醫(yī)科考研藥分3雜質(zhì)檢查

第三章藥物的雜質(zhì)檢查學習要求掌握藥物中雜質(zhì)的來源、分類、雜質(zhì)限量的概念和計算，一般雜質(zhì)和特殊雜質(zhì)檢查方法熟悉藥物中雜質(zhì)鑒定方法了解熱分析法基本原理及其中雜質(zhì)研究中的應用一、藥物的雜質(zhì)與純度第一節(jié)藥物的雜質(zhì)與限量1.藥物純度：指藥物的純凈程度。2.雜質(zhì)：藥物中存在的無治療作用的、影響藥物穩(wěn)定性和療效、甚至對人體健康有害的物質(zhì)。例：外消旋氧氟沙星

左氧氟沙星有抗感染作用3對藥物純度的認識是在防治疾病的實踐中積累起來的如：ASA中除了SA外，還存在乙酰水楊酸酐、乙酰水楊酰水楊酸等SA的衍生物，具有致敏作用。4.對藥物純度的要求隨著臨床應用的實踐和分析測試技術的發(fā)展，在不斷改進，使之更加完善如：度冷丁（Ⅰ）1948年收入BP，1970年經(jīng)GC分離鑒定出兩種無效異構體（Ⅱ）和（Ⅲ），有時高達20%～30%。5.藥物純度的評價：應把藥物的性狀、理化常數(shù)、雜質(zhì)檢查、含量測定等作為一個有聯(lián)系的整體來評價藥物的純度。（低血鉀，使肌肉組織先興奮，再轉(zhuǎn)為抑制而致麻痹）6.不能用化學試劑的規(guī)格代替藥品標準，更不能將化學試劑當作藥品直接用于臨床如：試劑規(guī)格的BaSO4,允許存在可溶性鋇鹽藥品中不允許：可導致醫(yī)療事故雜質(zhì)的來源：生產(chǎn)過程中引入貯藏過程中產(chǎn)生二、雜質(zhì)的來源A+B→C→D+E①原料中間產(chǎn)物副產(chǎn)物產(chǎn)品③試劑溶劑催化劑⑤金屬容器、管道、裝置②制劑過程中產(chǎn)生新雜質(zhì)④異構體多晶型在貯藏過程中，受外界條件如：溫度、濕度、光線、空氣或微生物的影響，發(fā)生水解、氧化、分解、異構化、晶型轉(zhuǎn)變、聚合、潮解和發(fā)霉等變化，產(chǎn)生相關雜質(zhì)。

依雜質(zhì)來源分類：一般雜質(zhì)：含義，品種特殊雜質(zhì)：含義依雜質(zhì)毒性分類：信號雜質(zhì)有害雜質(zhì)依雜質(zhì)理化性質(zhì)分類：有機雜質(zhì)無機雜質(zhì)殘留溶劑三、雜質(zhì)的分類一般雜質(zhì):在自然界分布比較廣泛,在多種藥物的生產(chǎn)或貯存過程中容易引入的雜質(zhì)。如：pH值、溶液的澄清度、氯化物、硫酸鹽、重金屬等特殊雜質(zhì)：在特定藥物的生產(chǎn)和貯存過程中，因其生產(chǎn)工藝或藥物本身的性質(zhì)可能引入的雜質(zhì)。如：乙酰水楊酸中的水楊酸四、雜質(zhì)的限量在不對人體有害、不影響療效的情況下，允許藥物中存在一定量的雜質(zhì)1.雜質(zhì)限量：藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量表示方法：％或百萬分之幾2.限量檢查：藥物中雜質(zhì)的檢查，一般不要求測定其含量，而只是檢查雜質(zhì)的量是否超過限量3.方法供試液對照液合格不合格（被檢雜質(zhì)對照品按照限量標準配制而成）（1）對照法相同條件下反應比較供試液＜對照液現(xiàn)象現(xiàn)象供試液＞對照液現(xiàn)象現(xiàn)象（2）靈敏度法：在供試品溶液中加入一定量試劑，在一定條件下反應，不得有正反應出現(xiàn)（3）比較法：取供試品一定量依法檢查，測定特定的雜質(zhì)參數(shù)，與規(guī)定的限量相比，不得更大如：UV法檢查腎上腺素中的腎上腺素酮配2.0mg/mlλ=310nmA≤0.05

