一般將微量元素配制成100倍母液。依次稱取KI0.083gNa2MoO4·2H2O0.025gH3BO30.62gCuSO4·5H2O0.0025gMnSO4·H2O1.69gCoCl2·6H2O0.0025gZnSO4·7H2O0.86g配成1L母液，倒入1L試劑瓶中，存放于冰箱中。CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O由于稱取量很小，如果天平精確度沒有達(dá)到萬分之一，可先配成調(diào)整液。分別稱取CuSO4·5H2O0.05gCoCl2·6H2O0.05g各自配成100ml的調(diào)整液，然后取5ml就還有0.0025g的量。（3）配制MS有機(jī)母液一般配制成100倍MS有機(jī)母液。依次稱取肌醇10g鹽酸硫胺素（VB1）0.01g煙酸0.05g甘氨酸0.2g鹽酸吡哆醇（VB6）0.05g配成1L母液，倒入1L試劑瓶中，存放于冰箱中。（4）配制MS鐵鹽母液一般配制成100倍MS鐵鹽母液。依次稱取EDTA二鈉3.73gFeSO4·7H2O2.78g配成1L母液，倒入1L試劑瓶中，存放于冰箱中。所以MS母液有5種大量元素母液，加上MS微量元素母液、MS有機(jī)母液和MS鐵鹽母液，共8種母液。激素母液的配制各種生長素和細(xì)胞分裂素要單獨(dú)配制，不能混合在一起，生長素類一般要先用少量95%的酒精或1當(dāng)量的NaOH溶解，細(xì)胞分裂素一般要先用1當(dāng)量的鹽酸溶解，然后再加蒸餾水定容。一般取100mg配成100ml母液。2、配制培養(yǎng)基以配置1LMS培養(yǎng)基為例，按順序進(jìn)行如下操作：（1）先在燒杯中放入一些蒸餾水。（2）分別取上面八種母液10ml倒入。（3）一般稱取30g蔗糖倒入，攪拌溶解。（4）加蒸餾水用量筒定溶至1L。（5）按設(shè)計(jì)好的方案添加各種激素，由于激素的用量很小，而且激素對(duì)組培植物的生長至關(guān)重要。所以有條件的話最好用微量可調(diào)移液器吸取，減少誤差。（6）用精密試紙或酸度計(jì)調(diào)整PH至5.7-5.8。（有條件的話使用酸度計(jì)，比較精確）可配1當(dāng)量的HCL和1當(dāng)量的NaOH用來調(diào)溶液PH值。1當(dāng)量HCL配制：用量筒量取8.3ml配成100ml溶液。1當(dāng)量NaOH配制：稱取NaOH4g配成100ml溶液。（7）稱取5g左右瓊脂粉（質(zhì)量好的瓊脂粉),倒入上面配好的溶液中，放在電爐上加熱至沸騰，直到瓊脂粉熔化。（8）稍微冷卻后，分裝入培養(yǎng)容器中。無蓋的培養(yǎng)容器要用封口膜或牛皮紙封口，用橡皮筋或繩子扎緊。（9）放入消毒滅菌鍋滅菌，滅菌20分鐘左右。（10）滅菌后從滅菌鍋中取出培養(yǎng)基，平放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上令其冷卻凝固。二、滅菌滅菌是組織培養(yǎng)重要的工作之一。初學(xué)者要清楚有菌和無菌的范疇。有菌的范疇是：凡是暴露在空氣中的物體，接觸自然水源的物體，至少它的表面都是有菌的。依此觀點(diǎn)，無菌室等未處理的地方、超凈臺(tái)的表面、簡單煮沸的培養(yǎng)基、我們使用的刀、剪在未處理之前、我們身體的整個(gè)外表及與外界相連的內(nèi)表，如整個(gè)消化道、呼吸道，即我們呼出的氣體、培養(yǎng)容器無論洗得多干凈等等都是有菌的。這里所指的菌，包括細(xì)菌、真菌、放線菌、藻類及其他微生物。菌的特點(diǎn)是：極小，肉眼看不見。無處不在，無時(shí)不有，無孔不入。