微生物學教學課件：第九章 傳染與免疫

第九章傳染與免疫12023/5/4病原微生物感染機體對抗（免疫學）免疫(immunity)：生物體能夠辯認自我與非自我，對非我做出反應(yīng)以保持自身穩(wěn)定的功能。機體抵抗病原微生物的能力，即抗傳染免疫。傳統(tǒng)的免疫概念：2微生物與免疫學2023/5/4免疫功能的分類：32023/5/4本章主要內(nèi)容：病原體對機體的感染機體對感染的預(yù)防和治療非特異性免疫特異性免疫重點：病原體的感染及機體的抗傳染免疫作用第一節(jié)傳染第二節(jié)非特異免疫第三節(jié)特異性免疫第四節(jié)免疫學方法及其應(yīng)用第五節(jié)生物制品及其應(yīng)用42023/5/4第一節(jié)傳染病原微生物(pahogenicmicroorganism)，或病原體(pathogen)：寄生于生物(包括人)機體并引起疾病的微生物

感染(infection)，又稱傳染：機體與病原體在一定條件下相互作用而引起的病理過程。傳染?。河捎猩Φ牟≡w引起的疾病，與由其它致病因素引起的疾病在本質(zhì)上是有區(qū)別的。病原體傳染性流行性地方性季節(jié)性免疫性52023/5/4一、決定傳染結(jié)局的三大因素（一）病原體（二）宿主的免疫力（三）環(huán)境因素62023/5/4細菌—

各種侵襲性酶類、外毒素和內(nèi)毒素；真菌—

致病性、條件致病性、變態(tài)反應(yīng)和產(chǎn)真菌毒素；病毒—

殺細胞傳染、穩(wěn)定傳染和整合傳染。不同病原體的致病作用7（一）病原體決定傳染結(jié)局的最主要因素2023/5/4病原體的數(shù)量、致病特性、侵入方式?jīng)Q定致病結(jié)局。（一）病原體8以細菌性病原體為例2023/5/41、感染的途徑與方式外源性感染：來源于宿主體外的感染，主要來自病人、健康帶菌(毒)者和帶菌(毒)動、植物。內(nèi)源性感染：當濫用抗生素導致菌群失調(diào)或某些因素致使機體免疫功能下降時，宿主體內(nèi)正常菌群引起的感染。1）感染的途徑呼吸道感染消化道感染創(chuàng)傷感染接觸感染垂直傳播（p279～p280

）空氣傳播病從口入皮膚、黏膜損傷吸血昆蟲人或動物密切接觸共用用具母嬰傳染92023/5/410非傳染性感染1）感染的途徑2023/5/4A正常菌群變化B接觸環(huán)境微生物沒有宿主間的接觸11傳染性感染1）感染的途徑2023/5/4宿主間的直接或間接的接觸2）感染的部位及方式病原體侵入機體的途徑：a）絕大多數(shù)病原體不能穿過完整的皮膚，而是通過機體的自然開口、皮膚表面的創(chuàng)傷裂口，或通過導管、靜脈注入或外科切口等醫(yī)源性的途徑，進入機體內(nèi)部。b）極少數(shù)能穿過皮膚(如布魯氏菌、血吸蟲、鉤蟲)；c）有的能穿過粘膜(如脊髓灰質(zhì)炎病毒、麻疹病毒、淋球菌、沙眼衣原體)，然后通過血循環(huán)達到特定組織部位、造成病變；有的(如白喉桿菌)

能附著在粘膜上生長繁殖形成局部病灶，產(chǎn)生毒素，引起各種癥狀。（p279）122023/5/4132023/5/4表皮真皮皮下14松散胞間連接—吸附—侵入2023/5/4病原體侵入人體后寄生和造成病變的方式：細胞外感染細胞內(nèi)感染兼性細胞內(nèi)感染專性細胞內(nèi)感染某些細菌、真菌、弓形體被吞噬細胞吞噬后不被殺死，反而在細胞內(nèi)增殖，稱為兼性細胞內(nèi)感染；所有的病毒、立克次氏體、衣原體及少數(shù)細菌和原蟲只能在靶細胞內(nèi)增殖，它們必須存在于細胞內(nèi)才能引起感染，為專性細胞內(nèi)感染。許多病原體有親器官性：肝炎病毒肝細胞肺炎球菌呼吸道黏膜（p281~282）152023/5/4微生物的致病能力感染致?。克拗髋c病原菌斗爭的后果（傳染后的表癥）162023/5/42、微生物（細菌）的致病性細菌的致病性是對特定宿主而言，能使宿主致病的為致病菌，反之為非致病菌，但二者并無絕然界限。條件致病菌(opportunisticpathogen)或機會致病菌：在一般情況下不致病，但在某些特定條件下可致病的微生物17病原菌致病力的強弱毒力侵襲力毒素2023/5/4182023/5/4進入宿主細胞損傷/病變效應(yīng)入侵宿主防御系統(tǒng)1）侵襲力(invasiveness)：病原菌突破宿主防線，并能于宿主體內(nèi)定居、繁殖、擴散的能力。

吸附和侵入：細菌通過具有粘附能力的菌毛粘附于宿主的粘膜上皮細胞的相

應(yīng)受體，于局部繁殖，積聚毒力或繼續(xù)侵入機體內(nèi)部。淋病奈瑟氏球菌：菌毛可使其吸附于尿道粘膜上皮的表面而不

被尿液沖走；變異鏈球菌、乳桿菌：糖被在牙齒表面粘連成菌班，造成齲齒。

在原處生長繁殖并引起疾?。夯魜y弧菌（Vibrio）侵入細胞內(nèi)生長繁殖并產(chǎn)生毒素，使細胞死亡，造成潰瘍：

痢疾志賀氏菌（Shigelladdysenteriae），通過粘膜上皮細胞或細胞間質(zhì)侵入表層下部組織或血液中進一步擴散：溶血鏈球菌（Streptococcushaemolyticus）192023/5/420菌毛莢膜鉤。絲狀體等刺突2023/5/421很多吸附素是糖蛋白或脂蛋白2023/5/4病原物表面的糖蛋白/脂蛋白（配體/粘素分子）與宿主細胞表面受體結(jié)合繁殖與擴散：通過水解性酶類，使組織疏松、通透性增加，有利于病原菌擴散。透明質(zhì)酸酶、鏈激酶：水解纖維蛋白凝塊，擴散鏈球菌局部繁殖、積累毒力后繼續(xù)侵入機體內(nèi)部222023/5/4232023/5/4產(chǎn)生毒素，擴散到靶細胞產(chǎn)生胞外酶，松散胞間連接，擴散沙門氏菌產(chǎn)生invasins：可以重排細胞骨架的肌動蛋白微絲242023/5/4對宿主防御機能的抵抗或逃避：a）細菌的莢膜和微莢膜具有抗吞噬和體液殺菌物質(zhì)的能力；例如肺炎球菌的莢膜。致病性葡萄球菌產(chǎn)生的血漿凝固酶有抗吞噬作用；