4.計算公式雜質(zhì)限量=雜質(zhì)最大允許量／供試品量×100％例題※※※注意：統(tǒng)一單位求的目的（L？C？V?S?）是否稀釋限量表示方法第二節(jié)雜質(zhì)的檢查方法專屬性強方法：利用藥物和雜質(zhì)在物理和化學性質(zhì)上的差異進行物理:外觀性狀、分配或吸附、對光的吸收的差異化學:對某一化學反應的差異雜質(zhì)與試劑反應藥物無反應一、雜質(zhì)的研究規(guī)范二、雜質(zhì)的常用檢查方法（一）化學方法利用藥物和雜質(zhì)在化學性質(zhì)上的差異，選擇合適的試劑，使之與雜質(zhì)反應產(chǎn)生顏色、沉淀或氣體，而藥物不發(fā)生反應1.比色法2.比濁法3.滴定法或指示劑法（1）滴定法：以滴定至終點消耗滴定液的體積雜來檢查藥物中雜質(zhì)的量（2）指示劑法：根據(jù)加入定量滴定液與指示劑后，溶液應顯示或不應顯示特定顏色的方法（二）色譜方法1、TLC（1）雜質(zhì)對照品法判斷結果：供試品溶液如顯與對照品相應的雜質(zhì)斑點，其顏色與對照品溶液主斑點比較，不得更深特點：分離效能高，分離的同時進行測定，應用廣泛需要對照品供試品A對照品BA？B（2）供試品溶液自身稀釋對照法當雜質(zhì)結構不能確定、或無雜質(zhì)對照品時，采用此法要求：雜質(zhì)斑點的顏色與主成分斑點顏色相同或相近供試液稀釋對照液點樣、展開、干燥、顯色（高）（低）1供試品2對照品前沿原點

??12結果判斷：供試液所顯雜質(zhì)斑點與對照液主斑點比較，不得更深（3）1法與2法并用適用：當藥物中存在多個雜質(zhì)時，其中有的雜質(zhì)有對照品，有的雜質(zhì)沒有對照品或結構未知（4）對照藥物法適用：無合適雜質(zhì)對照品，或供試品雜質(zhì)斑點顏色與主成分斑點顏色有差異可用與供試品相同的藥物作為對照品，此藥物所含待檢雜質(zhì)需符合限量要求，且穩(wěn)定性好（1）外標法測定需要雜質(zhì)對照品，進樣量能夠精確控制供試液：A雜對照液：A對2.高效液相色譜法(HPLC)(2)加校正因子的主成分自身對照法建立方法時，需要雜質(zhì)對照品雜質(zhì)檢查時，不需雜質(zhì)對照品①雜質(zhì)對照品＋藥物對照品f校正因子直接載入各品種質(zhì)量標準中②供試液對照液：供試液稀釋成與L相當?shù)娜芤?/p>

分別測定C雜(3)不加校正因子主成分對照法用于沒有雜質(zhì)對照品時雜質(zhì)的檢查對照液：供試品的稀釋液，進樣測得A主

供試液：進樣測得雜質(zhì)∑Ai，雜質(zhì)∑Ai＜A主即為合格.例如:甲硝唑中2-甲基-5-硝基咪唑:對照液(0.01mg/ml)進樣20μl,調(diào)靈敏度，使主峰達10%～30%樣品液(0.14mg/ml)進樣20μl,雜質(zhì)∑Ai＜A主的1.0%.（4）內(nèi)標法加校正因子測定法