在自然條件下忍耐力強(qiáng)，生活條件要求簡單，繁殖力極強(qiáng)，條件適宜時(shí)便可大量滋生。無菌的范疇是：經(jīng)高溫灼燒或一定時(shí)間蒸煮過后的物體，經(jīng)其他物理或化學(xué)的滅菌方法處理后的物體（當(dāng)然這些方法必須已經(jīng)證明是有效的），高層大氣、巖石內(nèi)部、健康的動(dòng)、植物的不與外部接觸的組織內(nèi)部，強(qiáng)酸強(qiáng)堿，化學(xué)元素滅菌劑等表面和內(nèi)部都是無菌的。從以上可以看出：在地球表面無菌世界要比有菌世界小的多。滅菌是指用物理或化學(xué)的方法，殺死物體表面和孔隙內(nèi)的一切微生物或生物體，即把所有生命的物質(zhì)全部殺死。與此相關(guān)的一個(gè)概念是消毒，它指殺死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再發(fā)生危害作用，顯然經(jīng)過消毒，許多細(xì)菌芽孢、霉菌厚垣孢子等不會(huì)完全殺死，即由于在消毒后的環(huán)境里和物品上還有活著的微生物，所以通過嚴(yán)格滅菌的操作空間（接種、超凈臺(tái)等）和使用的器皿，以及操作者的衣著和手都不帶任何活著的微生物。在這樣的條件下進(jìn)行的操作，就叫做無菌操作。植物組織培養(yǎng)對(duì)無菌條件的要求是非常嚴(yán)格的，甚至超過微生物的培養(yǎng)要求，這是因?yàn)榕囵B(yǎng)基含有豐富的營養(yǎng)，稍不小心就引起雜菌污染。要達(dá)到徹底滅菌的目的，必須根據(jù)不同的對(duì)象采取不同的切實(shí)有效的方法滅菌，才能保證培養(yǎng)時(shí)不受雜菌的影響，使試管苗能正常生長。常用的滅菌方法可分為物理的和化學(xué)的兩類，即：物理方法如干熱（烘燒和灼燒）、濕熱（常壓或高壓蒸煮）、射線處理（紫外線、超聲波、微波）、過濾、清洗和大量無菌水沖洗等措施；化學(xué)方法是使用升汞、甲醛、過氧化氫、高錳酸鉀、來蘇水、漂白粉、次氯酸鈉、抗菌素、酒精化學(xué)藥品處理。這些方法和藥劑要根據(jù)工作中的不同材料不同目的適當(dāng)選用。1、培養(yǎng)基用濕熱滅菌培養(yǎng)基在制備后的24小時(shí)內(nèi)完成滅菌工序。高壓滅菌的原理是：在密閉的蒸鍋內(nèi)，其中的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點(diǎn)不斷提高，從而鍋內(nèi)溫度也隨之增加。在0.1MPa的壓力下，鍋內(nèi)溫度達(dá)121℃。在此蒸汽溫度下，可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的芽孢。注意完全排除鍋內(nèi)空氣，使鍋內(nèi)全部是水蒸氣，滅菌才能徹底。高壓滅菌放氣有幾種不同的做法，但目的都是要排凈空氣，使鍋內(nèi)均勻升溫，保證滅菌徹底。常用方法是：關(guān)閉放氣閥，通電后，待壓力上升到0.05MPa時(shí)，打開放氣閥，放出空氣，待壓力表指針歸零后，再關(guān)閉放氣閥。關(guān)閥再通電后，壓力表上升達(dá)到0.1MPa時(shí)，開始計(jì)時(shí)，維持壓力0.1-0.15MPa，20分鐘。按容器大小不同，保壓時(shí)間有所不同，見表。該表所列數(shù)字是徹底滅菌很保險(xiǎn)的數(shù)字，如果容器體積較大，但是放置的數(shù)量很少，也可以減少時(shí)間。三、接種接種時(shí)由于有一個(gè)敞口的過程，所以是極易引起污染的時(shí)期，這一時(shí)期主要由空氣中的細(xì)菌和工作人員本身引起，接種室要嚴(yán)格進(jìn)行空間消毒。