維生素B12含量的測定(實訓(xùn)案例)

維生素B12含量的測定（實訓(xùn)案例）以維生素B12注射液中B12含量的測定為例介紹紫外分光光度法測定維生素B12含量的方法。.紫外分光光度法的測定原理維生素B12在紫外區(qū)278nm、361nm與550nm波長處有最大吸收。在361nm波長處的吸收峰干擾因素少，通常以361nm作為測定波長，測定待測溶液的吸光度，用吸光度計算含量。儀器與試劑752N型紫外一可見分光光度計，10mL容量瓶，5mL吸量管；0.1g/L維生素B水溶液，維生素B注射液（市售品）。.維生素B12注射液含量測定步驟準確吸取0.50mL維生素B12注射液于10mL容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度線，搖勻，得到樣品稀釋液。然后將樣品稀釋液置于1cm石英比色皿中，以蒸餾水作為空白，在361nm波長條件下測定吸光度，按C63H88coN14014P的吸收系數(shù)為207計算維生素B12標示量的百分含量。.結(jié)果記錄與計算數(shù)據(jù)記錄將所測數(shù)據(jù)填入下表。6-2數(shù)據(jù)記錄表測定次數(shù)測定內(nèi)容123樣品質(zhì)量（%2注射液的標示量），mg/mL待測溶液的吸光度，A比色皿的矯正值（吸光度），A0供試樣品的稀釋倍數(shù)，DVB12注射液中維生素B12的含量，mg/mLV維生素B12的平均含量，mg/mL.結(jié)果計算樣品中的維生素B12注射液含量按下式計算。計算公式：式中VB12--樣品中維生素B12的含量，mg/mLA 待測溶液的吸光度；A 比色皿的矯正值（吸光度）；0D 供試樣品的稀釋倍數(shù)；W——樣品質(zhì)量（%2注射液的標示量），mg/mL---吸收系數(shù)為207五、注意事項測定過程需避光操作。在每次測定前，首先應(yīng)做吸收池配套性試驗。即將同樣厚度的4個比色皿都裝相同溶液，在所選波長處測定各比色皿的透光率，其最大誤差A(yù)T應(yīng)不大于0.5%。維生素B12在pH小于3或大于8的強酸或堿性溶液中極易分解，在pH值4.5?5.0弱酸條件下相對穩(wěn)定，測定時可用乙酸-乙酸鈉緩沖溶液調(diào)節(jié)。為使比色皿中測定溶液與原溶液的濃度一致，需用原溶液蕩洗比色皿2~3次。比色皿內(nèi)所盛溶液以超過皿高的2/3為宜。過滿溶液可能溢出，使儀器受損。使用后應(yīng)立即取出比色皿，并用自來水及蒸餾水洗凈，倒立晾干。比色皿一般用水蕩洗，如被有機物污染，宜用HCl—乙醇（1+2）浸泡片刻，再用水沖洗，不能用堿液或強氧化性洗液清洗。切忌用毛刷刷洗，以免損傷比色皿。大＜350nm時使用氫燈，九＞350nm時使用鎢燈。儀器在不測定時，應(yīng)隨時打開暗箱蓋，以保護光電管。六、思考題.維生素B12測定時為什么要特別注意在避光的條件下進行？.分組討論維生素B12的性質(zhì)與其鑒別和含量測定的關(guān)系。知識鏈接維生素B12（vitaminB12）,又稱鉆胺素，是含鉆的維生素，輔酶形式是鉆胺酰胺。維生素B為淺紅色的針狀結(jié)晶，無臭，無味；吸濕性強；易溶于水和乙12醇，在pH值4.5?5.0弱酸條件下最穩(wěn)定，強酸（pH<2）或堿性溶液中易分解，遇熱可有一定程度破壞，但短時間的高溫消毒損失小，遇強光或紫外線易被破壞。普通烹調(diào)過程損失量約30%；自然界中的維生素B12都是微生物合成的，高等動植物不能制造維生素B12。維生素B12是需要一種腸道分泌物（內(nèi)源因子）幫助才能被吸收的惟一的一種維生素。胃腸道對其吸收不良將引起惡性貧血。維生素B12在腸道內(nèi)停留時間長，大約需要三小時（大多數(shù)水溶性維生素只需要幾秒鐘）才能被吸收。有的人由于腸胃異常，缺乏這種內(nèi)源因子，即使膳食中來源充足也會患惡性貧血。維生素B12廣泛存在于動物食品中，而且其形態(tài)無法被人體吸收；植物中的大豆以及一些草藥也含有B，腸道細菌可以合成，故一般情況下不缺12乏。維生素B12的主要生理功能是參與制造骨髓紅細胞，防止惡性貧血；防止大腦神經(jīng)受到破壞。止匕外，維生素B12也是唯一含必須礦物質(zhì)的維生素，因含鉆而呈紅色，又稱紅色維