血漿蛋白質與含氮化合物的生物化學檢驗

1第1頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二第一節(jié)血漿蛋白質第二節(jié)氨基酸代謝紊亂第三節(jié)核苷酸代謝紊亂2第2頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二第一節(jié)血漿蛋白質定義：血漿和組織液中蛋白質，是血漿固體成份中含量最多、組成復雜、功能廣泛的一類化合物。3第3頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二一、血漿蛋白質的功能及分類（一）血漿蛋白質的功能維持血漿膠體滲透壓----清蛋白的主要功能作為激素、維生素、脂類、代謝產物、離子、藥物等的載體作為pH緩沖系統(tǒng)的一部分營養(yǎng)、修補組織蛋白作用抑制組織蛋白酶在血漿中起催化作用參與凝血與纖維蛋白溶解作為免疫球蛋白與補體等免疫分子，組成體液免疫防御系統(tǒng)。4第4頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二（二）血漿蛋白質的分類1．電泳分類法

醋酸纖維素薄膜電泳一般可將血清蛋白質分為清蛋白、α1、α2、β、γ球蛋白5條主要區(qū)帶。2．功能分類法—復雜

運輸載體類免疫球蛋白補體蛋白類凝血因子類蛋白酶抑制物血清酶類蛋白類激素5第5頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二二、血清總蛋白及主要組分正常與異常電泳

人血漿總蛋白(totalprotein，TP)濃度為60～80g/L臨床實驗室采用的標本多為血清測定血清TP的首選方法：雙縮脲法樣品采集時，患者應置仰臥位，直立時升高。靜脈采血時止血帶壓迫靜脈時間超過3min，TP也可上升10%。劇烈運動后立即采血TP最多可升高12%。6第6頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二正常血清蛋白電泳圖譜增示意圖及其掃描曲線

（一）血清蛋白電泳的正常組分7第7頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二（二）異常電泳圖譜的臨床意義1.異常血清蛋白電泳圖譜分型2.典型異常血清蛋白電泳圖譜3．漿細胞病與M蛋白8第8頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二異常血清蛋白質電泳圖譜的分型及其特征圖譜類型TPAlbα1α2βγ低蛋白血癥型↓↓↓↓N↑N↓N↑腎病型↓↓↓↓N↑↑↑↑↓N↑肝硬化型N↓↑↓↓N↓N↓β-γ↑（融合）彌漫性肝損害型N↓↓↓↑↓↑慢性炎癥型↓↑↑↑急性時相反應型N↓N↑↑NM蛋白血癥型在α-γ區(qū)帶中出現(xiàn)M蛋白區(qū)帶高α2(β)-球蛋白血癥型↓↑↑↑妊娠型↓N↓↑↑

N

蛋白質缺陷型個別區(qū)帶出現(xiàn)特征性缺乏第9頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二2．典型異常血清蛋白電泳圖譜

A正常人

B腎病綜合征C肝硬化(β-γ橋)

D肝硬化(不典型β-γ橋)

E多發(fā)性骨髓瘤IgA型F多發(fā)性骨髓瘤IgG型10第10頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二3．漿細胞病與M蛋白正常血清蛋白電泳上顯示的寬γ區(qū)帶主要成分:免疫球蛋白(Ig)。漿細胞?。╬lasmacelldyscrasia）異常漿細胞增殖，產生大量單克隆Ig或其輕鏈或重鏈片段，病人血清或尿液中可出現(xiàn)結構單一的M蛋白（monoclonalprotein）在蛋白電泳時呈現(xiàn)一個色澤深染的窄區(qū)帶，此區(qū)帶較多出現(xiàn)在γ或β區(qū)，偶見于α區(qū)。11第11頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二血漿蛋白質的性質功能及其與電泳區(qū)帶的關系電泳區(qū)帶蛋白質種類成人參考值（g/L）半壽期（d）分子量（kD）等電點含糖量(%)功能前清蛋白前清蛋白0.2~0.41.9554.70.5營養(yǎng)、運載清蛋白清蛋白35~5215~1966.24~5.80維持膠壓、運載和營養(yǎng)等α1-球蛋白α1-抗胰蛋白酶0.9~2.04524.812蛋白酶抑制劑α1-酸性糖蛋白0.5~1.25402.7~445免疫應答修飾劑甲胎蛋白3×10－569胎兒期蛋白高密度脂蛋白1.7~3.25200膽固醇逆轉運α2-球蛋白結合珠蛋白0.3~2.0285~4004.112結合血紅蛋白α2-巨球蛋白1.3~3.057205.48蛋白酶抑制劑銅藍蛋白0.1~0.44.51324.4鐵氧化酶β-球蛋白轉鐵蛋白2.0~3.6779.65.76運鐵到胞內低密度脂蛋白0.6~1.55300運膽固醇到組織C30.9~1.81852補體成分C40.1~0.42067補體成分β2-微球蛋白0.001~0.00211.8纖維蛋白原2.0~4.02.53405.53凝血因子γ-球蛋白IgG7.0~1624144~1506~7.33免疫球蛋白IgA0.7~4.06~1608免疫球蛋白IgM0.4~2.3597012免疫球蛋白C-反應蛋白＜5~1156.20炎癥介質第12頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二三、血漿蛋白主要組分的生物化學檢驗