需要雜質(zhì)對照品①校正因子的測定雜質(zhì)對照品+內(nèi)標物質(zhì)→測定②供試品+內(nèi)標物質(zhì)→測定(5)峰面積歸一化法適用于粗略測量雜質(zhì)含量L%=∑Ai/(∑Ai+A主）×100%例如：利巴韋林中有關雜質(zhì)的檢查：對照品液(5μg/ml)進樣10μl,調(diào)靈敏度，使主峰達滿量程的20%～25%樣品液(0.4mg/ml)進樣10μl,雜質(zhì)∑Ai＜(∑Ai+A主）的1.0%利用藥物和雜質(zhì)對光選擇性吸收性質(zhì)的差異1.可見-紫外分光光度法在藥物無吸收而雜質(zhì)有吸收的波長測定吸收度，規(guī)定測得的吸收度不得超過某一限值（三）光譜方法例：腎上腺素中腎上腺素酮的檢查腎上腺素酮

220260300nm腎上腺素及腎上腺素酮的紫外吸收曲線λmax310nm310nm處，腎上腺素無吸收，酮體有吸收采用UV法檢查：腎上腺素配2.0mg/mlλ=310nmA≤0.05

鹽酸去氧腎上腺素配2.0mg/mlλ=310nmA≤0.20鹽酸異丙腎上腺素配2.0mg/mlλ=310nmA≤0.152.紅外分光光度法用于藥物中無效或低效晶型的測定晶型結構不同，化學鍵的鍵長、鍵角等發(fā)生不同程度的變化，導致紅外吸收光譜中某些特征峰的頻率、峰形、強度等出現(xiàn)顯著差異。1.熱分析法在程序控制溫度下，測定物質(zhì)的物理、化學性質(zhì)與溫度關系的一類技術①熱重分析法（TGA）在程序升溫下，測量物質(zhì)的質(zhì)量與溫度的關系（四）其他方法特點：樣品用量少、靈敏、快速②差熱分析法（DTA)

是在程序升溫下，測量供試品和參比物之間的溫度差與溫度關系的一種技術。參比物是一種惰性物質(zhì)，在加熱過程中不發(fā)生相變和化學變化。因此溫差(△T)只與被測物質(zhì)的量質(zhì)變化有關?！鱐=0被測物未發(fā)生吸熱或放熱反應△T=-為吸熱峰，峰頂向下△T=+為放熱峰，峰頂向上③差示掃描量熱法(DSC)

是在程序升溫下，測量維持樣品和參比物的溫度相同，系統(tǒng)所需輸給待測物質(zhì)和參比物的能量差隨溫度（或時間）變化的熱分析技術。

供試品吸熱：系統(tǒng)供能增加供試品放熱：系統(tǒng)供能減少應用：鑒別、晶型鑒別、純度檢查、測定熔點或水分2.酸堿度檢查法酸堿滴定法：以消耗酸或堿滴定液的毫升數(shù)為限度指標指示液法：將一定量指示液的變色pH范圍作為限度指標pH測定法：測定供試液的pH值3.物理性狀檢查法：

利用藥物和雜質(zhì)在物理性質(zhì)上的差異臭味及揮發(fā)性的差異若存在具有特殊氣味的雜質(zhì)，可由氣味判斷顏色的差異藥物無色有色雜質(zhì)有色分解產(chǎn)物溶液顏色檢查法溶解行為的差異藥物溶于水、有機溶劑、酸、堿雜質(zhì)不溶于···································或反之旋光性質(zhì)的差異例：ChP規(guī)定黃體酮在乙醇中的比旋度為:＋186～198°

