微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)學(xué)案有答案

專題二生物培養(yǎng)和用課題1微物的實(shí)室培養(yǎng)【標(biāo)位了解培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)，進(jìn)行微生物培養(yǎng)和無菌技術(shù)的操作。【主習(xí)一、培基：1．概念：人們按照微生物對(duì)

的不同需求，配制出供其

的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)叫培養(yǎng)基。可分為

培養(yǎng)基和

培養(yǎng)基。2．營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般含有、、

和，外還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)、

以及

的要求。3．養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需在培養(yǎng)基中添加、培養(yǎng)霉菌時(shí)需將培養(yǎng)基PH調(diào)至、培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)需將調(diào)至、養(yǎng)厭氧生物則需提供

條件?！妓伎?〗從細(xì)胞的化學(xué)元素組成來看，培養(yǎng)中為什么都含有這些營(yíng)養(yǎng)成分二、無技術(shù)

：閱讀“無菌技術(shù)”，討論回答下列問題：(一獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是，具體操作如下：1．對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的、作的

和

進(jìn)行。2．將用于微生物培養(yǎng)的、

和

等器具進(jìn)行。3．為避免周圍環(huán)境中微生物的染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在4．實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌理的材料用具與(二消毒和滅菌

附近進(jìn)行。相接觸。1．消毒是指用的方法有、、消毒法。2．菌是指

。常。常用的方法有：、、滅菌。分別適用于那些用具〖思考2〗無菌技術(shù)除了防止培養(yǎng)物被污染外還具有的目的是什么〖思考3〗利用干熱滅菌箱對(duì)玻璃器皿滅菌時(shí)品不能擺得太擠，目的是什么〖思考4品裝入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌后首打開排氣閥沸并排除鍋內(nèi)冷空氣，其目的是；隨后關(guān)閉排氣閥繼續(xù)加熱，氣壓升至，度為，維持min；后切斷熱源，使溫度自然降溫，氣壓務(wù)必降至?xí)r打開鍋蓋，其目的是防止。三、實(shí)操作----腸桿菌純化培

：本實(shí)驗(yàn)所用的培養(yǎng)基是本實(shí)驗(yàn)可分成兩個(gè)階段進(jìn)行。（）備肉蛋胨體養(yǎng)1制牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的操作步驟是：、、、、。

和〖考5〗制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的稱操作中，動(dòng)作要迅速，原因是什么溶化操作中需要不斷用玻璃棒攪拌的目的是什么〖考6〗肉膏和蛋白胨主要為微生物提供什么等營(yíng)養(yǎng)質(zhì)

2．倒板：待培養(yǎng)基冷卻至℃右時(shí)在酒精燈火焰附近操作進(jìn)行。其過程是：①在火焰旁右手拿，左手；②使錐形瓶的瓶口；③左手將培養(yǎng)皿，手，立刻蓋上皿蓋。④待平板冷卻凝固后，將平板?！妓伎?〗錐形瓶的瓶口通過火焰的目的是什〖思考8〗平板倒置的目的是什么〖思考9〗若皿蓋和皿底之間粘有培養(yǎng)基，則平板能否培養(yǎng)微生物為什么（）化腸菌微生物接種：最常用的是和斜面接種等。1．平板劃線法是

法和

法。另外還有穿刺接種的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。其操作步驟是：①將

在酒精燈火焰上灼燒直至。②在酒精燈火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開大腸桿菌的菌種試管的棉塞。③將菌種試管口通過火焰達(dá)到

的目的。④將冷卻的接種環(huán)伸入到。⑤將菌種試管口再次通過火焰后塞上棉塞。⑥將皿蓋打開一條縫隙把種蓋上皿蓋不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基。⑦灼燒接種環(huán)，冷卻后從完成三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將