b）分泌一些活性物質(zhì)如溶血素，抑制白細胞的趨化作用；c）具抵抗在吞噬細胞內(nèi)被殺死的能力，能在吞噬細胞內(nèi)寄生；252023/5/42）毒素(toxin)細菌毒素按其來源、性質(zhì)和作用的不同:外毒素內(nèi)毒素病原細菌，主要是一些革蘭氏陽性菌，在生長過程中合成并分泌到胞外的毒素，如破傷風痙攣毒素、白喉毒素等；也有存于胞內(nèi)當細菌溶解后才釋放的如痢疾志賀菌的腸毒素。（1）外毒素（exotoxin）：特點：通常為蛋白質(zhì)(酶/酶原/毒蛋白)，抗原性強，可選擇作用于各自特定的組織器官，不同病原菌產(chǎn)生的外毒素不同，所引起的癥狀也不同。其毒性作用強，但毒性不穩(wěn)定，對熱和某些化學物質(zhì)敏感。262023/5/427釋放毒素與受體結(jié)合、進入細胞毒素活性成分抑制細胞功能--蛋白合成2023/5/4白喉毒素作用機理破傷風梭菌：破傷風痙攣毒素(tetanospamin)和破傷風溶血毒素(tetanolysin)。282023/5/4痙攣毒素末梢神經(jīng)淋巴液血液封閉抑制性突觸的介質(zhì)釋放牙關(guān)緊閉角弓反張強直性痙攣伸肌、屈肌同時強烈收縮脊髓前角腦干破傷風致病機制292023/5/4類毒素（toxoid）和抗毒素（antitoxin）：預(yù)防：利用外毒素對熱和某些化學物質(zhì)敏感的特點，用0.3-0.4%甲醛處理，使其毒性完全喪失，但仍保持抗原性，這種經(jīng)處理的外毒素為類毒素。治療：用類毒素注射動物（如馬），以制備外毒素的抗體，稱為抗毒素。對破傷風的防、治：破傷風梭菌芽胞的抵抗力很強：土壤中可存活數(shù)十年；能耐煮沸1小時；在適宜條件下可出芽形成繁殖體，產(chǎn)生外毒素。301890VonBehring制備抗毒素治療白喉和破傷風；2023/5/4

革蘭氏陰性菌的細胞壁物質(zhì)，主要成分是脂多糖(LPS)，于菌體裂解時釋放，作用于白細胞、血小板、補體系統(tǒng)、凝血系統(tǒng)等多種細胞和體液系統(tǒng)，引起發(fā)熱、白細胞增多、血壓下降及微循環(huán)障礙，有多方面復(fù)雜作用，但相對毒性較弱。各種革蘭氏陰性菌的內(nèi)毒素作用相似，且沒有器官特異性（2）內(nèi)毒素（endotoxin）發(fā)熱又稱致熱作用，少量內(nèi)毒素(0.001μg/L)進入血流即可引起發(fā)熱，所以又稱“熱源質(zhì)”。312）毒素(toxin)2023/5/432內(nèi)毒素外毒素2023/5/4外毒素與內(nèi)毒素的比較：*1mg肉毒毒素純品可殺死2億（2000萬）只小鼠或一百萬只豚鼠，中毒的死亡率幾近100%，但及時注射抗毒素及對癥治療可使之降低。1mg破傷風毒素可殺死100萬只小鼠，1mg白喉毒素可殺死1000只豚鼠。332023/5/4測定內(nèi)毒素的鱟試劑法鱟（俗稱馬蹄蟹）是一類屬于節(jié)肢動物門的無脊椎動物，是已有3億年歷史的“活化石”。全世界現(xiàn)存的有3屬5種，我國有東方鱟(即中國鱟)。中國鱟

鱟的血液中僅含一種變形細胞，其裂解物可與細菌內(nèi)毒素發(fā)生特異性強、靈敏度高的凝膠化反應(yīng)。（作用機制見p278）342023/5/41968年后，用超聲波粉碎細胞提取鱟變形細胞溶解物，以制成鱟試劑商品，用以檢測微量的內(nèi)毒素。鱟試劑①用于臨床檢驗診斷；腦脊液中的內(nèi)毒素的檢出等；②注射用藥劑及其生產(chǎn)用水和材料中熱源質(zhì)的檢驗；③用于生物制品及血液制品的檢驗；④食品衛(wèi)生的檢驗等。試管法微板法該法優(yōu)點：靈敏、專一、準確、簡便和快速等。352023/5/4測定內(nèi)毒素的鱟試劑法不同致病菌的毒力和生長、繁殖條件的差別，引起其宿主致病所需的個體數(shù)量也不同。Shigelladysenteriae（痢疾志賀氏菌）為107個/人；Salmonellatyphi的感染劑量為108~109個/人。鼠疫耶爾森氏菌只要幾個細胞即可致病。Salmonellatyphi（傷寒沙門氏菌）肺炎鏈球菌/鼠362023/5/4感染致病宿主與病原菌斗爭的后果37二、傳染的三種結(jié)局2023/5/4

隱性傳染

帶菌狀態(tài)

顯性傳染病原體的致病能力機體的免疫力二、傳染的三種結(jié)局隱性傳染(感染)顯性傳染(感染)帶菌狀態(tài)宿主被病原微生物感染病原毒力低或數(shù)量少宿主免疫力強而無臨床病癥自愈者宿主被病原微生物感染病原毒力強或數(shù)量多宿主免疫力弱而顯臨床病癥傳染病宿主感染病原菌而少量繁殖與宿主免疫相持狀態(tài),無癥狀2023/5/438按發(fā)病時間的長短急性傳染（acuteinfection）慢性傳染（chronicinfection）顯性傳染病程往往長達數(shù)月至數(shù)年，例如，結(jié)核病和麻風病等。顯性傳染2023/5/439顯性傳染的種類與類型發(fā)病部位分兩種感染四類型局部感染(localinfection)全身感染(systemicinfection)毒血癥(toxemia)局部感染產(chǎn)毒入血（白喉、破傷風等癥）菌血癥(bacteremia)菌入血傳各處（傷寒癥的早期）敗血癥(septicemia)血中大量繁殖…（銅綠假單胞菌）膿毒血癥(pyemia)主要臟器化膿性..（金黃色葡萄球菌）2023/5/440內(nèi)毒素血癥與其抗血清治療

G+外毒素血癥 毒血癥

G-

內(nèi)毒素血癥內(nèi)毒素的毒性結(jié)構(gòu)為類脂A 而類脂A與核心多糖為G-共有內(nèi)毒素的抗血清為一種廣譜抗體 若臨床上發(fā)現(xiàn)G-感染患者體內(nèi)已有高效價抗血清就不易發(fā)生休克或死亡，否則需以抗血清治療之2023/5/441一、決定傳染結(jié)局的三大因素（一）病原體（二）宿主的免疫力（三）環(huán)境因素√422023/5/4第二節(jié)宿主的非特異免疫非特異免疫(nonspecificimmunity)：又稱天然免疫(innateimmunity)；是在種系發(fā)育過程中形成的，由先天遺傳而來，防衛(wèi)任何外界異物侵入而不需要特殊的刺激或誘導。天然免疫的組成：432023/5/4正常一、生理屏障（表面屏障、局部屏障、正常菌群）1.表面屏障：1）機械阻擋：健康機體的外表面覆蓋著連續(xù)完整的皮膚和粘膜結(jié)構(gòu)，其外面的角質(zhì)層是堅韌的，不可滲透的，組成了阻擋微生物入侵的有效屏障。442023/5/41.表面屏障：2）特定結(jié)構(gòu)及分泌液－抗菌、抑菌：

各種分泌液（汗腺、皮膚腺分泌物等）、分泌性體液（唾液、淚水、乳汁、鼻涕、痰等）中的殺菌、抑菌成分；

呼吸道、消化道、泌尿生殖道表面粘膜所分泌的粘液的化學性屏障作用。

機體的機械方式如纖毛運動、咳嗽和噴嚏排除異物；

眼淚、唾液和尿液的清洗作用；1）機械阻擋：452023/5/4一、生理屏障（表面屏障、局部屏障、正常菌群）2.局部屏障體內(nèi)的某些部位具有特殊的結(jié)構(gòu)而形成阻擋微生物和大分子異物進入的局部屏障，對保護該器官，維持局部生理環(huán)境恒定有重要作用。