（一）前清蛋白（prealbumin，PA）1.性質分子量55kD由肝臟細胞合成的糖蛋白電泳時遷移在Alb之前半壽期1.9d生理功能：作為組織修補材料和運載蛋白13第13頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二2.檢測

目前多采用免疫透射比濁法

3.臨床意義（一）前清蛋白（prealbumin，PA）作為營養(yǎng)不良的指標作為肝功能不全的指標負性急性時相反應蛋白PA:200～400mg/L正常PA:100～150mg/L輕度缺乏PA:50～100mg/L中度缺乏PA＜50mg/L嚴重缺乏14第14頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二（二）清蛋白

（albumin，Alb）1．性質585個氨基酸殘基組成分子量66.2kD含17個二硫鍵，是唯一不含糖的血漿蛋白質肝實質細胞合成半壽期19d血漿中含量最多的蛋白質15第15頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二維持血漿膠體滲透壓：血漿滲透壓的75%～80%由Alb維持血漿中主要的載體蛋白，具有結合各種配體分子的能力緩沖酸堿維持酸堿平衡作用營養(yǎng)作用2．生理功能3．Alb的檢測染料結合法----國內最常用方法是溴甲酚綠法電泳法免疫法(免疫擴散法、免疫比濁法和RIA)電化學測定法16第16頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二4．臨床意義（1）低清蛋白血癥1）Alb合成降低：2）Alb的分布異常3）Alb丟失4）Alb分解代謝增加5）無清蛋白血癥(analbuminaemia)

（2）血漿Alb增高（3）由Alb含量估計其配體的存在形式和作用（4）作為個體營養(yǎng)狀態(tài)的評價指標（5）Alb的遺傳性變異17第17頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二4．臨床意義血漿Alb作為營養(yǎng)指標的評價標準＞35g/L正常28～34g/L輕度缺乏21～27g/L中度缺乏＜21g/L嚴重缺乏18第18頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二（三）α1-抗胰蛋白酶（α1-AT或AAT）基因定位于14q31-32.3394個氨基酸殘基組成分子量52kDpI為4.8含糖10%～12%在醋纖膜電泳中位于α1區(qū)帶主要由肝細胞合成，單核細胞、肺泡巨噬細胞和上皮細胞也能合成人血漿中主要的絲氨酸蛋白酶的抑制劑

1．性質

19第19頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二

2．ATT基因的遺傳表型

常染色體共顯性遺傳，有多種遺傳表型現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)至少有75種基因變體主要根據電泳遷移率分類移動快的AAT變體用字母表前面的字母表示移動最慢的基因以PiZ表示。F型--fast,M型--middle,S型—slow根據等位基因出現(xiàn)頻率的不同，缺陷變體可進一步分為常見和少見兩部分最常見的缺陷變體為Z和S型表現(xiàn)為以下基因型：ZZ、SS、SZ、MZ、MS。20第20頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二3．臨床意義PiZZ型、PiSS型甚至PiMS型常伴有早年（20～30歲）出現(xiàn)的肺氣腫低血漿AAT可發(fā)現(xiàn)于胎兒呼吸窘迫綜合征ZZ蛋白聚集在肝細胞，導致肝硬化PiZZ表型的新生兒中10%～20%在出生數周后易患肝炎，最后因活動性肝硬化致死PiZZ表型的某些成人會發(fā)生肝損害AAT缺乏：AAT屬急性時相蛋白，在炎癥、感染、腫瘤、肝病時均顯著增加。AAT增加：21第21頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二4．AAT的檢測血清蛋白電泳單向擴散試驗免疫散濁比濁免疫透射比濁法。對于AAT降低者可進一步采用等電聚焦電泳或分子生物學方法進行AAT表型分析。22第22頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二（四）α1-酸性糖蛋白（AAG）181個氨基酸殘基組成分子量約40kD屬血漿中含糖量最高（達45%）、酸性最強的糖蛋白pI為2.7～4.0典型的急性時相反應蛋白