接種室內(nèi)保持定期用1%-3%的高錳酸鉀溶液對(duì)設(shè)備、墻壁、地板等進(jìn)行搽洗。除了使用前用紫外線和甲醛滅菌外，還可在使用期間用70%的酒精或3%的來蘇兒噴霧，使空氣中灰塵顆粒沉降下來。無菌操作可按以下步驟進(jìn)行：（1）在接種4小時(shí)前用甲醛熏蒸接種室，并打開其內(nèi)紫外線燈進(jìn)行殺菌；（2）在接種前20分鐘，打開超凈工作臺(tái)的風(fēng)機(jī)以及臺(tái)上的紫外線燈；（3）接種員先洗凈雙手，在緩沖間換好專用實(shí)驗(yàn)服，并換穿拖鞋等；（4）上工作臺(tái)后，用酒精棉球搽拭雙手，特別是指甲處。然后搽拭工作臺(tái)面；（5）先用酒精棉球搽拭接種工具，再將鑷子和剪刀從頭至尾過火一遍，然后反復(fù)過火尖端處，對(duì)培養(yǎng)皿要過火烤干；（6）接種時(shí)，接種員雙手不能離開工作臺(tái)，不能說話、走動(dòng)和咳嗽等；（7）接種完畢后要清理干凈工作臺(tái)，可用紫外線燈滅菌30分鐘，若連續(xù)接種，每5天要大強(qiáng)度滅菌一次。接種是將已消毒好的根、莖、葉等離體器官，經(jīng)切割或剪裁成小段或小塊，放入培養(yǎng)基的過程。現(xiàn)將接種前后的程序連貫地介紹。無菌接種步驟：（1）將初步洗滌及切割的材料放入燒杯，帶入超凈臺(tái)上，用消毒劑滅菌，再用無菌水沖洗，最后瀝去水分，取出放置在滅過菌的紗布上或?yàn)V紙上。（2）材料吸干后，一手拿鑷子、一手拿剪刀或解剖刀，對(duì)材料進(jìn)行適當(dāng)?shù)那懈?。如葉片切成0.5cm平方的小塊；莖切成含有一個(gè)節(jié)的小段。微莖尖要?jiǎng)兂芍缓?-2片幼葉的莖尖大小等。在接種過程中要經(jīng)常灼燒接種器械，防止交叉污染。（3）用灼燒消毒過的器械將切割好的外植體插植或放置到培養(yǎng)基上。具體操作過程（以試管為例）是：先解開包口紙，將試管幾乎水平拿著，使試管口靠近酒精燈火焰，并將管口在火焰上方轉(zhuǎn)動(dòng)，使管口里外灼燒數(shù)秒鐘。若用棉塞蓋口，可先在管口外面灼燒，去掉棉塞，再燒管口里面。然后用鑷子夾取一塊切好的外植體送入試管內(nèi)，輕輕插入培養(yǎng)基上。若是葉片直接附在培養(yǎng)基上，以放1-3塊為宜。至于材料放置方法除莖尖、莖段要正放（尖端向上）外，其他尚無統(tǒng)一要求。接種完后，將管口在火焰上再灼燒數(shù)秒種。并用棉塞，塞好后，包上包口紙，包口紙里面也要過火。四、培養(yǎng)培養(yǎng)指把培養(yǎng)材料放在培養(yǎng)室（有光照、溫度條件）里，使之生長，分裂和分化形成愈傷組織或進(jìn)一步分化成再生植株的過程。1、培養(yǎng)方法（1）固體培養(yǎng)法即用瓊脂固化培養(yǎng)基來培養(yǎng)植物材料的方法。是現(xiàn)在最常用的方法。雖然該方法設(shè)備簡單，易行，但養(yǎng)分分布不均，生長速度不均衡，并常有褐化中毒現(xiàn)象發(fā)生。（2）液體培養(yǎng)法即用不加固化劑的液體培養(yǎng)基培養(yǎng)植物材料的方法。由于液體中氧氣含量較少，所以通常需要通過攪動(dòng)或振動(dòng)培養(yǎng)液的方法以確保氧氣的供給，采用往復(fù)式搖床或旋轉(zhuǎn)式搖床進(jìn)行培養(yǎng)，其速度一般為50-100r/min，這種定期浸沒的方法，既能使培養(yǎng)基均一，又能保證氧氣的供給。2、培養(yǎng)步驟（1）初代培養(yǎng)初代培養(yǎng)旨在獲得無菌材料和無性繁殖系。