甾體激素類藥物的鑒別

甾體激素類藥物的鑒別第1頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一第2頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一鑒別，what&why?鑒別試驗(yàn)：是根據(jù)藥物的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì),采用物理、化學(xué)或生物學(xué)方法來(lái)判斷藥物的真?zhèn)巍Ｊ撬帣z工作中的首項(xiàng)任務(wù)，只有在藥物鑒別無(wú)誤的情況下，才能進(jìn)行藥物的雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定。第3頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一ABCD12345678910111213141516171819

基本結(jié)構(gòu)甾體激素類藥物均具有環(huán)戊烷駢多氫菲母核。第4頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一鑒別方法制備衍生物測(cè)熔點(diǎn)光譜法色譜法

呈色反應(yīng)

官能團(tuán)反應(yīng)化學(xué)鑒別法UVIRTLCHPLC第5頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一（一）與強(qiáng)酸的呈色反應(yīng)

硫酸呈色反應(yīng)應(yīng)用最廣1）操作簡(jiǎn)便2）反應(yīng)靈敏3）操作條件不易掌握（某些甾體激素藥物與硫酸—乙醇或硫酸—甲醇作用而呈色。如甲睪酮.）甾體激素類藥物呈色H2SO4

H3PO4HClO4HCl（熒光）(甾體母核）第6頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一1、C17–α–醇酮基（還原性）

能與堿性酒石酸銅試液（斐林試液）、氨制AgNO3試液（多倫試液）、四氮唑鹽反應(yīng)呈色。其中以四氮唑鹽的顯色反應(yīng)最為常用，不但可用作層析法的顯色劑，還可用于含量測(cè)定.

適用：腎上腺皮質(zhì)激素。(二)官能團(tuán)的反應(yīng)第7頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一+H2O+CH3COOH++OH-醋酸潑尼松深紅色的三苯甲鐕四氮唑鹽第8頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一2、C3–酮基和C20–酮基與羰基試劑2,4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼反應(yīng)生成腙。第9頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一+HCl黃色3，20-雙腙室溫下長(zhǎng)時(shí)間加熱第10頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一

適用：具有甲酮基的甾體激素類藥物。3.C17-甲酮基的呈色反應(yīng)

能與亞硝基鐵氰化鈉、間二硝基酚、芳香醛反應(yīng)呈色。孕激素黃體酮專屬性反應(yīng)，稱為“堿性硝普鈉反應(yīng)。黃體酮其他甾體亞硝基鐵氰化鈉藍(lán)紫色淡橙色或不顯色第11頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一

適用：雌激素類藥物。4.酚羥基的呈色反應(yīng)

能與重氮苯磺酸發(fā)生偶合反應(yīng)，生成紅色偶氮染料。苯甲酸雌二醇H++紅色第12頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一5、乙炔基沉淀反應(yīng)

適用：含炔基的甾體激素類藥物（炔雌醇、炔諾酮）。

機(jī)理：↓HNO3++NaOH滴定，電位法指示終點(diǎn)第13頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一

原理：一些甾體激素類藥物具有醋酸酯、戊酸酯及已酸酯的結(jié)構(gòu)，可先行水解，根據(jù)水解產(chǎn)物來(lái)鑒別。6、水解產(chǎn)物的反應(yīng)

適用：本類藥物C3、C17或C21位上羥基的酯香戊酸、己酸酯類藥物，有特臭。

醋酸酯類藥物：第14頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一有機(jī)氟Fˉ有機(jī)破壞有機(jī)氯7、鹵元素的呈色反應(yīng)茜素氟藍(lán)—硝酸亞鈰硝酸—硝酸銀呈藍(lán)紫色

ClˉAgCl鹵素在母核上：氧瓶燃燒法破壞如地塞米松磷酸鈉鹵素在側(cè)鏈上：加熱水解法破壞如丙酸倍氯他索第15頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一△4–3–酮C17–α–醇酮基C17–β–羥基C17–甲酮基A環(huán)為3–OH苯環(huán)腎上腺皮質(zhì)激素++雄性與蛋白同化激素++雌性激素++孕激素++鑒別反應(yīng)UV、羰基試劑、氨基脲反應(yīng)還原性（堿性酒石酸酮、氨制AgNO3）可成酯與亞硝基鐵氰化鈉、間二硝基苯反應(yīng)UV、與重氮苯磺酸鹽反應(yīng)總結(jié)第16頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一制備衍生物測(cè)定其熔點(diǎn)[原理]1.甾醇、甾酮類藥物可與一些試劑反應(yīng)生成酯、肟、縮氨脲.測(cè)定其熔點(diǎn)進(jìn)行鑒別。2.利用醇制堿液水解甾體酯類生成相應(yīng)的母體，測(cè)定其熔點(diǎn)進(jìn)行鑒別。[特點(diǎn)]繁瑣費(fèi)時(shí)，但專屬性強(qiáng).目前仍為一些國(guó)家藥典采用。第17頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一炔雌醇m.p.201℃黃體酮雙肟m.p.238℃第18頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一苯丙酸諾龍縮氨基脲m.p.178~185℃丙酸睪丸素m.p.150~156℃第19頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一★紫外分光光度法[原理]：具有C=C-C=O共軛系統(tǒng)，

