動物生理學(xué)實驗報告 實驗 3-2023修改整理

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（Ⅰ）家兔動脈血壓的神經(jīng)、體液調(diào)整

（Ⅱ）家兔離體腸段平滑肌的生理特征

顧昕2022302060生物技術(shù)日期04/06/03

目的要求

1.學(xué)習(xí)直接測定家兔動脈血壓的急性試驗辦法；

2.觀看神經(jīng)、體液因素對心血管活動的影響。

3.學(xué)習(xí)離體腸段平滑肌的試驗辦法；

4.了解腸段平滑肌的生理特征。

基本原理

在正常生理狀況下，人和高等動物的動脈血壓是相對穩(wěn)定的。這種相對穩(wěn)定性是通過神經(jīng)和體液因素的調(diào)整而實現(xiàn)的，其中以頸動脈竇-主動脈弓壓力感觸性反射尤為重要。此反射既可使生高的血壓下降，又可使降低的血壓上升，故有血壓緩沖反射之稱謂。家兔的主動脈神經(jīng)在解剖上獨成一支，易于分別及觀看其作用。

本試驗是應(yīng)用液導(dǎo)系統(tǒng)直接測定動脈血壓。即由動脈插管與壓力傳感器連通，其內(nèi)彌漫抗凝液體，構(gòu)成液導(dǎo)系統(tǒng)，將動脈插管插入動脈內(nèi)，動脈內(nèi)的壓力及其變化，可通過封閉的液導(dǎo)系統(tǒng)傳遞到壓力傳感器，并由計算機采集系統(tǒng)記錄下來。

哺乳動物消化管平滑肌具有肌組織共有的特性，如高興性、傳導(dǎo)性和收縮性等。但消化管平滑肌又有其特點，即高興性較低，收縮緩慢，富有舒展性，具有緊急性、自動節(jié)律性，對化學(xué)、溫度和機械牽張刺激較敏感等。這些特性可維持消化管內(nèi)一定的壓力，保持胃腸等一定的形態(tài)和位置，適合于消化管內(nèi)容物的理化變化，在體內(nèi)受中樞神經(jīng)系統(tǒng)和體液因素的調(diào)整。將離體組織器官置于模擬體內(nèi)環(huán)境的溶液中，可在一定時光內(nèi)保持其功能。本試驗以臺氏液作灌輸液，在體

外觀看及記錄哺乳動物離體腸段的普通生理特性。

動物與器材

家兔、兔手術(shù)臺、麥?zhǔn)显〔?、常用手術(shù)器械、止血鉗（4~6把）、眼科剪、支架、燒瓶夾、酒精燈（電爐）或恒溫平滑肌槽、燒杯（500mL3個，100mL1個）、雙凹夾、氣管插管、動脈插管、三通管、動脈夾、計算機采集系統(tǒng)、壓力傳感器、張力傳感器、二聯(lián)球、溫度計（2支）、臺氏液、庇護電極、照明燈、紗布、棉球、絲線、注射器（1ml、5ml、20ml）、生理鹽水、4%檸檬酸鈉、20%~25%氨基甲酸乙酯、肝素（200U/ml）、腎上腺素（1：5000）、乙酰膽堿（1：10000）、阿托品針劑（1支）等。

辦法與步驟

一．家兔動脈血壓的神經(jīng)、體液調(diào)整

1.試驗儀器的預(yù)備

打開計算機采集系統(tǒng)，接通張力傳感器。從顯示器的“試驗項目”

中找出“循環(huán)試驗”的“家兔血壓的調(diào)整”條，使顯示器顯示壓力讀數(shù)。

2.連通液導(dǎo)系統(tǒng)并制壓

將壓力傳感器的下方支管，通過輸液管銜接三通管，再銜接動脈插管。上側(cè)管供制壓時排解管內(nèi)空氣使用。先用裝有20mL4%檸檬酸鈉的

注射器，通過三通管向銜接動脈插管的輸液管內(nèi)推注，使之彌漫液體（不

要使動脈插管高過壓力傳感器的上方支管）后，再用止血鉗夾住動脈插

管端的輸液管。然后繼續(xù)向三通管內(nèi)推注，直至彌漫壓力傳感器的上方

支管，并用塞子塞?。ㄗ⒅兀阂簩?dǎo)系統(tǒng)內(nèi)不行有氣泡）。繼續(xù)向三通管內(nèi)