血腦屏障：主要由軟腦膜、脈絡(luò)叢、腦毛細血管壁及其外的腦星形細胞組成，具有細胞間連接緊密、胞飲作用弱的特點，可阻擋病原體及其有毒產(chǎn)物從血液透入腦組織或腦脊液，保護中樞神經(jīng)系統(tǒng)的穩(wěn)定。嬰幼兒因其血腦屏障還未發(fā)育完善，故易患腦膜炎或流行性乙型腦炎等傳染病。血胎屏障：由懷孕母體子宮內(nèi)膜的基蛻膜和胎兒的絨毛膜滋養(yǎng)層細胞共同組成，當它發(fā)育成熟（一般在妊娠3個月）后，能阻擋病原微生物由母體通過胎盤感染胎兒，但并不妨礙母子間的物質(zhì)交換。

一些病毒性（肝炎、HIV等）疾病仍有可能可傳播462023/5/43.正常菌群

人的體表和與外界相通的腔道中存在大量正常菌群，通過在表面部位競爭必要的營養(yǎng)物，或者產(chǎn)生如大腸桿菌素、酸類、脂類等抑制物，而抑制多數(shù)具有疾病潛能的細菌或真菌生長。472023/5/4enamel什么是正常菌群？皮膚牙齒大腸482023/5/4長期存在但在正常條件下不引起疾病的微生物群落防止感染的生理屏障492023/5/450二、細胞因素2023/5/4主要是指體內(nèi)的各種吞噬細胞吞噬病原體及其它各種異物的能力。（參見p283）二、細胞因素1.吞噬細胞(phagocytes)：1）吞噬細胞分為大、小吞噬細胞兩類。具有吞噬入侵的病原微生物等顆粒的能力，并且由于吞噬細胞表面存在補體受體、抗體受體等多種受體，當有相應(yīng)配體存在并與之結(jié)合時，將刺激吞噬細胞活化，大大增強其吞噬殺傷能力。512023/5/42）巨噬細胞還可分泌多種可溶性因子，不但有加強殺菌促進炎癥的作用，還具有免疫調(diào)節(jié)等重要功能。3）巨噬細胞也是抗原提呈細胞，是特異性免疫的重要組成部分。可被1）補體成份、2）抗體、3）輔助性T細胞分泌的細胞因子激活。被激活后吞噬殺傷能力大大增強。吞噬細胞如何被激活？52被激活的巨噬細胞2023/5/41、巨噬細胞：531吞噬細胞與病原體接觸2023/5/43伸出偽足吞入，形成吞噬體4與溶酶體融合為吞噬溶酶體5多種酶類等消化、殺滅病原體6-7不消化的變?yōu)闅報w，被排出胞外吞噬結(jié)果：

完全吞噬：病原體被吞噬后，被殺死并消化分解，不能消化的殘渣排出體外。

不完全吞噬：有些病原體，如結(jié)核桿菌、麻風桿菌、布氏桿菌等胞內(nèi)寄生菌，具有抗吞噬溶酶體形成或抗溶菌酶等逃避機制，在免疫力低下的機體內(nèi)，雖被吞噬，卻不能殺死，反而隨吞噬細胞移動，造成擴散。542023/5/4二、細胞因素2.自然殺傷細胞(Naturalkillercells,NK)：NK細胞屬于淋巴細胞，主要分布于外周血和脾臟，具有不須事先致敏，不須其它輔助細胞或分子的參與而直接殺傷靶細胞的功能。

NK細胞通過釋放穿孔素(perforin)和顆粒酶造成靶細胞死亡，也可通過釋放腫瘤壞死因子(TNF)殺傷靶細胞。某些腫瘤細胞和微生物感染細胞可以成為NK細胞的靶細胞，而且NK細胞活性較其它殺傷細胞更早出現(xiàn)，因此在抗腫瘤抗感染特別是病毒感染中起重要作用。

552023/5/4二、細胞因素三、體液因素正常體液和組織中抵抗病原體的成分：補體（系統(tǒng)）干擾素溶菌酶，等1.補體系統(tǒng)（complementsystem）：

●存在于正常機體體液中的非特異性的殺菌物質(zhì)，包括30余種蛋白質(zhì)成分，

●主要由肝細胞和巨噬細胞產(chǎn)生，

●通常以無活性形式存在于正常血清和體液中。

●通過酶促級聯(lián)反應(yīng)補體激活。（參見p285~296）補體，complement，C，在免疫反應(yīng)中具有能擴大和增強抗體的“補助”功能，因故得名。補體的本質(zhì)一類酶原補體不能單獨與抗原或者抗體結(jié)合562023/5/4（1）溶解、殺傷作用

補體激活后協(xié)助抗體溶解入侵的病原微生物---參與破壞或清除已被抗體結(jié)合的抗原或細胞，發(fā)揮其溶胞作用（cytolysis）。補體的功能（2）免疫吸附作用補體與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合，粘附到吞噬細胞上，促進吞噬作用。（3）趨化作用補體被激活時釋放一種信號，使體內(nèi)的吞噬細胞發(fā)現(xiàn)抗原的部位，并向此方向趨動。572023/5/4補體被激活后發(fā)揮功能3條補體激活途徑：經(jīng)典途徑、旁路途徑（替代途徑）、凝集素途徑582023/5/4補體經(jīng)由經(jīng)典途徑形成攻膜復(fù)合物桿狀細菌被攻膜復(fù)合物攻擊前后的照片激活條件：每個C1q分子必須與兩個以上Ig分子的Fc段結(jié)合；游離的抗體不能激活補體59抗體識別抗原并結(jié)合之；補體成分C1與2個抗體的Fc端結(jié)合2.C1作為酶，激活C2,C4分解，形成C2bC4b復(fù)合物酶，該酶促使C3分解生產(chǎn)C3a，C3b.3.C3b激活C5到C9一系列反應(yīng)，形成膜攻擊復(fù)合物，在細胞表面形成損傷性通道４．胞內(nèi)內(nèi)容物從通道泄露，細胞死亡2023/5/4①經(jīng)典途徑補體的活性形式對病原體具有殺滅作用----引起膜不可逆損傷，導致細胞溶解（革蘭氏陰性菌、具有脂蛋白膜的病毒顆粒、紅細胞和有核細胞）602023/5/4612023/5/4MBL途徑:甘露糖結(jié)合凝集素替代途徑：酵母多糖、LPS等多種微生物及其產(chǎn)物所激活了解補體激活途徑①經(jīng)典途徑：從激活補體系統(tǒng)的C1開始，需Ag-Ab復(fù)合物啟動，

特異性；②旁路途徑：從C3開始，由細菌的細胞壁成分—脂多糖，以及多糖、肽聚糖、磷壁酸等物質(zhì)激活直接激活C3。其不依賴于抗體；③凝集素途徑（MBLpathway）：通過甘露糖結(jié)合凝集素MBL識別甘露聚糖開始，進而依次活化MASP-1、MASP-2、C4、C2、C3。作為非特異性免疫而發(fā)揮效應(yīng)。上述3條途徑具有共同的末端通路，即膜攻擊復(fù)合物的形成及其溶解細胞效應(yīng)。3條：經(jīng)典途徑、旁路途徑（替代途徑）、凝集素途徑622023/5/4補體激活的經(jīng)典途徑---被任何抗原抗體復(fù)合物所激活，起補充抗體的作用-----補體632023/5/4炎癥反應(yīng)（趨化作用）：補體激活的中間產(chǎn)物具有趨化作用--血管透性增加，吞噬細胞趨化運動吞噬作用：免疫粘附反應(yīng)，結(jié)合有補體的靶細胞可促進免疫細胞的吞噬溶胞作用：被激活的補體形成攻膜復(fù)合物642023/5/4補體系統(tǒng)功能：經(jīng)典/替補途徑2.干擾素（interferon，IFN）：由真核細胞（網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞、巨噬細胞、淋巴細胞及體細胞）在病毒等多種誘生劑刺激下產(chǎn)生的一類低分子量糖蛋白，分a、b（I型干擾素）、g（II型干擾素）、λ（Ⅲ