主要在肝臟產生,某些腫瘤組織也可產生1．性質23第23頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二2．臨床意義目前主要作為急性時相反應指標：在風濕病、惡性腫瘤及心肌梗死等炎癥或組織壞死時一般增加3～4倍。AAG增高是活動性潰瘍性結腸炎最可靠的指標之一。AAG增高：糖皮質激素增加，包括內源性的庫欣綜合征和外源性強的松、地塞米松等藥物治療時，可引起AAG升高。AAG降低：營養(yǎng)不良、嚴重肝損害、腎病綜合征以及胃腸道疾病致蛋白嚴重丟失等情況下AAG降低。此外雌激素可使AAG降低。24第24頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二3．α1-酸性糖蛋白的檢測

過氯酸和磷鎢酸分級沉淀AAG后，測定蛋白質或含糖量再計算之。免疫擴散免疫比濁法25第25頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二（五）結合珠蛋白（haptoglobin，Hp）一種急性時相蛋白和轉運蛋白在電泳中位于α2區(qū)帶由α與β鏈形成α2β2四聚體，α鏈有α1及α2兩種，而α1又有α1F及α1S兩種遺傳變異體，兩種變異體僅為一個氨基酸殘基差異1．性質與遺傳表型26第26頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二結合珠蛋白的遺傳表型表型亞單位的結構組成組成Hp1-1

(α1F)2β2α1Fα1Sβ2(α1S)2β2分子量約為90kD，α鏈含83個氨基酸殘基，β鏈含245個氨基酸殘基Hp2-1

(α1Sα2β2)n(α1Fα2β2)n分子量為120~200kD的聚合體，由于n不同，可在電泳中出現(xiàn)多條帶Hp2-2

(α2β)nn=3~8分子量為160~400kD，由于n不同，可在電泳中出現(xiàn)多條帶27第27頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二2．功能運輸血管內游離的血紅蛋白(Hb)到網狀內皮細胞降解，防止Hb從腎臟丟失而為機體有效地保留鐵，并能避免Hb對腎臟的損傷。28第28頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二3．臨床意義

Hp濃度下降見于：①溶血性疾病如溶血性貧血、輸血反應、瘧疾。Hp參考值范圍較寬，須連續(xù)觀察以監(jiān)測溶血是否處于進行狀態(tài)。對于溶血性疾病合適的組合檢測項目包括血漿Hp、LD和游離Hb。血管外溶血不會使Hp發(fā)生變化。②嚴重肝病患者，其Hp合成減少。Hp濃度升高見于：

屬急性時相反應蛋白，當燒傷和腎病綜合征情況下，血Hp常明顯升高。29第29頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二4．Hp的檢測

放射免疫擴散法免疫比濁法定量檢測Hp亞型聚丙烯酰胺凝膠電泳等電聚焦電泳30第30頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二（六）α2-巨球蛋白

（α2-macroglobulin，α2-MG或AMG）血漿中分子量最大的糖蛋白，約為720kD，含糖量約8%由肝細胞、單核細胞和星形細胞合成半壽期約5d包括補體C3和C4在內的一組血漿蛋白的主要成員，為硫酯鍵血漿蛋白家族。主要特性是能與多種離子和分子結合，特別是能與蛋白水解酶結合而抑制酶的活性可選擇地保護某些蛋白酶活性1．性質31第31頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二2．臨床意義不屬于急性時相反應蛋白。低清蛋白血癥，尤其是腎病綜合征時，α2-MG含量可顯著增高α2-MG水平降低見于：嚴重的急性胰腺炎和進展型前列腺癌治療前免疫比濁法3．α2-MG的檢測方法32第32頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二（七）銅藍蛋白（ceruloplasmin，Cp）含銅的α2球蛋白由1046個氨基酸殘基組成含糖約8%~9.5%每分子結合6～8個銅原子，由于含銅而呈藍色95%的血清銅存在于Cp中，其余5%呈可擴散狀態(tài)血循環(huán)中的Cp可認為是銅的無毒性代謝庫1．性質33第33頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二（七）銅藍蛋白（ceruloplasmin，Cp）血漿銅的轉運具有鐵氧化酶作用，將Fe2+氧化為Fe3+，調節(jié)鐵的運輸、利用和氧化還原反應抗氧化作用，抑制膜脂質被金屬離子的過氧化作用2．功能34第34頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二（七）銅藍蛋白（ceruloplasmin，Cp）Cp濃度減少有關的疾?。喊╓ilson病、營養(yǎng)性銅缺乏和Menkes?。ㄟz傳性銅吸收不良）。屬于急性時相反應蛋白：在妊娠、感染、創(chuàng)傷和腫瘤時血漿濃度增加。但在營養(yǎng)不良、嚴重肝病及腎病綜合征時往往下降。3．臨床意義