即接種某些外植體后，最初的幾代培養(yǎng)。初代培養(yǎng)時(shí)，常用誘導(dǎo)或分化培養(yǎng)基，即培養(yǎng)基中含有較多的細(xì)胞分裂素和少量的生長素。初代培養(yǎng)建立的無性繁殖系包括：莖梢、芽叢、胚狀體和原球莖等。根據(jù)初代培養(yǎng)時(shí)發(fā)育的方向可分為：1）頂芽和腋芽的發(fā)育采用外源的細(xì)胞分裂素，可促進(jìn)使具有頂芽或沒有腋芽的休眠側(cè)芽啟動(dòng)生長，從而形成一個(gè)微型的多枝多芽的小灌木叢狀的結(jié)構(gòu)。在幾個(gè)月內(nèi)可以將這種叢生苗的一個(gè)枝條轉(zhuǎn)接繼代，重復(fù)芽苗增殖的培養(yǎng)，并且迅速獲得多數(shù)的嫩莖。然后將一部分嫩莖轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上，就能得到可種植到土壤中去的完整小植株。一些木本植物和少數(shù)草本植物也可以通過這種方式來進(jìn)行再生繁殖，如月季、茶花、菊花、香石竹等等。這種繁殖方式也稱作微型繁殖，它不經(jīng)過發(fā)生愈傷組織而再生，所以是最能使無性系后代保持原品種的一種繁殖方式。適宜這種再生繁殖的植物，在采樣時(shí)，只能采用頂芽、側(cè)芽或帶有芽的莖切段，其他如種子萌發(fā)后取枝條也可以。莖尖培養(yǎng)可看作是這方面較為特殊的一種方式。它采用極其幼嫩的頂芽的莖尖分生組織作為外植體進(jìn)行接種。在實(shí)際操作中，采用包括莖尖分生組織在內(nèi)的一些組織來培養(yǎng)，這樣便保證了操作方便以及容易成活。用靠培養(yǎng)定芽得到的培養(yǎng)物一般是莖節(jié)較長，有直立向上的莖梢，擴(kuò)繁時(shí)主要用切割莖段法，如香石竹、矮牽牛、菊花等。但特殊情況下也會(huì)生出不定芽，形成芽叢。2）不定芽的發(fā)育在培養(yǎng)中由外植體產(chǎn)生不定芽，通常首先要經(jīng)脫分化過程，形成愈傷組織的細(xì)胞。然后，經(jīng)再分化，即由這些分生組織形成器官原基，它在構(gòu)成器官的縱軸上表現(xiàn)出單向的極性（這與胚狀體不同）。多數(shù)情況下它形成芽，后形成根。另一種方式是從器官中直接產(chǎn)生不定芽，有些植物具有從各個(gè)器官上長出不定芽的能力如矮牽牛、福祿考、懸鉤子等。當(dāng)在試管培養(yǎng)的條件下，培養(yǎng)基中提供了營養(yǎng)，特別是提供了連續(xù)不斷植物激素的供應(yīng)，使植物形成不定芽的能力被大大地激發(fā)起來。許多種類的外植體表面幾乎全部為不定芽所覆蓋。在許多常規(guī)方法中不能無性繁殖的種類，在試管條件下卻能較容易地產(chǎn)生不定芽而再生，如柏科，松科，銀杏等一些植物。許多單子葉植物儲(chǔ)藏器官能強(qiáng)烈地發(fā)生不定芽，用百合鱗片的切塊就可大量形成不定鱗莖。在不定芽培養(yǎng)時(shí)，也常用誘導(dǎo)或分化培養(yǎng)基。用靠培養(yǎng)不定芽得到的培養(yǎng)物，一般采用芽叢進(jìn)行繁殖，如非洲菊、草莓等。3）體細(xì)胞胚狀體的發(fā)生與發(fā)育體細(xì)胞胚狀體類似于合子胚但又有所不同，它也通過球形，心形，魚雷形和子葉形的胚胎發(fā)育時(shí)期，最終發(fā)育成小苗。但它是由體細(xì)胞發(fā)生的。胚狀體可以從愈傷組織表面產(chǎn)生，也可從外植體表面已分化的細(xì)胞中產(chǎn)生，或從懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞中產(chǎn)生。