型干擾素）4組。652023/5/4干擾素作用于宿主細胞，使之合成抗病毒蛋白，從而控制病毒蛋白質(zhì)合成，影響病毒的組裝釋放，具有廣譜抗病毒功能；還具有免疫調(diào)節(jié)；抗增殖、誘導分化等

2.干擾素（interferon，IFN）：662023/5/467Mx/PKR/OAS/ISG20是AVP抗病毒蛋白，干擾病毒增殖2023/5/4AVP抗病毒蛋白68干擾素是宿主細胞特異性，非病毒特異性2023/5/43.溶菌酶（lysozyme）：14.7KD不耐熱的堿性蛋白，主要來源于吞噬細胞并可分泌到血清及各種分泌液中，能水解革蘭氏陽性菌胞壁肽聚糖而使細胞裂解。溶菌酶也存在于雞蛋清和某些細菌中，可提純并加工制成各種制劑，用于治療中耳炎、咽喉炎、副鼻竇炎等慢性疾病。此外，體液中還有b-溶介素（

b-Lysin）、轉(zhuǎn)鐵蛋白、血漿銅藍蛋白、C反應(yīng)蛋白等多種能殺菌或抑菌的因素，但直接作用很弱，僅在機體免疫中起輔助作用。

692023/5/4四、炎癥（inflammatory）機體受到有害刺激時所表現(xiàn)的一系列局部和全身性防御應(yīng)答，可以看作是非特異免疫的綜合作用結(jié)果，其作用:清除有害異物、修復(fù)受傷組織，保持自身穩(wěn)定性。（參見p286）有害刺激包括各種理化因素，但以病原微生物感染為主。病原體感染組織和微血管損傷旁路途徑激活補體5-羥色胺多巴胺、凝血因子等趨化因子、過敏毒素血管擴張，毛細血管通透性升高、血流變緩血管內(nèi)細胞和血清成分逸出各種白細胞吞噬殺滅病原體活化的補體攻擊、溶解病原菌其它血漿成分擴大炎癥反應(yīng)2023/5/470a）補體成分C3a、C5a結(jié)合到肥大細胞、嗜堿性粒細胞和血小板上，刺激釋放組胺等活性物質(zhì)，增強血管透性；b）補體成分C5a可作為趨化因子吸引吞噬細胞等遷移到炎癥部位；712023/5/4補體激活的炎癥反應(yīng)內(nèi)、外源性熱原物質(zhì)作用于下丘腦導致發(fā)熱（發(fā)燒）吞噬細胞的溶酶體酶釋放或泄漏會損傷自身組織成分各種毒性產(chǎn)物與活性介質(zhì)將刺激正常機體組織死亡白細胞與破壞裂解的靶細胞共同釀成膿液（化膿）紅、腫、痛、熱和功能障礙（炎癥）722023/5/4四、炎癥（inflammatory）2023/5/473炎癥既是一種病理過程，又是一種防御病原體的積極方式：

動員了大量的吞噬細胞聚集在炎癥部位；血液中的抗菌因子和抗體發(fā)生局部濃縮；死亡宿主細胞的堆積可釋放抗微生物物質(zhì)；炎癥中心氧濃度下降和乳酸積累，進一步抑制病原菌的生長；適度的體溫升高可以加速免疫反應(yīng)的進程；四、炎癥（inflammatory）742023/5/4A組織損傷B血管舒張，滲透性增強C吞噬細胞遷移、吞噬第三節(jié)宿主的特異性免疫一、特異性免疫的一般概念1.特異性免疫（specificimmunity）的概念（見p288）又稱獲得性免疫(acquiredimmunity)或適應(yīng)性免疫（adaptiveimmunity）

機體識別非自身抗原物質(zhì)，并對它產(chǎn)生免疫應(yīng)答。特點：記憶性獲得性高度特異性（包括體液和細胞免疫）752023/5/4免疫應(yīng)答的基本過程2.免疫系統(tǒng)(immunesystem)：免疫系統(tǒng)：（獲得性免疫的物質(zhì)基礎(chǔ)）免疫器官（中樞、周圍）免疫細胞（各種有免疫功能的細胞，如B、T、NK、巨噬細胞、樹突狀細胞等）免疫分子（膜表面免疫分子：BCR，TCR；

體液免疫分子：抗原、抗體、補體和細胞因子）772023/5/4參見p289～3092.免疫系統(tǒng)(immunesystem)：1）免疫器官：中樞免疫器官周圍免疫器官中樞免疫器官：包括骨髓、胸腺等：免疫細胞發(fā)生、分化和成熟的部位周圍免疫器官：包括淋巴結(jié)、脾臟和粘膜相關(guān)淋巴組織：免疫細胞

居住和發(fā)生免疫應(yīng)答的場所。782023/5/4792023/5/42)免疫細胞：泛指一切具有非特異性和特異性免疫功能的細胞。主要包括：淋巴細胞、單核巨噬細胞、粒細胞和肥大細胞、樹突狀細胞802023/5/42.免疫系統(tǒng)(immunesystem)：僅指能接受抗原刺激，并引起特異性免疫應(yīng)答的一群細胞，

主要指T細胞、B細胞，也包括單核細胞和巨噬細胞免疫活性細胞：

T細胞：起源于骨髓，在胸腺中成熟，轉(zhuǎn)移到外周淋巴器官，執(zhí)行細胞免疫功能。

B細胞：起源于骨髓，在骨髓中成熟，轉(zhuǎn)移到外周淋巴器官。當受抗原刺激后，B細胞先轉(zhuǎn)化為漿母細胞，再分化為漿細胞，產(chǎn)生并分泌抗體，執(zhí)行體液免疫功能。812023/5/482胸腺淋巴樣組織（脾、淋巴結(jié)和血液）和淋巴骨髓或胎兒肝臟中樞免疫器官外周免疫器官B細胞負責體液免疫T細胞負責細胞免疫T和B淋巴細胞的來源和功能2023/5/4中樞免疫器官T細胞的分類及特點T細胞的表面標志：1）表面受體：

綿羊紅細胞受體：E花結(jié)實驗，測T細胞數(shù)量及比例；

有絲分裂原受體：被體外有絲分裂原（ConA）刺激，增生；

Fc受體：與抗體的Fc片段結(jié)合；

補體受體：與補體激活后的活性充分結(jié)合；2）表面抗原：即T細胞的抗原受體（T-cellreceptor，TCR）

是T細胞特異性識別抗原的物質(zhì)基礎(chǔ)，但僅識別APC加工后的抗原調(diào)節(jié)型(TR,Tregulator)輔助性T細胞(TH)抑制性T細胞(TS,Tsuppressor)遲發(fā)型超敏T細胞(TD)細胞毒T細胞(Tc,cytotoxicTcells)效應(yīng)型(TE,Teffector)2、根據(jù)功能分：T細胞亞群特異地溶解帶Tc抗原的靶細胞釋放多種淋巴因子，局部引起炎癥T細胞的分類及特點1、根據(jù)表面標志---T細胞表面抗原受體蛋白的分化群或分化簇（Clusterofdifferentiation，CD）：CD4+，CD8+3）免疫分子：膜表面免疫分子體液免疫分子

