動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座

動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第1頁(yè)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體制備細(xì)胞核移植動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞工程基礎(chǔ)動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第2頁(yè)2.2.1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第3頁(yè)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第4頁(yè)（一）、概念

是指從動(dòng)物機(jī)體內(nèi)取出相關(guān)組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后放在適宜培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。（二）、原理細(xì)胞分裂增殖動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第5頁(yè)（三）、過程幼齡動(dòng)物剪碎組織原代細(xì)胞培養(yǎng)取動(dòng)物器官和組織細(xì)胞懸浮液傳代細(xì)胞培養(yǎng)胰蛋白酶處理單個(gè)細(xì)胞胰蛋白酶處理單個(gè)細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第6頁(yè)細(xì)胞貼壁:培養(yǎng)貼附性細(xì)胞時(shí),細(xì)胞要能貼附于底物上才能生長(zhǎng)繁殖.動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第7頁(yè)細(xì)胞接觸抑制

細(xì)胞在貼壁生長(zhǎng)過程中，伴隨細(xì)胞分裂，數(shù)量不停增加，最終形成一個(gè)單層，此時(shí)細(xì)胞間相互接觸，細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)停頓，數(shù)量不再增加。動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第8頁(yè)相關(guān)概念原代培養(yǎng)：從機(jī)體取出后馬上培養(yǎng)細(xì)胞為原代細(xì)胞。普通培養(yǎng)第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)細(xì)胞稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細(xì)胞懸浮液，分裝到兩個(gè)或兩個(gè)以上培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第9頁(yè)歸納過程取

組織、器官細(xì)胞懸浮液

酶

貼滿瓶壁細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞加入

液動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物胰蛋白培養(yǎng)接觸抑制原代

培養(yǎng)(分裝前)1-10代細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第10頁(yè)遺傳物質(zhì)

改變?cè)?xì)胞培養(yǎng)加

液40—50代細(xì)胞(細(xì)胞株)未遺傳物質(zhì)

改變無限傳代（細(xì)胞系）已傳代培養(yǎng)胰蛋白

酶

動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第11頁(yè)相關(guān)概念

細(xì)胞株：原代細(xì)胞普通傳至10代左右細(xì)胞生長(zhǎng)停滯，大個(gè)別細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到40~50代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。

細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)停滯狀態(tài)，只有個(gè)別細(xì)胞因?yàn)檫z傳物質(zhì)改變，使其在培養(yǎng)條件下能夠無限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。

細(xì)胞株和細(xì)胞系區(qū)分：細(xì)胞系遺傳物質(zhì)改變，含有癌細(xì)胞特點(diǎn)，失去接觸抑制，輕易傳代培養(yǎng)。動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第12頁(yè)思索題：1、為何選取動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料？2、為何培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞？因?yàn)檫@些組織或器官，分裂能力旺盛，易于培養(yǎng)。成塊組織使細(xì)胞靠在一起限制了細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖，且細(xì)胞不能與培養(yǎng)液充分接觸，不利于培養(yǎng)。動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第13頁(yè)3、胰蛋白酶作用是什么呢？由此可說明細(xì)胞間物質(zhì)是什么成份？催化蛋白質(zhì)水解。細(xì)胞間物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)(膠原蛋白等)。4、細(xì)胞膜主要成份是什么？蛋白質(zhì)和磷脂5、胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉嗎？能動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第14頁(yè)6、既然胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉，那將動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞要注意什么問題呢？7、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為何？注意時(shí)間控制

不能，因?yàn)槎咦钸mPH不一樣，而正常組織細(xì)胞生存環(huán)境與胰蛋白酶最適PH較靠近動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第15頁(yè)1、無菌、無毒環(huán)境

確保細(xì)胞順利生長(zhǎng)增殖

添加一定量抗生素，定時(shí)更換培養(yǎng)液添加：糖（葡萄糖）、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無機(jī)鹽、微量元素、動(dòng)物血清等。（四）、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件2、營(yíng)養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第16頁(yè)3、溫度和PH