35第35頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二一種常染色體隱性遺傳病因血漿Cp減少，血漿游離銅增加，銅沉積在肝可引起肝硬化，沉積在腦基底節(jié)的豆狀核導致豆狀核變性，該病又稱為肝豆狀核變性該病的原因不全是Cp減少大部分患者可有肝功損害并伴神經系統(tǒng)癥狀不及時治療，此病是進行性和致命的，宜及時診斷可用銅螯合劑-青霉胺治療Wilson病診斷標準：Cp下降，血清總銅濃度降低、游離銅增加和尿銅排泄增加，肝中銅的含量升高Wilson病36第36頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二放射免疫擴散法散射免疫比濁法透射免疫比濁法4.Cp的檢測

37第37頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二

（八）轉鐵蛋白（transferrin，TRF）分子量約79.6kD為單鏈糖蛋白，含糖量約6%電泳位置在β區(qū)帶等電點5.5～5.9主要由肝細胞合成半壽期為7d能可逆地結合多價陽離子，每分子TRF可結合2個Fe3+血漿中TRF的濃度受食物鐵供應的影響1．性質38第38頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二多采用免疫比濁測定法2．臨床意義用于貧血的鑒別診斷負性急時相反應蛋白：在炎癥、腫瘤時常隨著Alb、前清蛋白同時下降作為營養(yǎng)狀態(tài)的一項指標3．檢測39第39頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二

由肝細胞合成的典型急性時相反應蛋白由5個相同亞基非共價結合成盤形多聚體分子量為115～140kD電泳分布在慢γ區(qū)帶在鈣離子存在下，結合多種細菌、真菌及原蟲等體內的多糖物質以及磷酸膽堿，卵磷脂和核酸在鈣離子缺乏情況下，結合多聚陽離子與抗體相似，可引發(fā)對入侵微生物對細胞的免疫調理作用和吞噬作用可識別、結合從損傷組織中釋放的毒性物質，然后解毒或從血中清除本身在發(fā)生調理作用后被分解（九）C-反應蛋白(C-reactiveprotein，CRP)1．性質40第40頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二第一個被認識的急性時相反應蛋白，是急性時相反應的一個極靈敏指標血漿中CRP濃度在急性心肌梗死、創(chuàng)傷、感染、炎癥、外科手術、腫癌浸潤時迅速顯著地增高CRP是非特異性指標，主要臨床用途：①篩選器質性疾病②評估炎癥性疾病的活動度和療效監(jiān)控③識別系統(tǒng)性紅斑狼瘡、白血病和外科手術后等并發(fā)的感染④監(jiān)測腎移植后的排斥反應等2．臨床意義41第41頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二散射免疫比濁法透射免疫比濁法酶免疫分析法熒光免疫分析法3．檢測42第42頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二四、急性時相反應蛋白

AATAAGCpCRPHpα1-抗糜蛋白酶血紅素結合蛋白C3C4纖維蛋白原顯著升高或升高降低

PAAlbTRF急性負相時相反應蛋白43第43頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二食物蛋白消化吸收體內合成（非必需氨基酸）蛋白質（主）合成酮體氧化供能糖脫羧胺類轉變其它含氮化合物經腎排出(1g/d)氨基酸代謝庫氨基酸代謝概況分解脫氨-酮酸（生成尿素）組織蛋白質分解第二節(jié)氨基酸代謝紊亂一、體內氨基酸代謝44第44頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二二、氨基酸代謝紊亂的種類原發(fā)性氨基酸代謝紊亂：由于參與氨基酸代謝的酶或其他蛋白因子缺乏而引起的遺傳性疾病繼發(fā)性氨基酸代謝紊亂：與氨基酸代謝有關的器官如肝、腎出現(xiàn)嚴重病變而導致的。氨基酸血癥（aminoacidemia）：當酶缺乏出現(xiàn)在代謝途徑的起點時，其作用的氨基酸將在血循環(huán)中增加。氨基酸尿癥（aminoaciduria）：升高的氨基酸從尿中排出。45第45頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二氨基酸代謝紊亂可發(fā)生于：①膜轉移機制障礙，包括氨基酸從小腸吸收和腎小管重吸收；②氨基酸分解代謝途徑障礙；