4）初代培養(yǎng)外植體的褐變外植體褐變是指在接種后，其表面開始褐變，有時(shí)甚至?xí)拐麄€(gè)培養(yǎng)基褐變的現(xiàn)象。它的出現(xiàn)是由于植物組織中的多酚氧化酶被激活，而使細(xì)胞的代謝發(fā)生變化所致。在褐變過程中，會(huì)產(chǎn)生醌類物質(zhì)，它們多呈棕褐色，當(dāng)擴(kuò)散到培養(yǎng)基后，就會(huì)抑制其他酶的活性，從而影響所接觸外植體的培養(yǎng)。褐變的主要原因如下：a、植物品種研究表明，在不同品種間的褐變現(xiàn)象是不同的。由于多酚氧化酶活性上的差異，因此，有些花卉品種的外植體在接種后較容易褐變，而有些花卉品種的外植體在接種后不容易褐變。因此，在培養(yǎng)過程中應(yīng)該有所選擇，對(duì)不同的品種分別進(jìn)行處理。b、生理狀態(tài)由于外植體的生理狀態(tài)不同，所以在接種后褐變程度也有所不同。一般說來，處于幼齡期的植物材料褐變程度較淺，而從已經(jīng)成年的植株采收的外植體，由于含醌類物質(zhì)較多，因此褐變較為嚴(yán)重。一般來說，幼嫩的組織在接種后褐變程度并不明顯，而老熟的組織在接種后褐變程度較為嚴(yán)重。c、培養(yǎng)基成分濃度過高的無機(jī)鹽會(huì)使某些觀賞植物的褐變程度增加，此外，細(xì)胞分裂素的水平過高也會(huì)刺激某些外植體的多酚氧化酶的活性，從而使褐變現(xiàn)象加深。d、培養(yǎng)條件不當(dāng)如果光照過強(qiáng)、溫度過高、培養(yǎng)時(shí)間過長等，均可使多酚氧化酶的活性提高，從而加速被培養(yǎng)的外植體的褐變程度。為了提高組織培養(yǎng)的成苗率，必須對(duì)外植體的褐變現(xiàn)象加以控制。可以采用以下措施防止、減輕褐變現(xiàn)象的發(fā)生。1、選擇合適的外植體一般來說，最好選擇生長處于旺盛的外植體，這樣可以使褐變現(xiàn)象明顯減輕。2、合適的培養(yǎng)條件無機(jī)鹽成分、植物生長物質(zhì)水平、適宜溫度、及時(shí)繼代培養(yǎng)均可以減輕材料的褐變現(xiàn)象。3、使用抗氧化劑在培養(yǎng)基中，使用半胱氨酸、抗壞血酸等抗氧化劑能夠較為有效地避免或減輕很多外植體的褐變現(xiàn)象。另外，使用0.1%-0.5%的活性炭對(duì)防止褐變也有較為明顯的效果。4、連續(xù)轉(zhuǎn)移對(duì)容易褐變的材料可間隔2-24小時(shí)的培養(yǎng)后，再轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上，這樣經(jīng)過連續(xù)處理7-10天后，褐變現(xiàn)象便會(huì)得到控制或大為減輕。(2)繼代培養(yǎng)在初代培養(yǎng)的基礎(chǔ)上所獲得的芽、苗、胚狀體和原球莖等，數(shù)量都還不夠，它們需要進(jìn)一步增殖，使之越來越多，從而發(fā)揮快速繁殖的優(yōu)勢。繼代培養(yǎng)是繼初代培養(yǎng)之后的連續(xù)數(shù)代的擴(kuò)繁殖培養(yǎng)過程。旨在繁殖出相當(dāng)數(shù)量的無根苗，最后能達(dá)到邊繁殖邊生根的目的。繼代培養(yǎng)的后代是按幾何級(jí)數(shù)增加的過程。如果以2株苗為基礎(chǔ)，那么經(jīng)10代將生成210株苗。繼代培養(yǎng)中擴(kuò)繁的方法包括：切割莖段、分離芽叢、分離胚狀體、分離原球莖等。切割莖段常用于有伸長的莖梢、莖節(jié)較明顯的培養(yǎng)物。