生化藥品質(zhì)量分析

生化藥品質(zhì)量分析第1頁/共30頁生化藥品特點2010版藥典收載生化藥品情況生化藥品質(zhì)控特點肝素鈉和胸腺肽評價性抽驗質(zhì)量分析第2頁/共30頁

一般系指從動、植物及微生物中提取、分離、純化、或用生物化學(xué)半合成或用現(xiàn)代技術(shù)制得的具有生物化學(xué)活性的一類用于臨床治療的藥物。氨基酸及其衍生物肽與蛋白酶與輔酶核苷酸及其衍生物多糖脂類組織提取的多組分生化藥物生化藥品的定義與分類第3頁/共30頁《中國藥典》2010版二部生化藥品

標(biāo)準(zhǔn)（品種)匯總類別2005版標(biāo)準(zhǔn)（品種）2010版標(biāo)準(zhǔn)（品種）增加標(biāo)準(zhǔn)（品種）增長%刪除氨基酸及其衍生物43（21）50（25）7（4）13.7%核苷酸及其衍生物43（9）51（10）7（1）13.7%酶與輔酶28（11）33（13）5（2）15.2%多肽、蛋白24（10）28（13）4（3）40.3%4多糖15（5）18（6）3（1）16.7%脂類2（1）4（2）2（1）40.0%1總數(shù)154（57）185（69）68（12）15.1%5第4頁/共30頁氨基酸及其衍生物-2010版藥典品種全，包含國內(nèi)外所有氨基酸類產(chǎn)品。臨床應(yīng)用方便，制劑系列化。固體制劑：片、膠囊、顆粒、散、口含片；溶液制劑：口服溶液、滴眼液、注射液、沖洗液等。增訂、修訂和統(tǒng)一內(nèi)容、與國外同類標(biāo)準(zhǔn)接軌。增訂：檢查項中統(tǒng)一用TLC檢查其它氨基酸項；有關(guān)物質(zhì)檢查：HPLC法。修訂：含量測定、非水滴定、比色法，及HPLC法。第5頁/共30頁核苷酸及其衍生物-2010版藥典

臨床上是主治病毒疾患，部分治療心血管及腦損傷、缺氧等疾病。如阿糖胞苷、利巴韋林、阿昔洛韋、更昔洛韋、泛昔洛韋。微生物發(fā)酵或半合成，化學(xué)結(jié)構(gòu)清楚、成分明白、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)完善。2010版核酸類藥物品種較齊，制劑較全，少的2-3種標(biāo)準(zhǔn)；多的7-8種，最高為12種之多。如利巴韋林產(chǎn)品有12種：固體制劑（5種）：原料、片、口含、膠囊、顆粒；液體制劑（7種）：滴眼液、滴鼻液、口服溶液、注射劑、氯化鈉注射劑、葡萄糖注射劑、注射用。增訂的項目：在檢查項中有：有關(guān)物質(zhì)，異常毒性、滲透壓、殘留溶媒。修訂的項目：含量均勻度、熱原修訂為細(xì)菌內(nèi)毒素、含測方法、TCL分離度、溶液澄清度和顏色用法、用量、注射途徑、注射速度。第6頁/共30頁酶與輔酶-2010版藥典酶和輔酶是我國生化藥物中發(fā)展比較快的一類，建國以來有長足的進(jìn)步。凡國外藥典有的本屆藥典都已載入。大部分是從生物體的某些組織中提取、純化和精制；少部分是從微生物經(jīng)發(fā)酵、破壁、再從發(fā)酵液中提取、純化和精制而得。酶是蛋白質(zhì)，具有生物活性，提取和純化過程中，既要保持活性，又要得率高，在質(zhì)量指標(biāo)的制定中始終密切注意其酶的總活性、比活力和純度的關(guān)系。而且每種酶均有自身的特點。增修訂內(nèi)容：檢查項有溶液的顏色、高分子物質(zhì)檢查、有關(guān)物質(zhì)安全性普遍增加異毒，細(xì)內(nèi)，微生物限度、無菌、過敏。第7頁/共30頁多肽、蛋白-2010版藥典

蛋白質(zhì)就是由許多氨基酸殘基組成的多肽鏈。一般以51個氨基酸殘基，分子量為5733的胰島素劃分，高于此分子量為蛋白，小于為肽。合成多肽：成份清楚、結(jié)構(gòu)明確，是近年來生化藥中崛起的新品種、新技術(shù)、高水平、高質(zhì)量的產(chǎn)品，如重組人胰島素和重組人生長激素。大部分與國際接軌，修訂的項目較全，如新增的生長抑素。從臟器提取的激素、肽，因工藝粗、純度差、雜質(zhì)多、質(zhì)量差、安全性沒法保障從藥典中刪去，盡管臨床仍很需要。如垂體后葉粉、注射液、縮宮素溶液、甲狀腺粉。