③尿素合成途徑障礙。46第46頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二①中性氨基酸載體：轉運中性氨基酸；

②酸性氨基酸載體：轉運酸性氨基酸；

③堿性氨基酸載體：轉運堿性氨基酸和

半胱氨酸；

④亞氨基酸和甘氨酸載體：轉運脯氨酸

和甘氨酸。腎小管細胞膜上與氨基酸吸收有關的載體：47第47頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二遺傳性氨基酸代謝紊亂及血、尿的檢測結果遺傳性氨基酸代謝紊亂名稱缺乏的酶血中升高的成分尿中升高的成分苯丙酮酸尿癥苯丙氨酸羥化酶苯丙氨酸、苯丙酮酸苯丙氨酸、苯丙酮酸Ⅰ型酪氨酸血癥延胡索酰乙酰乙酸水解酶？酪氨酸、甲硫氨酸酪氨酸、對-羥苯丙酮酸等尿黑酸尿癥尿黑酸氧化酶尿黑酸（輕度）尿黑酸同型胱氨酸尿癥胱硫醚--合酶同型胱氨酸、甲硫氨酸胱硫醚尿癥-胱硫醚酶胱硫醚胱硫醚及其代謝產物組氨酸血癥組氨酸酶組氨酸、丙氨酸咪唑、丙酮酸和組氨酸代謝產物甘氨酸血癥甘氨酸裂解酶系統(tǒng)受阻甘氨酸槭糖漿尿癥(支鏈酮酸尿癥)支鏈酮酸脫羧酶亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸和相應的酮酸丙酸尿癥丙酰CoA羧化酶甘氨酸甘氨酸、丙酸、羥化丙酸、甲基檸檬酸第48頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二遺傳性氨基酸代謝紊亂及血、尿的檢測結果遺傳性氨基酸代謝紊亂名稱缺乏的酶血中升高的成分尿中升高的成分甲基丙二酸尿癥甲基丙二酸單酰CoA變位酶甘氨酸、甲基丙二酸甘氨酸、甲基丙二酸、酮尿肌肽血癥肌肽酶肌肽Ⅰ型高脯氨酸血癥脯氨酸氧化酶脯氨酸脯氨酸、羥脯氨酸、甘氨酸瓜氨酸血癥精氨酸代琥珀酸合酶瓜氨酸、氨、丙氨酸瓜氨酸、谷氨酰胺精氨酸代琥珀酸尿癥精氨酸代琥珀酸裂解酶精氨酸代琥珀酸、瓜氨酸精氨酸代琥珀酸及其酐、瓜氨酸精氨酸血癥精氨酸酶精氨酸精氨酸、胱氨酸、鳥氨酸高鳥氨酸血癥鳥氨酸脫羧酸鳥氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸鳥氨酸、同型瓜氨酸鳥氨酸氨甲酰轉移酶缺乏癥鳥氨酸氨甲酰轉移酶氨、谷氨酰胺乳清酸、尿苷、尿嘧啶二羧基氨基酸尿癥（腎小管酸性氨基酸載體）谷氨酸、天冬氨酸49第49頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二三、主要氨基酸代謝紊亂的生物化學檢驗（一）苯丙酮酸尿癥(phenylketonuria，PKU)苯丙氨酸羥化酶先天性缺乏所致，屬常染色體隱性遺傳，因患兒尿液中排出大量苯丙酮酸等代謝產物而得名。