推注，同時觀看顯示器上壓力變化。當(dāng)加壓到120mmHg時即可關(guān)閉三通

管。觀看壓力是否發(fā)生變化，假如壓力下降，則需要檢查液導(dǎo)系統(tǒng)的漏

液緣由，并重新制壓。調(diào)整血壓顯示器的敏捷度，使30~130mmHg的變

化都能在顯示器上顯然地反映出來。將動脈插管端的導(dǎo)管內(nèi)彌漫肝素溶

液。

3.動物的預(yù)備

（1）麻醉動物取家兔一只，稱重并剪去耳緣靜脈上的被毛。用20ml注射器由耳緣靜脈緩慢推注20%（或25%）氨基甲酸乙酯（1g/kg

體重）舉行麻醉。注射時注重：先從耳緣靜脈盡可能遠(yuǎn)心端注射

（第一次注射不勝利時，可稍向近心一些注射），注射時速度要慢，并隨時觀看動物狀況。當(dāng)動物四肢柔軟、呼吸變深變慢、角膜反

射遲鈍時，表明動物已被麻醉，即可停止注射。

（2）固定與剪毛將動物背位固定與手術(shù)臺上，用剪毛剪將頸部手術(shù)野的被毛剪去，即可舉行手術(shù)。

（3）切開皮膚術(shù)者一手的拇指和食指按住家兔頸部兩側(cè)，另一手持手術(shù)刀，在緊靠喉頭下緣，沿頸部正中線作一長約5~7cm的皮膚

切口。然后用止血鉗或手術(shù)剪分別皮下結(jié)締組織后，夾住少許皮

膚并向兩側(cè)分開創(chuàng)口。

（4）分層分別肌肉術(shù)者與助手分離持止血鉗輕輕提起少許氣管正上方的肌肉（距離要盡可能近），然后用手術(shù)剪在兩止血鉗夾住的肌

肉之間，縱向（沿肌肉纖維走向）將肌肉層剪開一個小口（亦可

用止血鉗創(chuàng)開口）。用剪刀或止血鉗將創(chuàng)口縱向擴大，再用止血鉗

夾住少許肌肉，向兩側(cè)分開肌層。繼續(xù)用兩把止血鉗夾住下層氣

管上方的少許肌肉，輕輕提起，同法剪開并擴大肌肉創(chuàng)口。如此

層層分別肌肉，直至看見肌肉層下方的氣管（假如創(chuàng)口不夠大，

亦可用兩手食指深化創(chuàng)口再向前后方撕裂肌膜，使創(chuàng)口擴大）。用

止血鉗向氣管兩側(cè)拉開最后一層肌肉，裸露出氣管。手術(shù)時，注

意切口不行偏離氣管上方，不行橫向剪斷肌肉，以免造成血管斷

裂而出血。切口也不要過于擴大，以免造成氣胸。假如發(fā)覺肌肉

或血管有少量出血，可用浸過溫?zé)嵘睇}水的紗布（不行過濕）

輕輕按壓止血；假如出血不止，應(yīng)立刻用止血鉗夾住出血部位，

然后用棉線結(jié)扎止血。

（5）氣管插管普通用麻醉動物試驗時，需行氣管插管術(shù)，以免分泌物阻塞氣管致死。氣管插管的辦法是：先用止血鉗在甲狀腺后方

的氣管背面穿過一條粗棉線（切勿損傷甲狀腺及其血管，否則會

出血不止），并打一活結(jié)備用，然后在氣管上方作一倒“T”型切

口，將與氣管口徑相近的氣管插管，沿向心方向插入氣管（不行

插入過深，以免傷及氣管）并扎緊備用線，將余線固定于氣管插

管的分岔處，以防氣管插管松脫。本試驗不需使用氣管插管。

（6）分別迷走神經(jīng)家兔頸部的神經(jīng)、頸總動脈被結(jié)締組織膜包在一起，形成血管神經(jīng)束，位于氣管兩側(cè)，其腹面被胸骨舌骨肌和胸

骨甲狀肌所籠罩。術(shù)者用拇指和食指輕輕捏住分別的肌肉和皮膚，使食指向上頂而拇指向外翻，即可將血管神經(jīng)束翻于食指之上。

用彎頭玻璃分針輕輕劃開局部結(jié)締組織束膜，認(rèn)真辨認(rèn)3種神經(jīng)