第8頁/共30頁多糖-2010版藥典品種來源類別劑型右旋糖酐20發(fā)酵血漿代用品原料右旋糖酐20葡萄糖注射液右酐20、葡萄糖血漿代用品注射劑右旋糖酐20氯化鈉注射液右酐20、氯化鈉血漿代用品注射劑右旋糖酐

40發(fā)酵血漿代用品粉劑右旋糖酐

40葡萄糖注射液右酐40、葡萄糖血漿代用品注射劑右旋糖酐

40氯化鈉注射液右酐40、氯化鈉血漿代用品注射劑右旋糖酐

70發(fā)酵血漿代用品原料右旋糖酐

70葡萄糖注射液右酐70、葡萄糖血漿代用品注射劑右旋糖酐

70氯化鈉注射液右酐70、氯化鈉血漿代用品注射劑右旋糖酐鐵絡(luò)合物抗貧血藥原料右旋糖酐鐵片右酐鐵抗貧血藥片劑右旋糖酐注射液右酐鐵抗貧血藥注射劑肝素鈉豬、牛腸粘膜抗凝血藥原料肝素鈉注射液肝素鈉抗凝血藥注射劑肝素鈉乳膏肝素鈉抗凝血藥軟膏硫酸軟骨素鈉豬喉骨、鼻中骨、氣管降血脂及鎮(zhèn)痛藥原料硫酸軟骨素鈉片硫酸軟骨素鈉降血脂及鎮(zhèn)痛藥片劑硫酸軟骨素鈉膠囊硫酸軟骨素鈉降血脂及鎮(zhèn)痛藥膠囊劑第9頁/共30頁脂類-2010版藥典

前列地爾，注射用前列地爾多烯酸乙酯軟膠囊采用新的質(zhì)控指標(biāo)使多烯酸乙酯的質(zhì)量與EP，JP一致。第10頁/共30頁存在問題：缺乏原材料的來源要求及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)缺乏提取物溶液的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)各企業(yè)的生產(chǎn)工藝差異較大缺乏病毒工藝驗證缺乏專屬性的鑒別項目缺乏有效性的檢測指標(biāo)（如活性測定）含量沒有上限組織提取的多組分生化藥物第11頁/共30頁組織提取的多組分生化藥物建議：1、由于多組分生化藥注射劑的組成、質(zhì)量與原材料和制備工藝密切相關(guān)，因此質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)難以進(jìn)行全面控制，建議將原材料、中間體及原液的質(zhì)量要求及工藝過程收入終產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以盡可能控制起始原料、制備工藝對終產(chǎn)品的組成和含量的影響，實現(xiàn)全過程控制。2、多組分肽注射劑的組分復(fù)雜，難以確定其有效成分，建議增加活性測定，通過活性測定指標(biāo)來反映產(chǎn)品的有效性。3、有多家企業(yè)生產(chǎn)、同時執(zhí)行相同的標(biāo)準(zhǔn)的品種，建議統(tǒng)一生產(chǎn)工藝。4、參照中藥的指紋圖譜，開展多組分生化藥品的反相特征圖譜研究，通過特征圖譜來鑒別產(chǎn)品真?zhèn)渭按_保產(chǎn)品的批與批之間的一致性。第12頁/共30頁生化藥品質(zhì)控特點原材料質(zhì)量控制培養(yǎng)或提取過程的質(zhì)量控制純化工藝過程的質(zhì)量控制制劑工藝過程的質(zhì)量控制終產(chǎn)品的質(zhì)量控制對生產(chǎn)全過程進(jìn)行質(zhì)量分析與控制第13頁/共30頁生化藥品中的生物測定和安全性檢查采用生物測定的約20品種約占總數(shù)的28%（酶與輔酶，多肽、蛋白、少數(shù)多糖）包括：在體生物測定、體外生物測定安全性檢查------覆蓋幾乎所有生化藥品有待改進(jìn)的品種：肝素納：效價測定仍沿用兔全血法和羊血漿法USP新版已改為理化測定分光光度法，測定抗FⅩa和抗FⅡa取代生物測定

本實驗室參加了WHO組織的針對這一替代方法的肝素鈉6thIS的國際協(xié)作標(biāo)定，為肝素納的理化測定替代生物測定積累經(jīng)驗硫酸魚精蛋白：