50第50頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二苯丙氨酸羥化酶（PAH）+H2O酪氨酸+O2四氫生物蝶呤二氫生物蝶呤NADPH+H+NADP+苯丙氨酸1．苯丙氨酸的代謝紊亂正常代謝51第51頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二苯丙氨酸先天性缺少PAH(多數)苯丙氨酸的代謝紊亂四氫生物蝶呤生成不足(少數)苯乙酸轉氨酶苯乙酰谷氨酰胺GlnH2O苯丙酮酸(血中積累，尿中排出)酪氨酸苯丙酮酸尿癥NAD+NADH+H+CO2苯乳酸NADH+H+NAD+52第52頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二有智力缺陷，其嚴重程度與血苯丙氨酸升高的水平和持續(xù)時間有關。毛發(fā)和皮膚色素較正常人略淺。身體有霉臭味，尿有鼠尿樣氣味，易流口水及出汗。有反復發(fā)作的驚厥、肌張力高，軀體前后搖擺，行動困難。2．苯丙酮酸尿癥臨床表現(xiàn)及治療臨床表現(xiàn)53第53頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二患兒在出生后3月內就需用低苯丙氨酸膳食（如低苯丙氨酸的奶粉）治療，可改善癥狀，防止癡呆發(fā)生。治療最少要堅持到10歲，甚至終生。在停止飲食治療前需作負荷試驗。若是，則可停止飲食治療。飲食治療中，給予低苯丙氨酸及高酪氨酸膳食最為合理。女性在幼時若治療恰當，可正常生長發(fā)育。妊娠時，則應使用治療本病的膳食，以免因再發(fā)高苯丙氨酸血癥而影響胎兒正常發(fā)育。2．苯丙酮酸尿癥臨床表現(xiàn)及治療治療54第54頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二3．新生兒中苯丙酮酸尿癥的診斷PKU的早期診斷十分必要。目前國際上新生兒PKU篩查的常用方法：Guthrie試驗、熒光光度法、苯丙氨酸脫氫酶法。新生兒的篩查在歐美國家廣泛地進行。評估應包括尿中生物蝶呤和新蝶呤的測定和有時可能還要測定其血清含量。新生兒PKU的診斷試驗：色譜法、熒光分光光度法、FeCl3法檢測尿中苯丙酮酸。用PCR-ASO探針法和PCR-RFLP連鎖分析法可鑒定出導致PKU的點突變。55第55頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二3．新生兒中苯丙酮酸尿癥的診斷Guthrie建立的一種細菌抑制法。在PKU的篩查試驗中用來測定人血清、尿液中苯丙氨酸。原理Guthrie試驗瓊脂糖培養(yǎng)基中的噻吩丙氨酸可抑制枯草桿菌的生長，而苯丙氨酸及其代謝產物苯丙酮酸等可抑制噻吩丙氨酸的此種作用。將浸有血液或尿液的濾紙片置于培養(yǎng)基表面上培養(yǎng)，通過抑菌圈的大小來半定量樣本中的苯丙氨酸濃度。56第56頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二（二）酪氨酸的代謝紊亂

1．酪氨酸的正常分解代謝和轉變（1）酪氨酸的正常分解代謝57第57頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二酪氨酸羥化酶CO2（2）轉變成兒茶酚胺與黑色素酪氨酸多巴多巴胺58第58頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二多巴胺去甲腎上腺素SAM腺苷同型半胱氨酸兒茶酚胺CH3腎上腺素59第59頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二

原因：酪氨酸分解途徑中的延胡索酰乙酰乙酸水解酶活性降低。該癥可出現(xiàn)：血和尿中酪氨酸水平增加；血中甲硫氨酸濃度升高；尿中排出大量多巴和其他酪氨酸代謝物。2．酪氨酸血癥

（1）Ⅰ型酪氨酸血癥（tyrosinemiaⅠ）

60第60頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二Ⅰ型酪氨酸血癥（肝腎型酪氨酸血癥）病人有嚴重的肝功能損害和腎小管功能不全。急性酪氨酸血癥患者肝延胡索酰乙酰乙酸水解酶只有正常活性的6%，臨床表現(xiàn)有腹瀉、嘔吐。如未治療，常在1歲前死于肝功能衰竭。慢性酪氨酸血癥病人的延胡索酰乙酰乙酸水解酶活性只有正常活性的20%，癥狀較輕，常在10歲前死亡。Ⅰ型酪氨酸血癥發(fā)病率約為1/10萬。用低酪氨酸、苯丙氨酸和甲硫氨酸膳食可減輕癥狀。61第61頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二

（2）Ⅱ型酪氨酸血癥（tyrosinemiaⅡ）原因：肝細胞液酪氨酸轉氨酶缺乏血中和尿中酪氨酸水平升高，尿中酚酸和酪胺濃度增加。

Ⅱ型病罕見。

與Ⅰ型不同的是：血中甲硫氨酸不升高。62第62頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二

（3）酪氨酸血癥的生物化學檢驗參考方法：離子交換層析其他方法：色譜法分光光度法酶學方法63第63頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二3.白化病（albinism）在皮膚黑色素細胞中酪氨酸酶催化下，酪氨酸羥化生成多巴，后者經氧化、脫羧等反應轉變?yōu)檫胚?5，6-醌，黑色素就是吲哚-醌的聚合物。如酪氨酸酶缺乏，酪氨酸不能轉變?yōu)楹谏兀瑢е掳谆?。白化病發(fā)病率約為1/13000，表現(xiàn)為白色頭發(fā)、淺色皮膚和灰藍色眼睛等。多數白化病同時累及皮膚和眼部、少數單獨累及眼部，但無單獨累及皮膚者?；颊咭M可能避免日光照射。