膜表面分子，主要包括⊙膜表面抗原受體BCR和TCR、⊙主要組織相容性復(fù)合物抗原（MHCⅠ抗原和MHCⅡ抗原）、⊙白細胞分化抗原（CD4orCD8等等）和⊙粘附分子872023/5/42.免疫系統(tǒng)(immunesystem)：2023/5/488⊙主要組織相容性復(fù)合物抗原是機體自身標志性分子，是由主要組織相容性復(fù)合物（MHC）基因群編碼的蛋白，分布在細胞膜上、血液中、體液中；參與T細胞識別相應(yīng)抗原以及免疫應(yīng)答中各類免疫細胞間的相互作用，是識別異己或自身的重要分子基礎(chǔ)?！袯細胞和T細胞表面有各自的特異性膜表面抗原受體BCR和TCR、能識別不同的抗原并與之結(jié)合，啟動特異性免疫。3）免疫分子：膜表面免疫分子2.免疫系統(tǒng)(immunesystem)：892023/5/43）免疫分子：2.免疫系統(tǒng)(immunesystem)：膜表面免疫分子90MHCⅠ抗原：在一切有核細胞表面，功能：遞呈肽抗原8~10aa至Tc細胞上（p296，292）p292,2962023/5/43）免疫分子：2.免疫系統(tǒng)(immunesystem)：91P296,291MHCⅡ抗原：只存在于某些抗原呈遞細胞---APC（巨噬細胞、樹突細胞、B細胞等）的細胞表面，功能：遞呈肽抗原10~20aa至Th細胞，激發(fā)炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答。2023/5/43）免疫分子：2.免疫系統(tǒng)(immunesystem)：92巨噬細胞是APC細胞Th細胞激活B細胞產(chǎn)生抗體（TD抗原）2023/5/42.免疫系統(tǒng)(immunesystem)：③然后Th細胞激活適當?shù)腂細胞，一種可能是B細胞表面有這樣的復(fù)合物，也有微生物抗原的受體。（也可能有直接被微生物抗原激活）93

體液免疫分子：主要包括抗原、抗體、補體和細胞因子細胞因子具有對細胞功能的多方面調(diào)節(jié)作用，其中有些還具有細胞毒性(如腫瘤壞死因子)和抗病毒功能(如干擾素)，直接參與免疫應(yīng)答的效應(yīng)過程。補體和抗體分別是非特異免疫和特異免疫的主要體液成分。重要的免疫分子：抗原和抗體2023/5/43）免疫分子：2.免疫系統(tǒng)(immunesystem)：二、抗原和抗體1.抗原（Antigen，Ag）能誘導機體產(chǎn)生體液抗體和細胞免疫應(yīng)答，并能與抗體和致敏淋巴細胞在體內(nèi)外發(fā)生特異結(jié)合反應(yīng)的物質(zhì)。免疫原性（immunogenicity）：在體內(nèi)激活免疫系統(tǒng)，使其產(chǎn)生抗體和特異效應(yīng)細胞的特性。免疫反應(yīng)性（immunoreactivity）或反應(yīng)原性（reactinogenicity）：能與相對應(yīng)的免疫應(yīng)答產(chǎn)物(抗體及致敏淋巴細胞)發(fā)生特異結(jié)合和反應(yīng)的能力。942023/5/42023/5/495完全抗原（completeantigen）或免疫原（immunogen）：具有免疫原性和反應(yīng)原性的抗原不完全抗原（incompleteantigen）或半抗原（hapten）：只有反應(yīng)原性而沒有免疫原性的抗原1）抗原分類1.抗原（Antigen，Ag）半抗原+載體=完全抗原962023/5/41）抗原分類1.抗原（Antigen，Ag）②

外膜脂多糖（LPS）的結(jié)構(gòu)LPS類脂A是G-細菌致病物質(zhì)——內(nèi)毒素的物質(zhì)基礎(chǔ)（O抗原）A脂多糖B磷脂C外膜蛋白97p298細菌的抗原

2023/5/41）抗原分類1.抗原（Antigen，Ag）根據(jù)是否需要T細胞參與免疫應(yīng)答，抗原分為：T細胞依賴性（TD）抗原：需要APC和Th細胞T細胞非依賴性（TI）抗原：直接刺激B細胞應(yīng)答98參見p288圖9-5，詳見免疫應(yīng)答ppt2023/5/41）抗原分類1.抗原（Antigen，Ag）2）抗原免疫原性的物質(zhì)基礎(chǔ)

異物性；差異越大，免疫原性越強。

分子量大??；4.0×103~1.0×104

化學結(jié)構(gòu)與組成；蛋白質(zhì)＞復(fù)雜多糖＞核酸抗原物質(zhì)上能夠刺激淋巴細胞產(chǎn)生應(yīng)答并與其產(chǎn)物特異反應(yīng)的化學基團。它是抗原特異性的物質(zhì)基礎(chǔ)?？乖鶖y抗原決定簇的數(shù)目稱為抗原價，一般抗原是多價的。

抗原決定簇（antigndeterminant），或表位（epitope）：992023/5/41002023/5/4抗原決定簇2）抗原免疫原性的物質(zhì)基礎(chǔ)2.抗體（antibody，Ab）機體在抗原物質(zhì)刺激下所形成的一類能與抗原特異結(jié)合的血清活性成分稱為抗體，又稱免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）?？贵w是由B細胞合成并分泌的。Y形結(jié)構(gòu)：三個球形區(qū)域構(gòu)成；其分子量約為150KD；1）鏈：兩條相同的重鏈和兩條輕鏈組成每條輕鏈約有220個氨基酸，每條重鏈約有440個氨基酸；1012023/5/42）端：氨基端（N）、羧基端（C）3）區(qū)：可變區(qū)(含有高變區(qū))、恒定區(qū)、鉸鏈區(qū)4）價：抗原結(jié)合價IgG的單體是2價的1022023/5/42.抗體（antibody，Ab）Fab是1價的，F(xiàn)(ab’)2是2價的，F(xiàn)c片段是0價的鉸鏈區(qū)對木瓜蛋白酶、胃蛋白酶敏感1032023/5/42.抗體（antibody，Ab）5）類：免疫球蛋白根據(jù)重鏈血清型分為五類：分別是IgG、IgA、IgM、IgD和IgE6）型：免疫球蛋白根據(jù)輕鏈血清型分為2個型：

κ型和λ型一個抗體分子中只能有兩種輕鏈的一種，但是在個體內(nèi)，可存在有κ鏈和λ鏈的分子1042023/5/42.抗體（antibody，Ab）IgA單體之間以及IgA單體與J鏈之間以二硫鍵相連J鏈分子量約為15kD由漿細胞分泌。含有8個半胱氨酸殘基。通過二硫鍵連接到μ鏈（IgM）或α（IgA）鏈羧基端的半胱氨酸7）體：單體、二聚體、五聚體Ig的單體是2價的，IgA二聚體是4價的1052023/5/42.抗體（antibody，Ab）8）功能區(qū)：H鏈與L鏈可通過鏈內(nèi)二硫鍵折疊成若干球形功能區(qū)（domain），每一功能區(qū)約由110個氨基酸組成。L鏈功能區(qū)分為L鏈可變區(qū)（VL）和L鏈恒定區(qū)（CL）兩功能區(qū)。H鏈功能區(qū)