這種方法簡便易行，能保持母種特性。培養(yǎng)基常是MS基本培養(yǎng)基；分離芽叢適于由愈傷組織生出的芽叢。培養(yǎng)基常是分化培養(yǎng)基。若芽叢的芽較小?？上惹谐裳繀残K，放入MS培養(yǎng)基中，待到稍大時(shí)，再分離開來繼續(xù)培養(yǎng)。增殖使用的培養(yǎng)基對(duì)于一種植物來說每次幾乎完全相同，由于培養(yǎng)物在接近最良好的環(huán)境條件，營養(yǎng)供應(yīng)和激素調(diào)控下，排除了其他生物的競爭，所以能夠按幾何級(jí)數(shù)增殖。在快速繁殖中初代培養(yǎng)只是一個(gè)必經(jīng)的過程，而繼代培養(yǎng)則是經(jīng)常性不停的進(jìn)行過程。但在達(dá)到相當(dāng)數(shù)量之后，則應(yīng)考慮使其中一部分轉(zhuǎn)入生根階段。從某種意義上講，增殖只是儲(chǔ)備母株，而生根才是增殖材料的分流，生產(chǎn)出成品。（3）繼代培養(yǎng)時(shí)材料的玻璃化實(shí)踐表明，當(dāng)植物材料不斷地進(jìn)行離體繁殖時(shí)，有些培養(yǎng)物的嫩莖、葉片往往會(huì)呈半透明水跡狀，這種想象通常稱為玻璃化。它的出現(xiàn)會(huì)使試管苗生長緩慢、繁殖系數(shù)有所下降。玻璃化為試管苗的生理失調(diào)癥。因?yàn)槌霈F(xiàn)玻璃化的嫩莖不宜誘導(dǎo)生根，因此，使繁殖系數(shù)大為降低。在不同的種類、品種間，試管苗的玻璃化程度也有所差異。當(dāng)培養(yǎng)基上細(xì)胞分裂素水平較高時(shí)，也容易出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象。在培養(yǎng)基中添加少量聚乙烯醇、脫落酸等物質(zhì)，能夠在一定程度上減輕玻璃化的現(xiàn)象發(fā)生。呈現(xiàn)玻璃化的試管苗，其莖、葉表面無蠟質(zhì)，體內(nèi)的極性化合物水平較高，細(xì)胞持水力差，植株蒸騰作用強(qiáng)，無法進(jìn)行正常移栽。這種情況主要是由于培養(yǎng)容器中空氣濕度過高，透氣性較差造成的，其具體解決的方法為：a、增加培養(yǎng)基中的溶質(zhì)水平，以降低培養(yǎng)基的水勢；b、減少培養(yǎng)基中含氮化合物的用量；c、增加光照d、增加容器通風(fēng)，最好進(jìn)行CO2施肥，這對(duì)減輕試管苗玻璃化的現(xiàn)象有明顯的作用；e、降低培養(yǎng)溫度，進(jìn)行變溫培養(yǎng)，有助于減輕試管苗玻璃化現(xiàn)象發(fā)生；f、降低培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素含量，可以考慮加入適量脫落酸。3、生根培養(yǎng)當(dāng)材料增殖到一定數(shù)量后，就要使部分培養(yǎng)物分流到生根培養(yǎng)階段。若不能及時(shí)將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)到生根培養(yǎng)基上去，就會(huì)使久不轉(zhuǎn)移的苗子發(fā)黃老化，或因過分擁擠而使無效苗增多造成拋棄浪費(fèi)。根培養(yǎng)是使無根苗生根的過程，這個(gè)過程目的是使生出的不定根濃密而粗壯。生根培養(yǎng)可采用1/2或者1/4MS培養(yǎng)基，全部去掉細(xì)胞分裂素，并加入食糧非的生長素（NAA、IBA等）。