培養(yǎng)室中控制,使之到達(dá)36.5±0.5℃,7.2~7.4培養(yǎng)箱中提供O2和CO2（95%空氣和5%CO2

）4、氣體環(huán)境：動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第17頁(yè)植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)比較比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)基特有成份

、植物激素葡萄糖、培養(yǎng)結(jié)果植物體培養(yǎng)目標(biāo)快速繁殖、培育無病毒植株取得全能性增殖蔗糖動(dòng)物血清細(xì)胞株、細(xì)胞系細(xì)胞,一些蛋白質(zhì)動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第18頁(yè)（五）、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用（3）細(xì)胞生理、藥理、病理研究

（1）培養(yǎng)健康細(xì)胞用于燒傷病人皮膚移植（2）基因工程受體細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第19頁(yè)前景展望資料一：動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第20頁(yè)

培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞能夠用于檢測(cè)有毒物質(zhì)。許多致畸、致癌物質(zhì)加入培養(yǎng)液后，培養(yǎng)細(xì)胞會(huì)發(fā)生染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)目標(biāo)變異。依據(jù)變異細(xì)胞占全部培養(yǎng)細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，能夠判斷某種物質(zhì)毒性?，F(xiàn)在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)已經(jīng)成為檢測(cè)有毒物質(zhì)快速而靈敏有效伎倆。資料二：動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第21頁(yè)人工關(guān)節(jié)——軟骨再生1.第一次手術(shù):從病人關(guān)節(jié)軟骨中未受力個(gè)別，取出一片約為葡萄干大小健康軟骨組織。2.分離軟骨細(xì)胞并經(jīng)三星期體外培養(yǎng)，使細(xì)胞數(shù)增加約10～20倍。3.第二次手術(shù):清理軟骨受損個(gè)別，從下方骨頭部位取出一片約與傷口大小相同骨膜，縫在傷口上方，再將軟骨細(xì)胞注射到骨膜下方。資料三：結(jié)果:經(jīng)過復(fù)健一年后即可恢復(fù)正常生活。動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第22頁(yè)動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第23頁(yè)（一）、動(dòng)物細(xì)胞核移植概念：

動(dòng)物核移植是將動(dòng)物一個(gè)細(xì)胞細(xì)胞核,移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核卵母細(xì)胞中.使其重組并發(fā)育成一個(gè)新胚胎,這個(gè)新胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體.克隆動(dòng)物：用核移植方法得到動(dòng)物。動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第24頁(yè)動(dòng)物核移植是將動(dòng)物一個(gè)細(xì)胞細(xì)胞核,移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核卵母細(xì)胞中.使其重組并發(fā)育成一個(gè)新胚胎,這個(gè)新胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第25頁(yè)（二）、分類：胚胎細(xì)胞核移植：體細(xì)胞核移植：細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性輕易

細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)全能性困難克隆動(dòng)物:用核移植方法得到動(dòng)物.

克?。╟lone）是指經(jīng)過無性生殖而產(chǎn)生遺傳上均一生物群，即含有完全相同遺傳組成一群細(xì)胞或者生物個(gè)體。克隆在希臘語中是“小樹枝葉”意思，用以指無性增殖物。

動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第26頁(yè)動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第27頁(yè)動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第28頁(yè)去核卵細(xì)胞供體細(xì)胞電刺激使兩細(xì)胞融合重組細(xì)胞重組胚胎新個(gè)體代孕母牛C胚胎移植卵細(xì)胞培養(yǎng)無性生殖（三）、體細(xì)胞核移植過程高產(chǎn)奶牛A供體細(xì)胞培養(yǎng)供卵奶牛B動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第29頁(yè)（四）、體細(xì)胞核移植技術(shù)應(yīng)用前景

1、在畜牧業(yè)中能夠加速家畜遺傳改良進(jìn)程2、保護(hù)瀕危物種3、生產(chǎn)醫(yī)用蛋白質(zhì)及組織器官移植供體動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第30頁(yè)（五）、體細(xì)胞核移植技術(shù)存在問題