64第64頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二4．尿黑酸尿癥（alkaptonuria）一種罕見的因尿黑酸氧化酶缺陷引起的遺傳病性代謝性疾病。細胞和體液尿黑酸的積聚。特點是尿放置變黑色，一般不引起注意。常在中年被疑為褐黃病和關節(jié)炎時才被診斷。如新生兒未洗尿布變黑引起了注意或被觀察到，在新生兒時期即可診斷。目前對本癥沒有滿意的治療方法。如早期發(fā)現(xiàn)，限制酪氨酸或其前體苯丙氨酸飲食可能有所收效。服用維生素C可能會減少尿黑酸在體液中含量和在組織中沉積。診斷本病的方法:尿黑酸的還原試驗。65第65頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二（三）含硫氨基酸代謝紊亂甲硫氨酸(Met)半胱氨酸(Cys)同型半胱氨酸(HCY)66第66頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二半胱氨酸與胱氨酸的互變+2H2半胱氨酸–2H—S——S—胱氨酸67第67頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二蛋氨酸循環(huán)N5-CH3-FH4FH4N5-CH3-FH4轉甲基酶蛋氨酸ATPPPi+PiH2O腺苷同型半胱氨酸RHS-腺苷同型半胱氨酸R-CH31．含硫氨基酸的正常代謝SAM68第68頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二S-腺苷甲硫氨酸（SAM）中的甲基為活性甲基，可轉移至另一種物質，生成50多種含甲基的重要生理活性物質。HCY+絲氨酸胱硫醚-β-合酶胱硫醚裂解半胱氨酸+α-酮丁酸69第69頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二2．同型胱氨酸尿癥（homocystinuria）含硫氨基酸代謝紊亂最常見的是同型胱氨酸尿癥，它是一組體內以HCY增高為特征的代謝紊亂。（1）胱硫醚-β-合成酶缺失-----最常見的原因體液HCY及其前體積聚，Cys和胱氨酸下降。生化異常：血漿同型胱氨酸(HCY的氧化形式)達到可檢測水平，血漿Met升高。尿中含有同型胱氨酸和其他含硫氨基酸如Met、甲硫氨酸硫氧化物和Cys的二硫化物和HCY。血漿Met不升高.

（2）N5甲基四氫葉酸轉甲基酶缺失----較罕見原因70第70頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二（3）同型胱氨酸尿癥的診斷

新生兒篩選的Guthrie試驗只適用于胱硫醚-β-合酶缺失所致的同型胱氨酸尿癥。陽性結果解釋應慎重，因很有可能是暫時的，或由于肝損害，酪氨酸代謝病或肝S-腺苷甲硫氨酸合成酶的缺失所致。暫時性同型胱氨酸尿癥目前發(fā)生率已下降。如未進行新生兒篩選，同型胱氨酸尿癥需等到癥狀出現(xiàn)或尿液檢測才被發(fā)現(xiàn)。硝基氫氰酸試驗檢測同型胱氨酸和胱氨酸。銀硝普鹽改良試驗可區(qū)分同型胱氨酸和胱氨酸之間的差別。71第71頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二目前血漿HCY檢測可作為心腦血管病臨床常規(guī)檢查指標。血脂正常，膽固醇不高的人群有嚴重AS性疾病和家族史人群有早期(＜50歲)冠心病、腦血管或外周血管病癥狀的人群服用氨甲喋呤、氨茶堿、苯妥英等人群中，HCY升高的比例較高，有進一步引發(fā)血管疾病的可能，需要聯(lián)合考慮。HCY檢測適應癥72第72頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二（3）同型胱氨酸尿癥的診斷

輕度：16～30μmol/L中度：31～100μmol/L重度：＞100mol/LHPLC放射酶免疫分析法熒光偏振免疫分析(FPIA)HCY測定方法參考值：空腹血漿HCY5～15mol/L≥15mol/L為高HCY血癥。高HCY血癥分型73第73頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二四、繼發(fā)性氨基酸代謝紊亂的生物化學檢驗

主要發(fā)生在肝臟和腎臟疾患、蛋白質-能量營養(yǎng)紊亂以及燒傷等

。（一）肝功能衰竭和氨基酸代謝失衡

（二）腎臟疾病

74第74頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二五、氨基酸的生物化學檢驗篩選試驗：薄層層析，尿呈色試驗（三氯化鐵、硝基氫氰酸、2，4-二硝基苯肼、硝基萘酚試驗），Guthrie試驗半定量測定。定量試驗：毛細管電泳，氣相色譜，HPLC，離子交換液體層析，串聯(lián)質譜，分子遺傳學試驗等用于監(jiān)測治療或證實最初的診斷。特異性試驗：判明未知氨基酸或代謝產物。75第75頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二（一）自動分析法