誘導(dǎo)生根可以采用下列方法a、將新梢基部浸入50或100*10-6IBA溶液中處理4-8小時(shí)；b、在含有生長素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-6天c、直接移入含有生長素的生根培養(yǎng)基中。上述三種方法均能誘導(dǎo)新梢生根，但前兩種方法對(duì)新生根的生長發(fā)育則更為有利。而第三種對(duì)幼根的生長有抑制作用。其原因是當(dāng)根原始體形成后較高濃度生長素的繼續(xù)存在，則不利于幼根的生長發(fā)育。不過這種方法比較可行。另外也可采用下列方法就可生根。1、延長在增殖培養(yǎng)基中的培養(yǎng)時(shí)間；2、有意降低一些增殖倍率，減少細(xì)胞分裂素的用量（即將增殖與生根合并為一步）；3、切割粗壯的嫩枝在營養(yǎng)缽中直接生根，此方法則沒有生根階段?？梢允∪ヒ淮闻囵B(yǎng)基制作，切割下的插穗可用生長素溶液浸蘸處理，但這種方法只適于一些容易生根的作物。另外少數(shù)植物生根比較困難時(shí)，則需要在培養(yǎng)基中放置濾紙橋，使其略高于液面，靠濾紙的吸水性供應(yīng)水和營養(yǎng)，從而誘發(fā)生根。從胚狀體發(fā)育成的小苗，常常有原先已分化的根，這種根可以不經(jīng)誘導(dǎo)生根階段而生長。但因經(jīng)胚狀體發(fā)育的苗數(shù)特別多，并且個(gè)體較小，所以也常需要一個(gè)低濃度或沒有植物激素的培養(yǎng)基培養(yǎng)的階段，以便壯苗生根。試管內(nèi)生根壯苗的階段，為了成功地將移植到試管外的環(huán)境中，以使試管苗適應(yīng)外界的環(huán)境條件。通常不同植物的適宜馴化溫度不同。如菊花，以18-20℃為宜。實(shí)踐證明植物生長的溫度過高不但會(huì)牽涉到蒸騰加強(qiáng)。而且還牽涉到菌類易滋生的問題。溫度過低使幼苗生長遲緩，或不易成活。春季低溫時(shí)苗床可加設(shè)電熱線，使基質(zhì)溫度略高于氣溫2-3℃，這不但有利于生根和促進(jìn)根系發(fā)達(dá)，而且有利于提前成活。移植到試管外的植物苗光強(qiáng)度應(yīng)比移植前培養(yǎng)有所提高，并可適應(yīng)強(qiáng)度較高的漫射光，（約4000lx左右），以維持光合作用所需光照強(qiáng)度。但光線過強(qiáng)刺激蒸騰加強(qiáng)，會(huì)使水分平衡的矛盾更尖銳。五、馴化移栽試管苗移栽是組織培養(yǎng)過程的重要環(huán)節(jié)，這個(gè)工作環(huán)節(jié)做不好，就會(huì)造成前功盡棄。為了做好試管苗的移栽，應(yīng)該選擇合適的基質(zhì)，并配合以相應(yīng)的管理措施，才能確保整個(gè)組織培養(yǎng)工作的順利完成。試管苗由于是在無菌、有營養(yǎng)供給、適宜光照和溫度近100%的相對(duì)濕度環(huán)境條件下生長的，因此，在生理、形態(tài)等方面都與自然條件生長的小苗有著很大的差異。所以必須通過煉苗，例如通過控水、減肥、增光、降溫等措施，使她們逐漸地適應(yīng)外界環(huán)境，從而使生理、形態(tài)、組織上發(fā)生相應(yīng)的變化，使之更適合于自然環(huán)境，只有這樣才能保證試管苗順利移栽成功。從葉片上看，試管苗的角質(zhì)層不發(fā)達(dá)，葉片通常沒有表皮毛，或僅有較少表皮毛，甚至葉片上出現(xiàn)了大量的水孔，而且，氣孔的數(shù)量、大小也往往超過普通苗。由此可知，試管苗更適合于高濕的環(huán)境生長，當(dāng)將它們移栽到試管外環(huán)境時(shí)，試管苗失