劃線。重復(fù)上述過程，相連。⑧將平板〖思考10〗菌種前灼燒接種環(huán)的目的是什么

培養(yǎng)。為什么除第一次劃線外，其余劃線前都要灼燒接種環(huán)取菌種和劃線前都要求接種環(huán)冷卻后進(jìn)行，其目的是最后灼燒接種環(huán)的目的是在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線2．稀釋涂布平板法則是將菌液行一系列的梯度，然后將進(jìn)行培養(yǎng)當(dāng)稀釋倍數(shù)足夠高時(shí)可獲得單個(gè)細(xì)菌形成的。系稀操：①取盛有

水無菌試管支，號(hào)101、2、、4、、。②用灼燒冷卻的移液管吸取

菌注入編號(hào)為101

試管中，并吹打3次使之混勻。③從101

倍液中吸取

菌注入到編號(hào)為2

試管內(nèi)吹打均勻，獲得10

倍液。依此類推。〖考〗系稀釋操作的注意事項(xiàng)是什么涂平操：⑴將

浸在盛有

的燒杯中。⑵取少量（超過加到培養(yǎng)基表面。⑶將⑷用涂布器將菌液使菌液分布均勻。四、結(jié)分析與評(píng)價(jià)

的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻。地涂布在培養(yǎng)基的表面。涂布時(shí)可，

1．養(yǎng)未接種培養(yǎng)基的作用是什么，若有菌落形成，說明什么2．肉湯培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落顏色形態(tài)3．養(yǎng)12h和24h后菌落大?。痪浞植嘉恢迷颉伎肌皆谂囵B(yǎng)基上出現(xiàn)了3種特征不同的菌落是什么原因〖考〗頻使用的菌種利用什么法保存長(zhǎng)期保存菌種的方法是什么【堂測(cè)計(jì)1．下列關(guān)于微生物營(yíng)養(yǎng)的說法正確的是A．同一種物質(zhì)不可能既作碳源作氮源．凡是碳源都能提供能量c．除水以外的無機(jī)物僅提供無鹽．無機(jī)氮源也能提供能量2．細(xì)菌培養(yǎng)過程中分別采用了壓蒸汽、酒精、火焰灼燒等幾種不同的處理，這些方法依次用于殺滅哪些部位的雜菌A．接種針、手、培養(yǎng)基．高壓鍋、手、接種針C．培養(yǎng)基、手、接種針．接種針、手、高壓鍋3．以下關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨體培養(yǎng)基的敘述錯(cuò)的是A．操作順序?yàn)橛?jì)算、稱量、溶、倒平板、滅菌B．將稱好的牛肉膏連同稱量紙同放人燒杯C．待培養(yǎng)基冷卻至℃右時(shí)進(jìn)行倒平板D．待平板冷卻凝固約5～10后將平板倒過來放置【展練計(jì)1．下列有關(guān)培養(yǎng)基的敘述正確是A．培養(yǎng)基是為微生物的生長(zhǎng)繁提供營(yíng)養(yǎng)的基質(zhì)B．培養(yǎng)基只有兩類：液體培養(yǎng)和固體培養(yǎng)基C．固體培養(yǎng)基中加入少量水即制成液體培養(yǎng)基D．微生物在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，可以形成肉眼可見的單個(gè)細(xì)菌2.不同培養(yǎng)基的具體配方不同，一般都含A．碳源、磷酸鹽和維生素．源和維生素C．水、碳源、氮源和無機(jī)鹽．碳元素、氧元素、氫元素、氮元素3．獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是A．將用于微生物培養(yǎng)的器皿、種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌B．接種純種細(xì)菌C．適宜環(huán)境條件下培養(yǎng)D．防止外來雜菌的入侵4．下列常用的無菌操作中錯(cuò)誤是A．用酒精擦拭雙手．氯氣消毒水源C．實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附進(jìn)行．玻璃器皿(管、培養(yǎng)皿可酒精擦拭5．有關(guān)倒平板的操作錯(cuò)誤的是A．將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰的桌面上．使打開的錐形瓶瓶口迅速通過火焰C．將培養(yǎng)皿打開，培養(yǎng)皿蓋倒在桌子上．等待平板冷卻凝固后需要倒過來放置6．有關(guān)平板劃線操作正確的是A．使用已滅菌的接種環(huán)、培養(yǎng)，操作過程中不再滅菌B．打開含菌種的試管需通過火滅菌，取出菌種后需馬上塞上棉塞

