魚類生理學(xué)實驗2

（優(yōu)選）魚類生理學(xué)實驗現(xiàn)在是1頁\一共有48頁\編輯于星期日實驗一

魚類生理學(xué)實驗常用儀器

實驗基本操作技術(shù)

現(xiàn)在是2頁\一共有48頁\編輯于星期日一、魚類生理學(xué)實驗的地位本課程共20學(xué)時，屬專業(yè)基礎(chǔ)課程成績計算：報告90%，考勤10%二、魚類生理學(xué)實驗方法現(xiàn)在是3頁\一共有48頁\編輯于星期日三、魚類生理學(xué)實驗?zāi)康?.掌握基本實驗方法；2.掌握主要儀器的操作方法；3.掌握生理實驗基本技能；4.獨立分析實驗結(jié)果、寫出規(guī)范的實驗報告。現(xiàn)在是4頁\一共有48頁\編輯于星期日四、魚類生理學(xué)實驗要求1.實驗前：教師和學(xué)生均做好實驗準備工作。2.實驗中：教師簡要講解實驗原理、關(guān)鍵步驟、實驗要求等。學(xué)生領(lǐng)取器材，歸還時復(fù)核，損壞登記，丟失賠償。3.實驗后：歸還實驗用品，動物尸體按指定位置放置，輪流打掃清潔衛(wèi)生；轉(zhuǎn)錄、整理實驗結(jié)果，及時上交實驗報告?，F(xiàn)在是5頁\一共有48頁\編輯于星期日五、常用生理儀器的使用（一）刺激系統(tǒng)1.刺激器2.刺激電極（1）普通電極（2）保護電極（3）Zn-Cu弓（二）引導(dǎo)、換能系統(tǒng)1.壓力換能器2.張力換能器現(xiàn)在是6頁\一共有48頁\編輯于星期日（三）放大系統(tǒng)（信號調(diào)節(jié)）放大器：可將生物電信號放大數(shù)千倍（四）顯示、記錄系統(tǒng)1.記紋鼓2.生理記錄儀常用有二道、四道及八道儀等3.計算機生物信號采集處理系統(tǒng)現(xiàn)在是7頁\一共有48頁\編輯于星期日六、魚類生理實驗基本操作技術(shù)（一）手術(shù)器械1.刀：手術(shù)刀（指壓式、執(zhí)筆式、反挑式）2.剪：外科剪、眼科剪3.鑷：外科鑷、眼科鑷4.鉗：止血鉗5.其他：探針、玻璃分針、蛙板、鋅銅弓、蛙心夾等（二）實驗動物選擇健康動物現(xiàn)在是8頁\一共有48頁\編輯于星期日七、魚類麻醉劑麻醉劑能夠降低魚體新陳代謝，減少對魚體的傷害，提高存活率。（一）麻醉劑的作用原理麻醉劑首先抑制腦的皮質(zhì)（觸覺喪失期），再作用于基底神經(jīng)節(jié)與小腦（興奮期），最后作用于脊髓（麻醉期）。過大劑量或過長的接觸可深及髓質(zhì)，使呼吸與血管舒縮中樞麻痹，最終導(dǎo)致死亡?，F(xiàn)在是9頁\一共有48頁\編輯于星期日（二）魚類麻醉過程的行為特征表1麻醉程度分期及魚類的行為表現(xiàn)注：“±”-正常；“＋”-略失；“－”-喪失。行為表現(xiàn)分期視覺觸覺重壓肌張力平衡感鰓蓋頻率備注第Ⅰ期（輕度鎮(zhèn)靜期）±±＋＋＋正常第Ⅱ期（深度鎮(zhèn)靜期）－－＋＋＋略減少用于一般運輸?shù)冖笃冢ㄆ胶馐д{(diào)期）－－＋＋－增加第Ⅳ期（麻醉期）－－＋－－增加或減少最佳操作時期第Ⅴ期（深度麻醉期）－－－－－慢立即進行復(fù)蘇第Ⅵ期（延髓麻醉期）－－－－－停止無法恢復(fù)，死亡現(xiàn)在是10頁\一共有48頁\編輯于星期日表2復(fù)蘇過程分期及魚類的行為表現(xiàn)復(fù)蘇過程行為表現(xiàn)第Ⅰ期身體靜止，呼吸恢復(fù)，鰓蓋開始振動第Ⅱ期部分平衡及運動恢復(fù)第Ⅲ期平衡完全恢復(fù)，對外界反應(yīng)恢復(fù)第Ⅳ行為完全恢復(fù)正常現(xiàn)在是11頁\一共有48頁\編輯于星期日1.MS-222（間氨基苯甲酸乙酯甲烷磺酸鹽）MS-222易處理、效力迅速、安全性高，被美國國家食品及藥物管理局（FDA）批準為漁用麻醉劑。MS-222可采取浸泡、噴霧和注射等方法使用。MS-222主要在脾臟、肝臟中積聚，過高濃度會引起死亡。MS-222適宜活魚運輸，將魚放在清水中僅1min就能蘇醒，但FDA要求經(jīng)MS-222麻醉的魚，食用必須經(jīng)過21d的休藥期才可銷售；另外，由于其價格昂貴限制了它的應(yīng)用?，F(xiàn)在是12頁\一共有48頁\編輯于星期日2.丁香酚（2-甲氧-4丙烯基酚）全麻劑，是一種植物香料，丁香酚及其代謝物能夠快速從血液和組織中排出，不會誘發(fā)機體產(chǎn)生有毒和突變物質(zhì)，在醫(yī)學(xué)上作為牙科鎮(zhèn)痛劑被廣泛應(yīng)用。丁香酚無殘留期，是合法的水產(chǎn)麻醉劑，能同時滿足安全性、高效性和低成本的要求，已廣泛應(yīng)用于親魚采卵、活魚運輸以及手術(shù)中，對鯉魚、真鯛、鰻魚等有強烈的麻醉作用。與MS-222相比，丁香酚毒性更小，無殘留，但它的入麻時間與復(fù)蘇時間比MS-222更長?，F(xiàn)在是13頁\一共有48頁\編輯于星期日3.C02C02是唯一被允許用來運輸食用魚的化學(xué)麻醉劑。用C02麻醉魚，沒有藥物消退期，食用魚可直接上市銷售，但其麻醉時間和復(fù)蘇時間相對較長，麻醉水溶液使用的濃度范圍很窄，且只對部分魚有麻醉作用，因而應(yīng)用范圍受到限制。如用C02輔助運輸鯉成魚，須分別用高分壓（27.33KPa）和低分壓（13.17KPa）的C02氣流交替刺激鯉成魚，經(jīng)15～30min后魚即進入昏眠狀態(tài)，運輸時間可維持1h左右，且死亡率很低?，F(xiàn)在是14頁\一共有48頁\編輯于星期日也可用C02和02（50：50）的混合氣體輔助運輸活魚。直接往裝有鯽魚和鯉魚的水體中注入氣體，使魚在水中的行為逐漸遲鈍。約25min后，魚便沉到水底“睡眠”，此時可將魚從水中撈出進行運輸，持續(xù)時間可超過30h。當(dāng)魚運到目的地后，再將它們放入水中并注入02，5min后即可蘇醒。現(xiàn)在是15頁\一共有48頁\編輯于星期日實驗二計算機生物信號采集處理系統(tǒng)