黃體酮及其中間體的比旋度（溶劑：乙醇）化合物

濃度%

溫度℃

比旋度

黃體酮1～1.4

20～25

+193°±4°

醋酸雙烯醇酮0.920-31°±2°

醋酸妊娠烯醇酮1常溫+20°±2°一．氯化物檢查法：1.原理：供試液：Ag＋+Cl－→AgCl↓（白色混濁）對照液：標準氯化鈉溶液……………

2.方法：比濁第三節(jié)藥物中一般雜質(zhì)的檢查3.討論黑色背景下，從上至下觀察氯化物適宜濃度：50~80μg/50ml硝酸酸性：避免弱酸銀鹽的干擾，加速氯化銀沉淀的生成并產(chǎn)生較好的乳濁避光：避免光線使Ag析出供試液若不澄清：用含硝酸的水洗凈濾紙中的氯化物后過濾暗處5min硝酸銀1.0ml暗處5min供試液若有色：內(nèi)消色法二、硫酸鹽檢查法1.原理：供試液：SO４2－＋Ba2＋→BaSO４↓（白色混濁）對照液：標準硫酸鉀溶液………比濁2.方法3.討論黑色背景下，從上至下觀察硫酸鹽適宜比濁濃度：100~500μg/50ml鹽酸酸性供試液如需濾過供試液若有色三．鐵鹽檢查法（一）硫氰酸鹽法1.原理：供試液：Fe3＋＋6SCN－→[Fe(SCN)6]3－（紅色）

對照液：標準鐵溶液………………比色2.方法3.討論白色背景下，從側(cè)面觀察對照液供試液對照液供試液鹽酸酸性：防止鐵鹽水解過硫酸銨：防止光線使硫氰酸鐵還原或分解褪色Fe3＋的適宜比色范圍：10~50μg/50ml色調(diào)不一致時：正丁醇提取實驗：葡萄糖中鐵鹽的檢查，+HNO3處理四、重金屬檢查法重金屬：在實驗條件下與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬雜質(zhì)如銀、鉛、汞、銅、鎘、錫、銻、鉍等，檢查時以鉛作為代表

ChP(2010年版)共三法第一法(硫代乙酰胺法):用于溶于水、稀酸和乙醇的藥物1.原理：供試液：CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2SH2S+Pb2＋→PbS↓+2H＋（黃～棕黑）對照液：標準鉛溶液……………2.方法：比濁3.討論白色背景下，從上至下觀察pH3.5醋酸鹽緩沖液：沉淀完全Pb2＋適宜比色范圍：10~20μg/27ml供試品有微量Fe3+:氧化硫化氫析出S處理方法：加Vc供試液有色時：稀焦糖調(diào)色第二法：熾灼后的硫代乙酰胺法用于在水、稀酸、乙醇中難溶，或含芳環(huán)、雜環(huán)（能與重金屬離子形成配位化合物）的有機藥物

1.原理：C-M熾灼破壞后→Mn＋→第一法檢查

2.方法：500～600℃熾灼勘誤第三法：硫化鈉法溶于堿性水溶液而難于溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的藥物（磺胺類、巴比妥類）

供試液：Pb2＋＋Na2S→PbS↓＋２Na＋（灰黑色）對照液：標準鉛溶液………………比濁五．砷鹽檢查法古蔡氏法二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag-DDC）（一）古蔡氏法：※※※

1.原理：金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫，氫與藥物中微量砷鹽反應，生成具揮發(fā)性的砷化氫氣體，遇溴化汞試紙產(chǎn)生黃至棕色的砷斑，與一定量標準砷溶液在同樣條件下生成的砷斑比較，顏色不得更深As3++3Zn+3H+→3Zn2++AsH3

AsO33-+3Zn+9H+

→3Zn2++3H2O+AsH3AsO43-+4Zn+11H+

→4Zn2++4H2O+AsH3AsH3+3HgBr2

→3HBr+As(HgBr)3(黃色)2As(HgBr)3+AsH3

→

3AsH(HgBr)2(棕色)As(HgBr)3+AsH3

→3HBr+As2Hg3(黑色)2.儀器裝置

3.方法：

醋酸鉛棉花的作用

KI和酸性SnCl2的作用標準砷斑用2ml的標準砷溶液制成供試品、HCl、Zn、KI、SnCl2Pb(Ac)2棉HgBr2試紙返回樣品砷斑標準砷斑KI和酸性SnCl2的作用：

