新方法新技術(shù)課件

第十六章

藥物分析中的新技術(shù)、新方法手性分離色譜一、手性藥物的現(xiàn)狀手性藥物（579）藥物（1992）天然和半合成藥物（556）合成藥物（1436）非手性藥物（857）單一異構(gòu)體（73）外消旋體（506）手性藥物（547）非手性藥物（9）單一異構(gòu)體（537）外消旋體（10）二、手性藥物對映體的藥動學(xué)差異1.吸收2.蛋白結(jié)合3.代謝1.間接法拆分對映異構(gòu)體即衍生化試劑法（CDR）2.直接法拆分對映異構(gòu)體手性固定相法（CSP）手性流動相添加劑法（CMP）三、手性藥物拆分的高效液相色譜法分類采用非手性固定相四、拆分原理：1.CDR(R)–SE+(R)–SA→(R)–SE–(R)–SA(S)–SA→(R)–SE–(S)–SA柱前衍生化-反相高效液相色譜法拆分酮洛芬對映異構(gòu)體S-()-酮洛芬R-(-)-酮洛芬酮洛芬對映體的柱前衍生化示意圖＊＊色譜條件色譜柱：HypersilC18,5m,1505.0mmID，

流動相：乙腈水-乙酸-三乙胺(55:45:0.1:0.02，v/v)，流速：

1ml/min,檢測波長：254nm酮洛芬對映體衍生化物色譜圖RS酮洛芬對映體衍生化物的保留時間為tR=7.3min，tR=8.5min，分離度為1.92.CSP利用手性固定相與對映體消旋物相互作用，其中一個與手性固定相生成不穩(wěn)定的短暫的對映體復(fù)合物，使兩種異構(gòu)體在色譜柱上的保留時間不同，從而得到分離。特點適用范圍廣制備分離方便定量分析的可靠性高價格昂貴奈基乙脲鍵合硅膠柱拆分蘇氨酸（A）和苯丙氨酸（B）的p-溴代苯甲酰胺衍生物對映體色譜圖3.CMP將手性試劑添加到流動相中，利用手性試劑與藥物消旋物中各對映體結(jié)合的穩(wěn)定常數(shù)不同，以及藥物與結(jié)合物在固定相上分配的差異，實現(xiàn)對映體的分離。特點可采用普通的非手性固定相不需對樣品進行衍生化手性添加物的可變范圍較寬高效毛細管電泳（HPCE）HPCE是經(jīng)典電泳技術(shù)與現(xiàn)代微柱分離相結(jié)合的一種快速、高效的液相分離技術(shù)。具有以下特點：1.高效2.高速3.微量4.低消耗（一）基本原理：

v=veo+vep=(μeo+μep)E

veo：電滲流速度μeo：電滲流淌度

vep：電泳流速度μep：電泳流淌度E：電場強度－－－－－－－－－－－－－－－－－－++++++++++++++++++++++++++(－)(+)電滲的產(chǎn)生模式緩沖液體系分離機理CZE自由緩沖液離子淌度MECC膠束－緩沖溶液疏水性/離子性相互作用CGE凝膠－緩沖溶液分子大小和荷電數(shù)目CIEF兩性電解質(zhì)等電點1.毛細管區(qū)帶電泳最基本、最廣泛的分離模式。適用于所有具有不同淌度的荷電粒子的分離，但不能中性物質(zhì)及質(zhì)荷比相同的組分。

2.膠束動電毛細管色譜用離子膠束溶液代替簡單的緩沖溶液，使中性組分可按其疏水性的不同及在兩相間的分配系數(shù)的不同而分離。采用手性分配相，可用于手性化合物的分離。3.毛細管凝膠電泳凝膠的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)對溶質(zhì)具有分子篩的作用，可分離質(zhì)荷比相同但分子大小不同的組分。在分子生物學(xué)和蛋白質(zhì)化學(xué)上有著十分廣泛的應(yīng)用。4.毛細管等電聚焦根據(jù)蛋白質(zhì)的等電點不同而進行分離。AAAAAABBBBBBCCCCDDDDDEEEEEFFAAAABBBBCCCCDDDDEEEEFFFFpH梯度高低應(yīng)用：1.監(jiān)測藥物生產(chǎn)過程如：監(jiān)測青霉素發(fā)酵液中有關(guān)物質(zhì)的量青霉素發(fā)酵液的高效毛細管電泳圖1.青霉素G鈉；2.6-APA；3.對羥基苯乙酸；4.鄰羥基苯乙酸；5.苯乙酸2.中藥成分分析如：黃酮及其甙類分析黃芩中6種黃酮類成分的膠束電動毛細管色譜分離圖1.漢黃芩甙；2.黃芩素；3.黃芩甙；4.千層子素；5.漢黃芩素；6.內(nèi)標(biāo)水楊酸；7.白楊素3.手性拆分4.體內(nèi)分析質(zhì)譜法及其應(yīng)用進樣系統(tǒng)離子源質(zhì)量分析器檢測器控制和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)真空系統(tǒng)一、離子源及離子化技術(shù)

1、EI（電子轟擊離子化）V加速電壓試樣蒸汽陰極陽極電子束離子xyz電子轟擊質(zhì)譜示意圖優(yōu)點：靈敏度高，有豐富的碎片離子信息和成熟的離子開裂理論，是結(jié)構(gòu)分析、鑒定的有力手段；重現(xiàn)性好，有標(biāo)準(zhǔn)圖譜，可以通過譜庫檢索對未知物進行結(jié)構(gòu)鑒定。缺點：樣品須汽化后才可離子化適用化合物：易揮發(fā)、熱穩(wěn)定化合物。2、CI（化學(xué)離子化）軟電離技術(shù)優(yōu)點：可以得到較強的準(zhǔn)分子離子峰，有利于分子量的測定缺點：樣品須汽化后才可離子化適用化合物：易揮發(fā)、熱穩(wěn)定化合物3、FAB（快原子轟擊離子化）軟電離技術(shù)優(yōu)點：樣品不須汽化；既給出化合物的分子量信息，又給出結(jié)構(gòu)信息。適用范圍廣，儀器商品化較早，普及率高。缺點：重現(xiàn)性差，靈敏度較EI低。

適用化合物：極性、高分子量、非揮發(fā)性及熱不穩(wěn)定化合物。+++++快原子槍樣品靶原子束質(zhì)量分析器二次離子束快原子轟擊質(zhì)譜示意圖4、MALDI（基質(zhì)輔助激光解吸離子化）軟電離技術(shù)優(yōu)點：通常只給出分子離子峰（或準(zhǔn)分子離子峰）。

適用化合物：蛋白質(zhì)、多肽、寡核苷酸等生物大分子5、API（大氣壓離子化）軟電離技術(shù)（1）ESI（電噴霧離子化）

特點：能夠產(chǎn)生多電荷離子。

適用化合物：對生物大分子及其他分子量大的化合物的分析較有利。+++++－－－－－－+++++－－－－－－+++－－－－＋－－＋毛細管+4kV含離子的液滴隨液滴蒸發(fā)，電場加強，離子向表面移動離子從表面蒸發(fā)離子蒸發(fā)機理（2）APCI（大氣壓化學(xué)離子化）最軟的電離方式之一特點：一般只給出化合物的分子量信息，通過源內(nèi)CID（碰撞誘導(dǎo)分解）可同時獲得結(jié)構(gòu)信息。

適用化合物：