與頸總動脈：頸總動脈呈紅色，有波動，壁有較強的彈性：迷走

神經(jīng)最粗，有較好的韌性，色雪白，普通位于外側(cè)；交感神經(jīng)較

細(xì)，略呈灰色，普通位于內(nèi)側(cè)；主動脈神經(jīng)最細(xì)，普通位于兩神

經(jīng)之間。因為神經(jīng)纖細(xì)，離開神經(jīng)、動脈束的包膜后則難以辨別，所以應(yīng)在原自然位置首先找到，并用玻璃分針沿縱向輕輕劃動，

分別出2cm左右（因為神經(jīng)韌性較差，易于拉斷，分別時需非常

當(dāng)心）。用玻璃分針輕輕挑起分別后的神經(jīng)，再用彎頭眼科鑷由神

經(jīng)下方穿過，將一浸過生理鹽水的彩色絲線放于鑷子內(nèi)，輕輕收

回夾住絲線的眼科鑷，穿好線并打一活結(jié)備用。假如不能辨認(rèn)出

3條神經(jīng)，則可先在頸總動脈下方穿過一條粗棉線（辦法同上，

但只分別很小一段動脈，需保留起前后的結(jié)締組織束膜）。當(dāng)輕輕

提起動脈時即可看清3條神經(jīng)，同法分別主動脈神經(jīng)、迷走神經(jīng)

并穿線備用。再將止血鉗從頸總動脈下方穿過，輕輕張開止血鉗，分別出2~3cm長的頸總動脈。分別出的頸總動脈外壁應(yīng)當(dāng)非常光

潔，外面并無結(jié)締組織及脂肪等物。在動脈上穿兩條備用棉線，

分離打上活結(jié)。將兩線分離拉至分別出的動脈兩端備用。同樣方

法分別另一側(cè)血管與神經(jīng)（一側(cè)動脈用于插管測壓，另側(cè)動脈實

驗用）。因為家兔的品種不同，個體之間也有差異，常發(fā)覺三條神

經(jīng)的解剖位置有些變異。迷走神經(jīng)的最后確認(rèn)，需以對血壓的影

響為準(zhǔn)。

（7）動脈插管首先用5ml注射器從耳緣靜脈注入肝素（200U/kg體重）以防凝血。然后在一側(cè)動脈行動脈插管術(shù)以記錄血壓。其方

法如下：將動脈頭端的備用線盡可能靠頭端結(jié)扎（務(wù)必扎緊，以

防滲血），然后在另一備用線的向心側(cè)（盡可能近心端），用動脈

夾夾閉。輕輕提起動脈頭端的結(jié)扎線，用鋒利的眼科剪在逼近扎

線的稍后方，沿向心方向斜向剪開動脈上壁（注重：不行只剪開

血管外膜，也切勿剪斷囫圇動脈，剪口大小約為管徑的一半）。一

手持彎頭眼科鑷，將其一個彎頭從剪口處插進動脈少許，輕輕挑

起剪開的動脈上壁，另一手將預(yù)備好的動脈插管由開口處插入動

脈管內(nèi)。假如插入較淺，可用一手輕輕捏住進入插管的動脈管壁，

另一手拿住動脈插管，順勢輕輕推動至6~8mm左右（假如手感滯

澀，說明插管并未進入動脈，必需退出插管，重新剪口再插），用

備用線將動脈連同進入的插管扎緊（插管不行因扎線松動而滑出，

亦不行漏液），并將余線系在插管的固定側(cè)支上，以免滑脫。注重：

插管應(yīng)與動脈血管的方向全都，以防插管尖端扎破動脈管壁。輕

輕取下向心端動脈夾，可見動脈血與插管內(nèi)液體混合。再取下通

向壓力傳感器的止血鉗，此時顯示器上浮現(xiàn)血壓的波動曲線。的

最

4.試驗結(jié)果與分析

（1）觀看正常血壓曲線調(diào)整掃描速度與增益，可以顯然觀看到心室射血與主動脈回縮形成的壓力變化與收縮壓、舒張壓的讀數(shù)。有

時可以觀看到血壓曲線隨呼吸變化，心搏為一級波，呼吸波為二

級波。然后將掃描速度調(diào)慢，觀看正常血壓曲線。

（2）刺激迷走神經(jīng)使刺激輸出端銜接庇護電極，輕輕提起迷走神經(jīng)