c．將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸平板內(nèi)，劃三至五條平行線即可D．最后將平板倒置，放人培養(yǎng)中培養(yǎng)7．有關(guān)稀釋涂布平板法，敘述誤的是A．首先將菌液進(jìn)行一系列的梯稀釋B．然后將不同稀釋度的菌液分涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面C．再放在適宜條件下培養(yǎng)D．結(jié)果都可在培養(yǎng)基表面形成個(gè)的菌落8．涂布平板操作需要用到A．接種環(huán)、滴管、酒精燈．接種環(huán)、移液管、酒精燈C．涂布器、移液管、酒精燈．涂布器、接種環(huán)、酒精燈9．將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未種的培養(yǎng)基都放入℃恒溫箱的目的是A．對(duì)比觀察培養(yǎng)基有沒有被微物利用．對(duì)比分析培養(yǎng)基是否被雜菌污染C．沒必要放人未接種的培養(yǎng)基．為了下次接種時(shí)再使用10．菌種保藏應(yīng)控制的條件是（1）濕度（2）低溫（3干燥（4有光（5隔絕空氣（6適當(dāng)有氧A）B））D）11．平板冷卻凝后要將平板倒置其意義是A利大腸桿菌的接種B防止雜菌污染C利培養(yǎng)的冷卻防止皿蓋冷卻水倒流入培養(yǎng)基12．鑒定培養(yǎng)基的制作是否合格方法是：將制備好的培養(yǎng)基放在

中保溫天有無，果沒有

說明制作合格，反之則不合格。參答基知一、1.營(yíng)物質(zhì)生繁殖液固體2水碳氮無鹽PH特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)氧氣3維素，酸性，中性或微堿性無氧〖思考1〗、、、、、是構(gòu)成細(xì)胞原生質(zhì)的基本元素，約占原生質(zhì)總量的％以上。二（）雜菌1.空間衣手清潔和消毒2.皿接種用具，培養(yǎng)基，滅菌3.酒精燈火焰周的物品（二）略巴消酒2.略灼燒干熱高壓蒸氣〖思考2〗防感染實(shí)驗(yàn)操作者?！妓伎?〗避免妨礙熱空氣流通。〖思考4〗有利于鍋內(nèi)溫度升高100kPa，℃15～30零，容器中的液體暴沸，實(shí)驗(yàn)操作、一1計(jì)算→量→溶化→菌→平板思考5：止牛肉膏吸收空氣中水分。防止瓊糊底而導(dǎo)致燒杯破裂?！妓伎?〗糖維素和有機(jī)2：，形瓶，拔出棉塞，迅速通過火焰，打開一條縫隙，將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿倒過來放置