△４-3-酮～240nm和C=C-C=C共軛系統(tǒng)，苯環(huán)（B帶：280nm，K帶：220nm）1.可用規(guī)定波長(zhǎng)處的吸收度鑒別如:曲安西龍2.吸收度的比值法。如:丙酸倍氯米松第20頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一△４-3-酮～240nm第21頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一★★紅外分光光度法[必要性]1.許多重要的甾體激素藥物紫外光譜非常相似，紫外光譜鑒別缺乏專屬性。2.甾體激素藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)上僅有微小的差異，也難以用化學(xué)鑒別法來(lái)區(qū)分。第22頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一紅外分光光度法的優(yōu)勢(shì)1.對(duì)樣品無(wú)破壞,樣品用量較少

2.特征性極強(qiáng)、信息量豐富:每種化合物都有紅外吸收，從紅外光譜可以得到大量信息。官能團(tuán)區(qū)的吸收反映了化合物中官能團(tuán)的特征，而指紋區(qū)的吸收對(duì)于指認(rèn)分子提供了可靠的依據(jù)。第23頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一1505cm-1ν3505cm-13300cm-1ν1590cm-13610cm-1ν酚羥基醇羥基1616cm-1苯環(huán)的骨架振動(dòng)亞甲基、角甲基吸收帶γCH苯環(huán)指紋區(qū)第24頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一黃體酮第25頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一薄層色譜法[特點(diǎn)]：簡(jiǎn)便、快速、分離效能高。主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別ChP很多甾體激素制劑均用該法鑒別。[應(yīng)用范圍]：甾體激素制劑的鑒別、純度檢查以及含量測(cè)定前的分離和制劑穩(wěn)定性的研究。第26頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一[方法]：對(duì)照品法1.供試品點(diǎn)樣通常需做前處理（如有機(jī)溶劑提?。?，消除注射液、片劑及軟膏劑等輔料的干擾。2.要求供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色和位置與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)相同。[顯色方法]：多用熒光顯色法或熒光淬滅法熒光顯色第27頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一高效液相色譜法主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別方法：對(duì)照品法一般在含量測(cè)定的同時(shí)進(jìn)行鑒別.

要求在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品峰的tR與對(duì)照品峰的tR一致。第28頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一紫外光譜褶合變換可視化指紋譜鑒別拓展：----袁麗霞,張中湖.甾體激素的紫外光譜褶合變換可視化指紋譜鑒別研究[J]藥學(xué)實(shí)踐雜志,2007,25(1)褶合變換：是根據(jù)正交分析理論,對(duì)于任意一條光譜曲線,在某個(gè)鄰域內(nèi)(即其中的某一小段曲線)可以用正交多項(xiàng)式任意逼近,對(duì)于階次相同的正交分量,可以通過(guò)改變變換窗口的大小獲得不同的光譜,從而在不同階次上可以得到一系列褶合變換光譜,相應(yīng)的褶合光譜是同階次的導(dǎo)數(shù)光譜的線性組?？茖W(xué)計(jì)算可視化技術(shù)：是數(shù)值計(jì)算中最直觀最形象的方法,它從大量的原始數(shù)據(jù)中提取有效數(shù)據(jù)開(kāi)始,通過(guò)映射生成繪制圖像的幾何原語(yǔ),隨之利用交互控制對(duì)幾何原語(yǔ)選定幀合成、色彩、紋理及陰影等參數(shù)完成圖像的繪制,最終顯示出繪制的圖像。第29頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一第30頁(yè)，共33頁(yè)，2023年，2月20日，星期一研究方法：選取地塞米松等23種結(jié)構(gòu)相近甾體激素，運(yùn)用褶合變換挖掘紫外光譜的特征信息并通過(guò)科學(xué)計(jì)算可視化技術(shù)獲取