IgG、IgA和IgD的H鏈各有一個可變區(qū)（VH）和三個恒定區(qū)（CH1、CH2和CH3），共四個功能區(qū)。1062023/5/4IgM和IgE的H鏈各有一個可變區(qū)（VH）和四個恒定區(qū)（CH1、CH2、CH3和CH4），共五個功能區(qū)。2.抗體（antibody，Ab）抗體功能區(qū)的作用（1）VL和VH是與抗原結(jié)合的部位（2）CH2：IgGCH具有補體Clq結(jié)合點，能活化補體的經(jīng)典活化途徑。（3）CH3：IgGCH3具有結(jié)合單核細胞、巨噬細胞、粒細胞、B細胞和NK細胞Fc段受體的功能。（參與Ig介導的生理功能或病理損傷過程）1072023/5/42.抗體（antibody，Ab）抗體分子的抗原性：對異種動物或同種異體來說也是一種抗原物質(zhì)，可激發(fā)特異性免疫，產(chǎn)生相應(yīng)抗體（抗-抗體）血清。1082023/5/42.抗體（antibody，Ab）三、免疫應(yīng)答（一）免疫應(yīng)答的基本過程感應(yīng)階段反應(yīng)階段效應(yīng)階段1.感應(yīng)階段：機體接受抗原刺激的階段抗原巨噬細胞T細胞細胞免疫B細胞體液免疫免疫活性細胞表面有抗原受體，所以能夠識別抗原。每個淋巴細胞表面只有一種抗原受體，只能識別一種抗原，當它們結(jié)合后，抗原刺激細胞增殖、分化而產(chǎn)生免疫應(yīng)答。2023/5/4109T非依賴性體液免疫應(yīng)答（B細胞的激活不依賴T細胞）T細胞非依賴性抗原：抗原上的重復(fù)單元可以交聯(lián)同一B細胞上的幾個抗原受體，直接刺激B細胞應(yīng)答，產(chǎn)生抗體，不需要Th細胞，如莢膜多糖1102023/5/4見p288T細胞依賴性抗原：需要Th細胞介導，刺激B細胞應(yīng)答1112：Th細胞受體與MHC抗原復(fù)合物結(jié)合刺激APC生產(chǎn)IL-13：IL-1刺激助細胞產(chǎn)生IL-2，IL-2刺激T-helpcell增殖4：增殖的T-helpcell再產(chǎn)生ILs，激活兩系統(tǒng)免疫細胞T細胞依賴性體液免疫應(yīng)答（B細胞的激活依賴T細胞）1：APC遞呈2023/5/42.反應(yīng)階段：淋巴細胞識別抗原后，即被活化進行增殖、分化

被特異性抗原激活的T細胞轉(zhuǎn)化為淋巴母細胞，再增殖、分化，成為有免疫效應(yīng)的致敏淋巴細胞?！毎庖?/p>

被特異性抗原激活的B細胞被活化后，轉(zhuǎn)化為漿母細胞，再增殖、分化為漿細胞，分泌抗體。→

體液免疫受抗原刺激的淋巴細胞，在分化過程中，還有一部分細胞在中途停頓下來，不再增殖分化，成為記憶細胞，在體內(nèi)能較長時間存在。當再次受到同種抗原刺激時，能迅速分化增殖成大量致敏淋巴細胞和漿細胞，分別產(chǎn)生大量淋巴因子及抗體。1122023/5/41132023/5/4克隆選擇學說1142023/5/43.效應(yīng)階段：抗原成為被打擊的對象

B細胞介導的體液免疫：體液中的抗體與相應(yīng)的抗原進行特異性結(jié)合，發(fā)揮免疫效應(yīng)的過程

與抗原特異結(jié)合

激活補體

結(jié)合細胞

通過胎盤或粘膜1152023/5/4抗原抗體結(jié)合的保護性免疫機制—體液免疫116①凝集作用：增強吞噬、降低感染單元③補體激活：②調(diào)理作用：抗原被抗體包被后增強吞噬④炎癥反應(yīng)⑤中和作用：阻斷病原物吸附；阻斷毒素活性位點⑥ADCC：抗體依賴型細胞吞噬作用抗體與抗原結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，起到標記外源物的作用2023/5/4①②⑤3.效應(yīng)階段：抗原成為被打擊的對象

B細胞介導的體液免疫：體液中的抗體與相應(yīng)的抗原進行特異性結(jié)合，發(fā)揮免疫效應(yīng)的過程

與抗原特異結(jié)合

激活補體

結(jié)合細胞

通過胎盤或粘膜

T細胞介導的細胞免疫：致敏淋巴細胞通過與相應(yīng)的抗原接觸直接殺傷病原靶細胞，或釋放多種可溶性的生物活性物質(zhì)（淋巴因子），發(fā)揮免疫效應(yīng)。1172023/5/4細胞免疫-細胞毒性T細胞介導1182023/5/4難于通過吞噬、消化處理的大型病原物：抗體結(jié)合，F(xiàn)c段與其他免疫細胞結(jié)合，釋放酶等，裂解病原體細胞免疫-抗體依賴型ADCC1192023/5/41202023/5/4免疫應(yīng)答的基本過程1222023/5/4123第四節(jié)免疫學方法及其應(yīng)用體液免疫的方法細胞免疫的方法現(xiàn)代免疫學方法免疫診斷學免疫學檢測

傳統(tǒng)免疫學方法：抗體-抗原在體外反應(yīng)，又血清學反應(yīng)。124125一、抗原、抗體反應(yīng)的一般規(guī)律（1）特異性（2）可逆性：物理結(jié)合，一定條件下可逆（3）定比性：與抗原決定簇數(shù)目有關(guān)，比例合適，可見反應(yīng)（4）階段性：不可見，可見（5）條件依賴性：pH,溫度，緩沖體系物質(zhì)基礎(chǔ)：抗原決定簇和抗體分子V區(qū)間的各種分子引力和立體構(gòu)象126二、抗原、抗體間的主要反應(yīng)（一）凝集反應(yīng)（agglutination）（二）沉淀反應(yīng)（precipitation）（三）補體結(jié)合試驗（complementfixationtest，CFT

）顆粒性抗原（完整的細菌細胞或紅細胞等）與相應(yīng)的抗體反應(yīng)并出現(xiàn)肉眼可見的凝集團的現(xiàn)象?？扇苄钥乖c其相應(yīng)的抗體反應(yīng)，并出現(xiàn)肉眼可見的沉淀物的現(xiàn)象.