〖思考7〗消滅瓶口的雜菌，防止雜菌感染培基?！妓伎?〗防止培養(yǎng)基冷卻過程中形成的水滴到培養(yǎng)基表面。〖思考9〗不能?？諝庵须s菌會(huì)在這些粘附培基上繁殖，并污染皿內(nèi)培養(yǎng)基?！妓伎?0〗大接種面積，保持通氣并防止雜菌感染。答案。二、平板劃線.稀釋涂布平板1通接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基面連續(xù)劃線，①接種環(huán)，燒紅。③，消滅試管口雜菌。④菌液中取出一環(huán)菌種。⑥，伸入平板內(nèi)劃3～5條行線，⑦，第一區(qū)劃末端開始向第二區(qū)域內(nèi)，，第五區(qū)的劃線與第一區(qū)劃線，⑧，倒置放在培養(yǎng)箱中〖思考11〗滅接種環(huán)上的微生物，的目的是消滅接種環(huán)上殘留菌種，防止高溫殺死菌種；防止細(xì)菌污染環(huán)境和操作者。獲得由單個(gè)細(xì)菌形成的標(biāo)準(zhǔn)菌落。2不稀釋度的菌液分別涂布到脂固體培養(yǎng)基的表面，①，，菌。②1。1〖思考12〗操作中試管口和移液管應(yīng)在離火焰1～處整個(gè)操作過程中使用了支移液管結(jié)分與價(jià)1對(duì)，培養(yǎng)基滅菌不徹底呈色，為圓形，光滑有光澤，邊緣整齊3大不同；菌落分布位置相同。原因是時(shí)間越長(zhǎng)，菌落中細(xì)菌繁殖越多，菌落體積越大；菌落的位置不動(dòng)，但菌落數(shù)增多?！妓伎?4〗培養(yǎng)基滅菌不徹底或雜菌感染等?！妓伎?5〗時(shí)保藏法和甘油管藏法。前者利用固體斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)后，保存在4℃箱中，每～個(gè)轉(zhuǎn)種培養(yǎng)一次，缺點(diǎn)是保存時(shí)間較短，容發(fā)生污染和變異；后者將菌種與無菌體積等量混合后保存在℃凍箱中。【例1】解析：此題考查學(xué)生對(duì)生物的營(yíng)養(yǎng)和能源的理解。對(duì)異養(yǎng)微生物來說，、H、N的化合物既是碳源，又是氮源CO是能自養(yǎng)細(xì)菌的碳源，但不能提供能量CO和N。是無機(jī)物，也是微生物的碳源和氮源。硝化細(xì)菌所利用的氮源是無機(jī)氮源氨，同時(shí)氨也為硝化細(xì)菌提供用以化能合成作用的能源。答案啟示：含C、H、o、N的化物是微生物的碳源，又是微生物的氮源；有機(jī)碳源能提供能量，無機(jī)碳源不能提供能量；無機(jī)物也可提供碳源、氮源和能源?！纠?】解：此題考查學(xué)生無菌技術(shù)的掌握。高壓蒸氣滅菌鍋是滅菌的一個(gè)設(shè)備，通常用于培養(yǎng)基的滅菌。用酒精擦拭雙手是消毒的一種方法。火焰灼燒，可以迅速?gòu)氐椎販缇?，適用于微生物的接種工具，如接種環(huán)。案：?jiǎn)⑹荆何⑸锱囵B(yǎng)過程中的無菌操作包括消毒和滅菌兩大類，分別又有各種不同的方法。對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒；將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌?！纠?】解析：制備牛肉膏蛋白固體培養(yǎng)基的步驟是計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板，不能顛倒。牛肉膏容易吸潮，所以當(dāng)牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻棒取出稱量紙。待培養(yǎng)基冷卻至50℃，用手觸摸錐形瓶剛剛不燙手，并且培養(yǎng)基處于溶化狀態(tài)。平板冷卻幾分鐘后還需倒置。答案：?jiǎn)⑹荆汗腆w培養(yǎng)基的制作步驟是→稱→→滅→平板”順不能顛倒。

并且在制作過程特別是倒平板時(shí)徹底做到“無菌【例4】

解析：滅菌是微生物發(fā)酵過程的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。說的是滅菌的目的，因?yàn)榘l(fā)酵所用的菌種大多是單一的純種，整個(gè)發(fā)酵過程不能混入其他微生物（雜菌），所以是正確的B是錯(cuò)誤的，因?yàn)闇缇哪康氖欠乐闺s菌污染，但實(shí)際操作中不可能只消滅雜菌，而是消滅全部微生物是正確的，因?yàn)榕c發(fā)酵有關(guān)的所有設(shè)備和物質(zhì)都要滅菌；發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專門接種的，滅菌必須在接種前，如果接種后再滅菌就會(huì)把所接菌種也殺死。答案：基自一3