EP6.0已經(jīng)、USP即將采用滴定法以分光光度法測試終點，理化測定取代了生物測定第14頁/共30頁安全性檢查試驗（無菌、微生物限度、熱原、細(xì)菌內(nèi)毒素、異常毒性、降壓物質(zhì)、過敏等）考慮生化藥來源于人、動物組織，或通過發(fā)酵而得產(chǎn)品成分復(fù)雜、有關(guān)物質(zhì)成分有的不明確來源、工藝等任何環(huán)節(jié)的微小變化可能會引發(fā)不可預(yù)測的不良反應(yīng)少量生化藥注冊上市的歷史過程復(fù)雜，其安全性和有效性尚不確切我國GMP實施的現(xiàn)狀近年來藥害事件的教訓(xùn)2010版對生化藥終產(chǎn)品嚴(yán)格質(zhì)量控制、采取更嚴(yán)厲措施

除2005版原有指標(biāo)外，原標(biāo)準(zhǔn)沒有的大部分都增修訂生物安全檢查項第15頁/共30頁安全性檢查試驗

-------制法要求、特殊安全性檢查編號品種乙肝表面抗原制法要求1肝素鈉本品應(yīng)從檢疫合格的豬或牛腸粘膜中提取，生產(chǎn)過程均應(yīng)符合現(xiàn)行版《GMP》要求。生產(chǎn)工藝要經(jīng)病毒滅活驗證，并能去除有害的污染物，生產(chǎn)過程中應(yīng)確保不被外來物質(zhì)污染。2胰島素本品應(yīng)從檢疫合格豬的冰凍胰臟中提取，生產(chǎn)過程均應(yīng)符合現(xiàn)行版《GMP》要求。3糜蛋白酶應(yīng)從檢疫合格的牛或豬胰提取，生產(chǎn)過程均應(yīng)符合現(xiàn)行版《GMP》要求。4尿促性素+本品應(yīng)從健康人群的尿中提取，生產(chǎn)過程應(yīng)符合現(xiàn)行版《GMP》要求，本品在生產(chǎn)過程中需經(jīng)適宜的工藝方法處理，以使任何病毒如肝炎病毒和人免疫缺陷病毒等滅活。5絨促性素+如上6尿激酶+本品應(yīng)從健康人群的尿中提取，生產(chǎn)過程應(yīng)符合現(xiàn)行版《GMP》要求，本品在生產(chǎn)過程中需經(jīng)60℃加熱10h，以使病毒滅活。7烏司他丁+如上第16頁/共30頁肝素鈉注射液；胸腺肽注射液和注射用胸腺肽評價性抽驗質(zhì)量分析介紹第17頁/共30頁肝素鈉注射液背景：肝素是高度硫酸化的糖胺聚糖，為抗凝血藥，主要從豬的腸粘膜中提取得到。自上世紀(jì)三十年代應(yīng)用于臨床，已經(jīng)使用了七十多年；我國是肝素生產(chǎn)大國，為肝素原料的主要出口國。肝素產(chǎn)品是一大類產(chǎn)品，包括肝素鈉（鈣）、低分子肝素鈉（鈣）、類肝素等等。一直以來，我國的肝素產(chǎn)品存在著原料出口而制劑進(jìn)口的問題；2008年年初，美國百特公司生產(chǎn)的肝素鈉注射液在美國發(fā)生了嚴(yán)重的不良反應(yīng)；對我國的肝素鈉注射液進(jìn)行評價性抽驗，可以更好的了解我國肝素鈉注射液的生產(chǎn)情況和質(zhì)量情況，對新的檢驗檢測技術(shù)進(jìn)行研究，可以提高我國肝素的檢驗檢測水平，與國際接軌。這對推動我國肝素產(chǎn)業(yè)的發(fā)展有深遠(yuǎn)的意義。第18頁/共30頁法定檢驗小結(jié)：按法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗，發(fā)現(xiàn)樣品在可見異物、pH值、裝量等方面的一些問題，在一定程度上反映產(chǎn)品質(zhì)量。但目前的法定標(biāo)準(zhǔn)缺乏專屬性鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查方法及對輔料的檢查方法等，所以還不能全面反映和控制產(chǎn)品質(zhì)量。肝素鈉注射液第19頁/共30頁探索性研究：1、離子色譜法檢查有關(guān)雜質(zhì)2、毛細(xì)管電泳法檢查有關(guān)雜質(zhì)3、體積排阻色譜法檢查樣品純度4、反相色譜法檢查防腐劑苯酚含量5、旋光度測定檢查樣品純度6、微量生色底物法測定抗FXa和抗FIIa活性7、滲透壓測定考察處方及工藝穩(wěn)定性肝素鈉注射液第20頁/共30頁通過質(zhì)量分析發(fā)現(xiàn)的主要問題：質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方面（1）法定檢驗標(biāo)準(zhǔn)缺乏專屬的鑒別反應(yīng),有關(guān)物質(zhì)檢查,對輔料的檢查。（2）抗凝效價不能完全反映樣品中含有雜質(zhì)的情況，建議使用抗FXa因子和抗FⅡa因子效價。（3）建議修訂藥典pH值限度，從“5.5～8.5”修訂為“5.5～8.0”。（4）建議修訂裝量檢查限度，從“不少于標(biāo)示量”修訂為“2.0ml～2.2ml”肝素鈉注射液第21頁/共30頁肝素鈉注射液原材料