1、克隆動(dòng)物基因組重新編程機(jī)制尚不清楚。2、克隆技術(shù)效率低，畸形率高、死亡率高、易出現(xiàn)早衰等問題。3、生產(chǎn)克隆動(dòng)物費(fèi)用昂貴。動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第31頁(yè)2、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變細(xì)胞是（）

A．取得不死性細(xì)胞B．10代以內(nèi)細(xì)胞

C．原代細(xì)胞D．傳代細(xì)胞1、動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)基礎(chǔ)是（）

A.動(dòng)物細(xì)胞融合B.單克隆抗體

C.胚胎移植D.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

AD課堂反饋練習(xí)動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第32頁(yè)3、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)敘述中正確是：（）A、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)目標(biāo)只是為了取得大量細(xì)胞分泌蛋白B、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶使細(xì)胞分散C、細(xì)胞癌變發(fā)生在原代培養(yǎng)向傳代培養(yǎng)過渡過程中D、培養(yǎng)至50代后傳代細(xì)胞遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生改變B動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第33頁(yè)4、普通說來，動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)需要滿足以下條件（）①無毒環(huán)境②無菌環(huán)境③培養(yǎng)基需要加入血清④溫度與動(dòng)物體溫相同⑤需要O2，不需要CO2⑥CO2能調(diào)整培養(yǎng)液PHA、①②③④⑤⑥B、①②③④C、①③④⑤⑥

D、①②③④⑥D(zhuǎn)動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第34頁(yè)5、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)特點(diǎn)（）①細(xì)胞貼壁②有絲分裂③細(xì)胞分化④接觸抑制⑤減數(shù)分裂⑥原代培養(yǎng)普通傳1－10代A、①②④⑥

B、②③④⑤C、①③④⑥

D、③④⑤⑥A動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第35頁(yè)6、下列圖是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)過程示意圖。請(qǐng)據(jù)此回答：（1）容器A中放置是動(dòng)物器官或組織。它普通取自______________________。（2）容器A中動(dòng)物器官或組織首先要進(jìn)行處理是

，然后用

酶處理，這是為了使細(xì)胞分散開來，這么做目標(biāo)是

。動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物剪碎胰蛋白使細(xì)胞與培養(yǎng)液充分接觸，便于培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第36頁(yè)（3）培養(yǎng)首先在B瓶中進(jìn)行，瓶中培養(yǎng)基成份有

________________等。在此瓶中培養(yǎng)一段時(shí)間后，有許多細(xì)胞衰老死亡，這是培養(yǎng)到第

代，到這時(shí)培養(yǎng)稱為__。（4）為了把B瓶中細(xì)胞分裝到C瓶中，用

處理，然后配置成

，再分裝。`動(dòng)物血清10原代培養(yǎng)胰蛋白酶細(xì)胞懸浮液動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第37頁(yè)動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第38頁(yè)動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第39頁(yè)動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第40頁(yè)細(xì)胞A細(xì)胞B雜種細(xì)胞滅活病毒物理法化學(xué)法動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第41頁(yè)用滅活病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合過程細(xì)胞核病毒顆粒細(xì)胞核動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第42頁(yè)細(xì)胞融合與融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合物質(zhì)誘導(dǎo)劑：病毒、聚乙二醇

誘導(dǎo)細(xì)胞融合病毒必須滅活。

思索討論：為何細(xì)胞融合過程中使用病毒需要滅活？動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第43頁(yè)動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第44頁(yè)動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第45頁(yè)動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第46頁(yè)動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第47頁(yè)動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第48頁(yè)動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第49頁(yè)二、單克隆抗體什么是抗體？

抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合含有免疫功效球蛋白。B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體。動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第50頁(yè)單克隆抗體

由單個(gè)B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖（克?。?，形成基因型相同細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)抗體稱為單克隆抗體。

特點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高

動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第51頁(yè)

單克隆抗體制備過程

注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量、能產(chǎn)生特定抗體細(xì)胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞工程專業(yè)講座第52頁(yè)單克隆抗體應(yīng)用與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強(qiáng)，靈敏度高。應(yīng)用主要有：1、臨床診療2