上的備用線，當(dāng)心地將神經(jīng)置于庇護電極之上。記錄對比血壓曲

線后，再用中等強度的延續(xù)電脈沖信號，通過庇護電極，刺激神

經(jīng)10~20s。血壓浮現(xiàn)顯然下降后即可停止刺激，等待血壓恢復(fù)。

假如血壓并不下降，可調(diào)節(jié)刺激強度或刺激頻率再行刺激。任何

刺激都無效時，則表示此神經(jīng)并非主動脈神經(jīng)。需要重新辨認(rèn)神

經(jīng)后再行試驗。

曲線下降，由于迷走神經(jīng)節(jié)后纖維末梢釋放的遞質(zhì)作用于心肌，可導(dǎo)致心率減慢，心房肌收縮能力削弱，心房肌不應(yīng)期縮短，房室傳導(dǎo)速度減慢，血壓降低。

（3）腎上腺素對血壓的影響記錄對比血壓曲線后，用1ml注射器，從耳緣靜脈注入0.1~0.3ml腎上腺素溶液，觀看并記錄血壓變化及

恢復(fù)曲線。

曲線升高，由于腎上腺素可使血管收縮，可使血壓升高。

（4）乙酰膽堿對血壓的影響同法注入0.1~0.2ml乙酰膽堿溶液，觀看并記錄注射前后血壓變化。

曲線下降，由于乙酰膽堿可以促使血管舒張，使血壓降低。

二．離體腸段平滑肌的生理特征

1.裝好試驗裝置，麥?zhǔn)显〔弁獾乃囟葹?7℃，浴槽內(nèi)調(diào)溫至37±0.5

℃。

2.制備離體兔腸段

剖開家兔腹腔，找到胃幽門與十二指腸交界處，在十二指腸起始端扎一線，剪取十二指腸、空腸，放入冷臺氏液內(nèi)。先用20ml注射器沖洗腸內(nèi)容物，沖洗整潔后剪成若干約1.5cm長的小腸段，在其兩端結(jié)扎，一端做一短線環(huán)固定在通氣的L管下方或浴皿內(nèi)，另一端扎線與張力傳感器相連。將腸段徹低浸浴在調(diào)好溫度的麥?zhǔn)显〔壑?，并調(diào)節(jié)好臺氏液充氣量（小氣泡銜接不斷）。

3.開啟計算機采集系統(tǒng)，接通與張力傳感器相連的通道。固定L管并調(diào)整

扎線于張力傳感器，使腸段運動自如又能牽動傳感器（注重：扎線不行貼壁或過松過緊）。調(diào)整增益與掃描速度，使腸段的運動曲線清楚地顯示

在顯示器上并記錄腸段活動曲線。

4.試驗觀看

（1）記錄對比腸段運動曲線。

（2）記錄對比曲線后，加入2滴腎上腺素（1：10000），觀看并記錄曲線變化。

曲線下降，由于腎上腺素可以使腸道舒緩，收縮減緩減慢。

（3）同法加入1~2滴乙酰膽堿（1：10000），觀看并記錄曲線變化。

（4）加入3滴阿托品后立，觀看并記錄曲線變化。

曲線輕微下降，很快又恢復(fù)正常。由于阿托品僅為乙酰膽堿的抑制劑，對小腸的調(diào)控作用不大，應(yīng)為下降或不變。

注重事項

1.加藥前必需預(yù)備好更換用的37℃臺氏液。上述藥物劑量僅為參考，效果不

顯然可補加，每次加藥浮現(xiàn)效果后，必需立刻更換浴槽內(nèi)的臺氏液并沖洗3次，待腸肌恢復(fù)正?；顒雍笤儆^看下一項目。浴槽內(nèi)臺氏液要保持一定高度。

2.游離及取出腸段時，動作要快，取兔腸及兔腸穿線時，盡可能不用金屬及

手指觸及。為保持離體腸段的活性，可先預(yù)冷充氧的養(yǎng)分液，游離腸段及

穿線在預(yù)冷的養(yǎng)分液中舉行。試驗中始終要通氣。

思量題

1.如何證實主動脈神經(jīng)是傳入神經(jīng)？

答：雙結(jié)扎主動脈神經(jīng)，從兩結(jié)扎線之間剪斷，刺激外周端，血壓無變化，刺激其中樞端，血壓上升，由此可見其神經(jīng)沖動傳導(dǎo)方向為由外周至中樞，因此為傳入神經(jīng)。