部分批次樣品中含有較高含量的多硫酸軟骨素和硫酸皮膚素。生產(chǎn)工藝（1）對可見異物的控制不夠，出廠檢驗時可見異物存在漏檢現(xiàn)象。（2）樣品批間差異較大，質(zhì)量穩(wěn)定性不夠。（3）同一個企業(yè)產(chǎn)品有的批次含苯酚，有的不含苯酚，生產(chǎn)工藝有一定的隨意性。處方

生產(chǎn)企業(yè)的處方不統(tǒng)一，處方合理性還有待探討。包裝有的企業(yè)安瓿包裝紙盒不夠牢固，安瓿破損率較高。第22頁/共30頁建議：1.肝素鈉注射液標(biāo)準(zhǔn)修訂增加雜質(zhì)檢查方法增加防腐劑檢查增加滲透壓檢查修訂pH值檢查限度修訂裝量檢查限度修訂效價測定方法為底物法2.規(guī)范肝素鈉注射液的生產(chǎn)工藝和處方3.注重對肝素原料的質(zhì)量控制（粗品、精品)4.繼續(xù)肝素的質(zhì)量研究工作雜質(zhì)分析、結(jié)構(gòu)分析（核磁、離子色譜法單糖組成、游離和結(jié)合硫酸根含量等）、分子量與分子量分布測定等工作肝素鈉注射液第23頁/共30頁胸腺肽背景：胸腺肽是從健康豬或牛胸腺中提取的分子量小于10000道爾頓的的混合多肽類藥物；具有調(diào)節(jié)人體細(xì)胞免疫功能的作用，能促進(jìn)T－淋巴細(xì)胞成熟。用于各種原發(fā)性或繼發(fā)性T細(xì)胞缺陷、各種細(xì)胞免疫功能低下的疾病和腫瘤的輔助治療；臨床上常用的制劑有：胸腺肽注射液、注射用胸腺肽，臨床上使用：皮下或肌肉注射、靜脈滴注；目前在臨床用藥的過程中胸腺肽注射劑還存在過敏等不良反應(yīng)，該品種的質(zhì)量及其標(biāo)準(zhǔn)還有待于進(jìn)一步提高和完善；對胸腺肽注射劑進(jìn)行評價性抽驗，可以更好地了解我國胸腺肽注射劑的生產(chǎn)和質(zhì)量情況，發(fā)現(xiàn)存在的問題，進(jìn)一步提高藥品質(zhì)量和進(jìn)一步完善質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。第24頁/共30頁胸腺肽

胸腺肽是從健康豬或小牛胸腺組織提取的分子量小于10000道爾頓的混合多肽，其中的多肽數(shù)量多達(dá)數(shù)十種，主要包括：胸腺肽α家族：α1～α10、其中胸腺肽α1為一個含有28氨基酸殘基的多肽。胸腺肽β家族：β1～β10

其他胸腺激素：胸腺體液因子（THF）、血清胸腺因子（FTS）、胸腺生成素等其中胸腺生成素為一個含有49個氨基殘基的多肽，胸腺五肽是胸腺生成素肽段的一部分，即位于胸腺生成素活性部位的第32～36位氨基酸序列。胸腺肽具有調(diào)節(jié)和增強(qiáng)人體細(xì)胞免疫功能的作用，其體內(nèi)生物學(xué)活性是胸腺產(chǎn)生的眾多肽類激素的綜合作用結(jié)果。胸腺肽注射劑在我國臨床應(yīng)用已有20多年的歷史，2000年以前該品種執(zhí)行的標(biāo)準(zhǔn)為地方標(biāo)準(zhǔn)，由于各種制劑的生產(chǎn)工藝，標(biāo)準(zhǔn)不同，產(chǎn)品質(zhì)量及臨床療效也有較大的差