生化實(shí)驗(yàn)03斐林試劑比色法測(cè)還原糖含量課件

實(shí)驗(yàn)03

植物組織中還原糖含量的測(cè)定

（斐林試劑比色法）1脫色的程度與溶液中還原性糖含量成正比關(guān)系。在590nm波長(zhǎng)下比色測(cè)定吸光度，根據(jù)吸光度的減少值查標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可計(jì)算出所測(cè)樣品中還原糖的含量。一、原理植物組織中的可溶性糖可分為還原糖（主要是葡萄糖和果糖）和非還原糖（主要是蔗糖）兩類(lèi)。還原糖具有自由的醛基和酮基，具有還原性。在堿性、加熱條件下，還原基團(tuán)能把斐林試劑中CuSO4的Cu2＋還原成Cu＋，生成Cu2O紅色沉淀，藍(lán)色的斐林試劑溶液因失出部分Cu2＋而脫色。2材料：新鮮植物葉片

儀器設(shè)備：分光光度計(jì)、分析天平、低速離心機(jī)、水浴鍋等

試劑：

1.斐林試劑A液：40gCuSO4·5H2O溶解于蒸餾水定容至1.0L。

2.斐林試劑B液：200g酒石酸鉀鈉（KNaC4H4O6·5H2O）與150gNaOH溶于蒸餾水中，并定容至1.0L。

A、B兩液分別貯存，使用前按1：1體積混合。

（已配好）二、材料、儀器設(shè)備及試劑

3三、實(shí)驗(yàn)方法與步驟

1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作取5支試管編號(hào)，按下表分別加入各試劑。項(xiàng)目123451.標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液（ml）0.002.004.006.00樣品液6ml2.H2O(ml)6.004.002.000.000.00每管葡萄糖含量(mg)0.002.004.006.00待測(cè)3.斐林試劑量(ml)4.004.004.004.004.00

A590值A(chǔ)1A2A3A4A5吸光值差值(ΔA590

)A1-A1A1-A2A1-A3A1-A4A1-A55處理方法：

加斐林試劑后搖勻，加蓋沸水浴中15min，自然冷卻轉(zhuǎn)入離心管，平衡后放入離心機(jī)??！離心：2500r/min5min小心取出，取上清液測(cè)吸光值6標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：以葡萄糖量(mg)為橫座標(biāo)，吸光度差值(ΔA590

）為縱座標(biāo)，在座標(biāo)紙上繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。比色測(cè)定：

用H2O作調(diào)0空白參比液！

在590nm波長(zhǎng)下測(cè)定各管的吸光度。

ΔA590葡萄糖mg073.0～4.0g樣品—→加水研磨成勻漿后轉(zhuǎn)入50ml大試管—→80℃水浴20min（間歇震蕩）—→冷卻后轉(zhuǎn)入100ml容量瓶定容、過(guò)濾后得到待測(cè)溶液。

取待測(cè)液6.0ml進(jìn)行測(cè)定（按制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的步驟）。2樣品還原糖提取與測(cè)定8樣品還原糖的含量（%）＝五、結(jié)果計(jì)算

（X：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的糖質(zhì)量mg；VT：提取液總體積（mL）；W：樣品鮮質(zhì)量（g）；Vs：測(cè)定時(shí)取用的樣品體積（mL）；N：樣品稀釋倍數(shù)）102種溫度水浴處理，不可弄