一種有補體參與，并以綿羊紅細胞和溶血素（紅細胞的特異抗體）作指示系統(tǒng)的、靈敏度很高的抗原抗體反應(yīng),有兩個系統(tǒng)和五種成分。（四）中和試驗（neutralizationtest）127二、抗原、抗體間的主要反應(yīng)（一）凝集反應(yīng)（agglutination）顆粒性抗原（完整的細菌細胞或紅細胞等）與相應(yīng)的抗體反應(yīng)并出現(xiàn)肉眼可見的凝集團的現(xiàn)象。凝集原/凝集素凝集反應(yīng)的具體方法128（1）直接法（2）間接法：被動凝集反應(yīng)玻片法：菌種鑒定或定型中，如ABO血型測定試管法：診斷（副）傷寒癥的試管定量試驗定量方法：在一系列試管內(nèi)加入不同稀釋度的等量待檢血清和等量抗原，45～52℃水浴2～4h，4℃冰箱過夜，觀察結(jié)果，血清的最高稀釋度仍有明顯凝集現(xiàn)象即為血清的凝集效價。是將可溶性抗原吸附到適當載體上，使其成為人工的“顆粒性抗原”，從而也會產(chǎn)生凝集反應(yīng)而可用肉眼檢出。反相間接凝集試驗：把抗體吸附于紅細胞等顆粒上，以檢出相應(yīng)的抗原。例如，用于血液中HBsAg（乙型肝炎表面抗原）、甲胎蛋白和鉤端螺旋體的診斷等。凝集反應(yīng)的應(yīng)用：1）在體內(nèi)凝集反應(yīng)能增強吞噬作用；2）在體外凝集反應(yīng)可用于血型檢查和菌種鑒定等。129130（二）沉淀反應(yīng)（precipitation）沉淀原/沉淀素可溶性抗原與其相應(yīng)的抗體反應(yīng)，并出現(xiàn)肉眼可見的沉淀物的現(xiàn)象.沉淀反應(yīng)經(jīng)典方法現(xiàn)代方法環(huán)狀沉淀反應(yīng)（試管）絮狀沉淀反應(yīng)（試管或玻片）單向瓊脂擴散法（定量測定）雙向瓊脂擴散法（分析抗原）對流免疫電泳法（雙瓊擴/電泳）火箭電泳法（單瓊擴/電泳）雙向免疫電泳法（火箭/血清電泳）共同原理：抗原與抗體在半固體凝膠介質(zhì)中作相對方向的自由擴散或在電場中進行電泳，由于反應(yīng)物的分子大小、形狀和電荷的不同，導致兩者的擴散和涌動速度的差異，于是在合適的比例處形成特異的沉淀帶。131雙向免疫沉淀試驗：判斷抗原異同兩孔內(nèi)Ag與Ab相互擴散相遇特異性結(jié)合在比例適當處形成白色Ag-Ab復(fù)合物沉淀線此線是半滲透性屏障可阻止相同Ag或Ab擴散過沉淀線而不同者可通過線132Ag1Ag2Ag1Ab1Ab1Ab2Ab1Ag3Ag1Ag1沉淀線融合相連抗原決定簇完全相同沉淀線交叉而過抗原決定簇完全不同沉淀線部分相連抗原決定簇部分相同補體結(jié)合試驗待檢系統(tǒng)指示系統(tǒng)已知的抗原或抗體

待檢的抗原或抗體綿羊紅細胞溶血素補體（取自豚鼠的新鮮血清）133（三）補體結(jié)合試驗（complementfixationtest，CFT

）二、抗原、抗體間的主要反應(yīng)補體結(jié)合反應(yīng)的基本原理①補體可與任何抗原－抗體復(fù)合物相結(jié)合；②指示系統(tǒng)如遇未被抗原和抗體復(fù)合物所結(jié)合的游離補體，就會出現(xiàn)溶血反應(yīng)。補體結(jié)合試驗的優(yōu)點:靈敏度高；可測未知抗體/抗原。

無論抗原大、小，反應(yīng)是否可見，均可測定。134（四）中和試驗（neutralizationtest）135由特異性地抑制相應(yīng)抗原的生物學活性的反應(yīng)，稱為中和試驗。有生物學活性的抗原包括：

細菌外毒素的毒性

酶的催化活性病毒的感染性等----測定抗體的效價（病毒抗體，中和抗體）免疫標記技術(shù)（immunolabellingtechnique）免疫定位分析（immunolocalization）免疫親和層析（immunoaffinitychromatography）免疫生物傳感器技術(shù)（immunobiosensortechnique）現(xiàn)代免疫技術(shù)—免疫測定法136三、免疫標記技術(shù)（快、廣）137用小分子的標記劑（熒光素、酶、放射性同位素或電子致密物質(zhì)等）標記抗原或抗體，借以提高靈敏度和便于檢出的一類新技術(shù)。1、免疫熒光技術(shù)：用熒光素標記抗體，再與抗原反應(yīng)，適合顯微鏡觀察（異硫氰酸熒光素（FITC）、羅丹明，與Ig中賴氨酸的氨基結(jié)合）138三、免疫標記技術(shù)（快、廣）2、免疫酶技術(shù)：用酶標記抗體或抗抗體以進行抗原、抗體反應(yīng)。原理：酶結(jié)合抗體后仍具有催化活性，催化無色的底物發(fā)生顯色反應(yīng)，以酶標儀檢測。常用的標記酶：辣根過氧化物酶（horseradishperoxidase，HRP）堿性磷酸酶（alkalinephosphatase，AP）、脲酶（urease）、β-D-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）等139酶聯(lián)免疫吸附法酶標記免疫定位雙抗體夾心法（測Ag）間接免疫吸附測定法（測Ab）斑點酶免疫吸附法：固相不溶性有色沉淀物免疫組織化學：組織切片、細胞培養(yǎng)標本免疫印跡（WB）：檢測不同基因表達的微量蛋白質(zhì)抗原或定位免疫酶技術(shù)該法是一種測定待檢血清中是否含特定抗體的方法，其主要步驟為：①加已知抗原；②加待檢血清；③加酶聯(lián)抗抗體；④加該酶的底物，產(chǎn)生可見的有色酶解產(chǎn)物，這就說明待檢血清中有特異性抗體存在。間接免疫吸附測定法間接免疫吸附測定法:140雙抗體法是一種測定待檢標本中是否含抗原的方法，其主要步驟為：①加含已知抗體的抗血清；②待測抗原；③對待測抗原有特異性的酶聯(lián)抗體，使形成“夾心”；④該酶的底物，產(chǎn)生可見的有色酶解產(chǎn)物（黑圓點），這就說明在孔壁上有與已知抗體特異結(jié)合的抗原存在。雙抗體夾心法1411423、免疫電鏡技術(shù)：用電子致密物質(zhì)標記抗體抗原結(jié)合，借電鏡檢出標記復(fù)合物的技術(shù)。特點：電鏡觀察的高特異性、高分辨率；定位生物大分子標記物：辣根過氧化物酶和鐵蛋白等用來檢出細菌、病毒膠體金或金、銀的微粒對抗體標記，進行細胞表面標志定位、免疫細胞亞群計數(shù)或白血病分型等。4、發(fā)光免疫測定法：把化學發(fā)光或生物發(fā)光反應(yīng)與免疫測定結(jié)合?；瘜W發(fā)光劑：熒光醇、異熒光醇、吖啶酯或光澤精生物發(fā)光劑：蟲熒光素等生物制品及其應(yīng)用第五節(jié)143生物制品抗原（疫苗、類毒素）抗體（治療用的血清、診斷用的血清、免疫球蛋白、單克隆抗體等）細胞免疫制劑免疫調(diào)節(jié)劑（immunoregulativepreparation）特異性非特異性：免疫：人工方法把失活或減毒的病原體或其產(chǎn)物接入機體，以刺激免疫系統(tǒng)對相應(yīng)病原物或其有毒產(chǎn)物產(chǎn)生保護性免疫力。144一、人工自動免疫類生物制品----用于預(yù)防二、人工被動免疫類生物制品----用于治療145免疫類生物制品

疫苗是將病原微生物（如細菌、立克次氏體、病毒等）及其代謝產(chǎn)物，經(jīng)過人工減毒、滅活或利用基因工程等方法制成的用于預(yù)防傳染病的自動免疫制劑。