氨基酸自動分析儀：色譜系統(tǒng)檢測系統(tǒng)加樣系統(tǒng)控制系統(tǒng)數據處理系統(tǒng)

76第76頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二（二）氨基酸的紙層析和薄層層析（TLC）不需特殊設備、經濟和操作簡單采集在濾紙上的標本可郵寄。1.紙層析的優(yōu)點靈敏度低分辨力差費時2.紙層析缺點速度快分辨力靈敏度高3.TLC優(yōu)點77第77頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二（二）氨基酸的紙層析和薄層層析（TLC）紙層析和TLC又分為單向和雙向兩種。單向層析一般適用于某個或某組氨基酸增高時的篩選檢測，如獲異常結果需進一步用雙向層析分離，或其他定量方法證實。雙向層析法能分離全部氨基酸，可作為確診的參考。78第78頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二（三）氨基酸的化學法測定

1．尿液總氨基酸量測定----磷酸銅試劑法2．色氨酸測定3．尿羥脯氨酸測定79第79頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二（四）氨基酸的酶法分析1．苯丙氨酸測定2．酪氨酸測定3．支鏈氨基酸測定4．谷氨酰胺測定

80第80頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二（四）氨基酸的酶法分析1．苯丙氨酸測定----有兩種酶學方法苯丙氨酸苯丙氨酸氧化酶H2O2+4-氨基安替比林+N，N’-二甲苯胺生成醌亞胺測定A550NADH+H+苯丙氨酸NAD+苯丙氨酸脫氫酶苯丙酮酸檢測A340的增加速率，反映苯丙氨酸含量檢測A340的下降速率，反映苯丙酮酸含量81第81頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二2．酪氨酸測定三氯醋酸濾液在硝酸存在條件下與硝基萘酚和亞硝酸鹽的混合物反應。通過測定其熒光對酪氨酸進行定量。該法不適應于尿液酪氨酸測定。常規(guī)方法氧電極測定氧的消耗來對酪氨酸進行定量。酪氨酸酶法酪氨酸+O2酪氨酸酶多巴醌82第82頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二3．支鏈氨基酸測定

LeuIleValNADH+H+NAD+亮氨酸脫氫酶相應酮酸檢測A340的增加速率，反映各氨基酸含量4.谷氨酰胺測定GlnNH3谷氨酰胺酶Glu檢測A340的增加速率，反映Gln含量NAD+谷氨酸脫氫酶NADH+H+α酮戊二酸83第83頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二第三節(jié)核苷酸代謝紊亂一、嘌呤核苷酸代謝紊亂的生物化學檢驗（一）嘌呤核苷酸的代謝（二）高尿酸血癥（三）痛風的發(fā)生機制（四）尿酸的生物化學檢驗二、嘧啶核苷酸代謝紊亂的生物化學檢驗84第84頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二（一）嘌呤核苷酸的代謝1.嘌呤核苷酸的從頭合成途徑（主要）用磷酸核糖、氨基酸、一碳單位及CO2等簡單物質為原料，經過一系列酶促反應合成嘌呤核苷酸的途徑。85第85頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二N1C2N3C4C5C6N97NC8

甲?；?一碳單位)甘氨酸CO2Asp甲酰基(一碳單位)Gln(酰胺基)甘氨當中站,谷氮坐兩邊,左上天冬氨,頭頂CO286第86頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二1.嘌呤核苷酸從頭合成途徑合成的原料:CO2,甲?；?氨基酸等合成的場所:肝臟的胞液合成的過程:兩個階段①次黃嘌呤核苷酸(IMP)的合成②腺苷酸(AMP)和鳥苷酸(GMP)的合成87第87頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二1.從頭合成途徑88第88頁，共100頁，2023年，2月20日，星期二1.嘌呤核苷酸從頭合成途徑ATPGTPR-5-PATPPRPP合成酶PRPP酰胺轉移酶PRAIMPAMPSAMPADPXMPGMPGDP嘌呤核苷酸是在磷酸核糖基礎上逐步合成嘌呤環(huán)的，而不是首先單獨合成嘌呤堿然后再與磷酸核糖結合的，這是與嘧啶核苷酸合成過程不同之處。重要特點