AsO43-+2I-+2H+→AsO33-+I2+H2O

AsO43-+Sn2++2H+→AsO33-+Sn4++H2O②I2+Sn2+→2I-+Sn4+

4I-+Zn2+→[ZnI4]2-AsO43-AsO33-AsH3慢快KISnCl2①將五價砷還原為三價砷，加快反應速度＋5＋3③抑制銻化氫的生成促進AsH3的生成④形成Zn-Sn齊，去極化返回Pb(AC)2棉的作用：消除鋅粒和供試品中可能含有的少量的硫化物的影響。S2-+2H+H2SH2S+HgBr22HBr+HgS（汞斑）H2S+Pb(Ac)2PbS+2HAc

返回4.供試品處理（1）供試品為S2-,SO32-,S2O32-等:在酸中生成H2S/SO2,與HgBr作用生成HgS或Hg，干擾砷斑檢查。用硝酸氧化成硫酸鹽可消除。（2）供試品為Fe3+，能消耗KI、SnCl2，先加足量SnCl2（3）環(huán)狀結構有機藥物，先有機破壞（4）含銻藥物，改用白田道夫（Betterdorff）法2As3++3SnCl2+6HCl→2As↓+3SnCl4+6H+棕褐色膠態(tài)（二）二乙基二硫代氨基甲酸銀法

（silverdiethyldithiocarbamate)（Ag-DDC法）

1.原理：供試液：AsH3+6Ag（DDC）→６Ag＋…

（紅色膠態(tài)）對照液：標準砷溶液………2.儀器裝置：

比色或測定A改錯Ag(DDC)的吡啶溶液(USP)三乙胺-氯仿溶液(ChP)3.方法：白色背景下，從上至下觀察；或在510nm處，測定吸收度線性范圍：1～10μg/40ml含銻藥物不干擾測定用于砷鹽的限量檢查和微量砷鹽的含量測定比較古蔡法優(yōu)點：靈敏度高（1μg）；簡便、成本低缺點：Sb有干擾；不可做定量分析Ag-DDC法優(yōu)點：靈敏度高（0.5μg)；儀器測定、重現(xiàn)性好;

500μgSb無干擾缺點：吡啶惡臭、有毒白田道夫法優(yōu)點：可消除Sb的干擾缺點：靈敏度低（20μg）六、干燥失重測定法干燥失重：藥品在規(guī)定條件下，經(jīng)干燥后所減失的量，以百分率表示檢查：藥物中的水分和揮發(fā)性物質(zhì)1.常壓恒溫干燥法適用于受熱較穩(wěn)定的藥物；溫度：105℃2.減壓干燥法適用于熔點低、受熱分解的藥物3.干燥劑干燥法適用于受熱易分解或升華的藥物干燥劑：硅膠、硫酸、五氧化二磷七、水分測定法卡爾·費休法費休氏液：I2、SO2、無水甲醇、無水吡啶原理：I2+SO2+H2O2HI+SO3

終點：費休氏液：淡黃→紅棕色永停法八、熾灼殘渣檢查法熾灼殘渣：有機藥物經(jīng)炭化或揮發(fā)性無機藥物加熱分解后高溫熾灼，所產(chǎn)生的非揮發(fā)性無機雜質(zhì)的硫酸鹽加硫酸熾灼法：700～800℃;如熾灼殘渣需留作重金屬檢查，500～600℃恒重：供試品連續(xù)兩次熾灼或干燥后的重量差異在0.3mg以下九、易炭化物檢查法檢查藥物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有機雜質(zhì)。這類雜質(zhì)多數(shù)結構未知，常采用加硫酸呈色后與對照液比較的方法進行檢查。對照液為：標準比色液

由CoCl2,K2Cr2O7,CuSO4

配制

KMnO4液十、殘留溶劑測定法

主要檢查藥物在生產(chǎn)過程中引入的有害的有機溶劑