疫苗（vaccine）一、人工自動免疫類生物制品（一）常規(guī)疫苗（二）新型疫苗146147活疫苗（livevaccine）死疫苗（dead

vaccine）如，卡介苗（BacilleCalmette-Guerin，BCG）、鼠疫疫苗、脊髓灰質(zhì)炎疫苗和甲型肝炎疫苗等。如，流行性乙型腦炎、百日咳、傷寒、霍亂、狂犬病、流行性感冒等死疫苗。（一）常規(guī)疫苗1、疫苗148用人工的方法使病原體減毒或從自然界篩選某病原體的無毒株或微毒株所制成的活微生物制劑，又稱減毒活疫苗（attenuatedvaccine）?；钜呙纾╨ivevaccine）優(yōu)點：接種劑量低（進入體內(nèi)繼續(xù)繁殖）；作用持久（3-5年）；可靠。缺點：不易保存；增毒變異。149優(yōu)點：缺點：使用安全；使用劑量大，需多次接種；保存容易。持續(xù)時間短（數(shù)年-1月）；有副作用（發(fā)熱、腫痛等）。150

用理、化因子殺死病原體，但仍保留原有免疫原性的疫苗，稱死疫苗。死疫苗（deadvaccine）1512.類毒素（toxoid）細菌的外毒素經(jīng)甲醛脫毒（0.3％～0.4％）后仍保留原有的免疫原性的預(yù)防用生物制品。

目前應(yīng)用的精制吸附類毒素是將類毒素吸附在明礬或磷酸鋁等佐劑上，以延緩它在體內(nèi)的吸收、延長作用時間和增強免疫效果。常用的類毒素有破傷風類毒素和白喉類毒素等。1523.3.自身疫苗（autovaccine）

又稱自體疫苗，指用從患者自身病灶中分離出來的病原體所制成的死疫苗。

例如由葡萄球菌引起的反復(fù)發(fā)作的慢性化膿性感染或是由大腸桿菌引起的尿路感染等，當用抗生素治療無效時，就可設(shè)法從其自身病灶中分離病原菌，待制成死疫苗并作多次皮下注射后，有可能治愈該病。（二）新型疫苗1531、亞單位疫苗、2、合成肽疫苗3、DNA疫苗4、基因工程活載體疫苗5、轉(zhuǎn)基因植物可食疫苗

亞單位疫苗又稱生物合成亞單位疫苗或重組亞單位疫苗。是指它只含有病原體的一種或幾種抗原，而不含有病原體的其他遺傳信息。亞單位疫苗不含有感染性組分，因而無須滅活，也無致病性。1、亞單位疫苗（subunitvaccine）疫苗名稱有效成分乙肝亞單位疫苗乙型肝炎病毒表面抗原流感亞單位疫苗流感病毒血凝素、神經(jīng)氨酸酶腺病毒亞單位疫苗腺病毒衣殼154一種利用基因工程構(gòu)建重組基因序列，并用它表達的免疫原性較強、無毒性的多肽制成的疫苗。1.1基因工程亞單位例如：乙肝基因工程疫苗、口蹄疫病毒疫苗155Viruslikeparticle，VLP，預(yù)防子宮頸癌的VLP疫苗1562、合成多肽疫苗（polypeptidevaccine）合成肽疫苗分子是由多個B細胞抗原表位和T細胞抗原表位共同組成的，大多需與一個載體骨架分子相耦聯(lián)。例如：乙肝表面抗原（HBsAg）的各種合成多肽、白喉毒素的14肽、流感病毒血凝素的18肽又核酸疫苗或基因疫苗，是一種或多種抗原編碼基因克隆到真核表達載體上，將構(gòu)建的重組質(zhì)粒直接注入到體內(nèi)而激活機體免疫系統(tǒng)，是利用病人自身細胞做“疫苗工廠”。3、DNA疫苗（DNAvaccine）157DNA疫苗的優(yōu)點：易制備、穩(wěn)定性強 同一質(zhì)粒上可插入多個疫苗基因片段免疫期長、安全、穩(wěn)定 為治療癌癥和其他疑難雜癥提供新的可能DNA疫苗的缺點：免疫效率較低：需要較大劑量的DNA1583、DNA疫苗（DNAvaccine）用基因工程的方法對非致病性或致病性的細菌和病毒進行改造，使之攜帶并表達某種特定病原物的抗原決定簇基因，產(chǎn)生免疫原性，成為活體重組疫苗4、基因工程活載體疫苗159最有代表性的例子：豬偽狂犬病毒(PRV)糖蛋白E基因缺失(gE-)及胸腺核苷酸激酶基因突變失活(TK-)株的活疫苗。痘苗病毒、沙門氏菌活載體疫苗

5、轉(zhuǎn)基因植物可食疫苗（一）非特異性免疫治療劑160二、人工被動免疫類生物制品（二）特異性免疫治療劑（一）非特異性免疫治療劑——免疫調(diào)節(jié)劑161轉(zhuǎn)移因子白細胞介素-2胸腺素細胞毒T細胞卡介苗小棒桿菌干擾素二、人工被動免疫類生物制品IL-2是一種由活化T細胞產(chǎn)生的多效能淋巴因子，具有促進T細胞、B細胞和NK細胞的增生、分化，增強效應(yīng)細胞的活性，誘導干擾素的產(chǎn)生，進行免疫調(diào)節(jié)，以及促使TC細胞的前身分化為成熟TC細胞以發(fā)揮抗病毒和抗腫瘤等多種功能。162抗毒素（antitoxin）p321：類毒素免疫動物抗病毒血清：病毒免疫動物抗菌血清：細菌免疫動物二、人工被動免疫類生物制品（二）特異性免疫治療劑----抗體免疫球蛋白制劑：分離或生產(chǎn)丙種球蛋白：主要是IgG和IgM；胎盤球蛋白：主要是IgG單克隆抗體：抗體研究的世代第一代多克隆抗體第二代單克隆抗體第三代基因工程抗體163抗血清是多克隆抗體單克隆抗體（monoclonalantibody，McAb）：由一純系B淋巴細胞克隆經(jīng)分化、增殖后的漿細胞所產(chǎn)生的單一成分、單一特異性的免疫球蛋白分子。164１、165２、單克隆抗體２、單克隆抗體小鼠脾細胞和小鼠骨髓瘤細胞融合，獲得雜交瘤細胞，生成特異性抗體HAT選擇培養(yǎng)基篩選雜交瘤細胞，有三種關(guān)鍵成分：次黃嘌呤（hypoxanthine，H）、氨基蝶呤（aminopterin，A）和胸腺嘧啶核苷（thymidine，T），所以取三者的字頭稱為培養(yǎng)基。氨基蝶呤是葉酸的拮抗劑，可阻斷瘤細胞利用正常途徑合成DNA次黃嘌呤H和胸腺嘧啶核苷R是合成ＤＮＡ補救途徑的底物高等哺乳動物受體細胞的遺傳標記營養(yǎng)缺陷型的哺乳動物受體細胞5-磷酸核糖-1-焦磷酸（PRPP）次黃嘌呤核苷一磷酸（HMP）次黃嘌呤核苷（HR）GMPAMP尿嘧啶核苷一磷酸（UMP）胸腺嘧啶核苷一磷酸（TMP）胸腺嘧啶核苷（TR）嘌呤核苷酸生物合成途徑嘧啶核苷酸生物合成途徑次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（HPRT）（TK）胸腺嘧啶核苷激酶氨基喋呤（AP）氨基喋呤（AP）從頭合成途徑補救合成途徑高等哺乳動物受體細胞的遺傳標記營養(yǎng)缺陷型的哺乳動物受體細胞1、含有胸腺嘧啶核苷激酶（TK）編碼基因缺陷的癌細胞（tk-）不能在含有次黃嘌呤核苷、氨基喋呤、胸腺嘧啶核苷的培養(yǎng)基上（HAT培養(yǎng)基）生長，融合后脾細胞的基因tk能與之遺傳互補。2、含有次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（HPRT）編碼基因缺陷的癌核苷的培養(yǎng)基上（HAT培養(yǎng)基）生長，融合后脾細胞的基因hprt