一、系統(tǒng)組成與工作原理PCLAB-UE由硬件和軟件兩部分構(gòu)成，硬件主要完成對各種生物電信號與非電生物信號進行調(diào)理、放大，并對信號進行模/數(shù)（A/D）轉(zhuǎn)換，使之進入計算機。軟件主要對已經(jīng)數(shù)字化了的生物信號進行顯示、記錄、存儲、處理及打印輸出，同時對系統(tǒng)各部分進行控制，與操作者進行人機對話?，F(xiàn)在是16頁\一共有48頁\編輯于星期日二、主界面

從上到下依次分為：標題欄、菜單欄、工具欄、狀態(tài)提示欄及采樣窗、控制面板和數(shù)據(jù)窗等其他多個相應(yīng)的子窗口組成?，F(xiàn)在是17頁\一共有48頁\編輯于星期日三、使用方法1.設(shè)置：標準配置，恢復(fù)出廠時的配置2.新建：實驗項目→填寫信息→實驗窗口→開始實驗3.采樣：記錄實驗數(shù)據(jù)4.控制面板參數(shù)調(diào)節(jié)（1）通道功能調(diào)節(jié)（2）刺激參數(shù)調(diào)節(jié)5.文件存儲：F：/文件名：09水養(yǎng)3-呼吸（左2）6.編輯：打開原文件→選擇→復(fù)制→打開“工具”下的“畫圖”→處理文件→復(fù)制圖片→存盤到F：/現(xiàn)在是18頁\一共有48頁\編輯于星期日實驗三影響血液凝固的因素紅細胞脆性的測定血紅蛋白的測定現(xiàn)在是19頁\一共有48頁\編輯于星期日影響血液凝固的因素

1實驗?zāi)康囊阅獣r間為指標，了解影響凝血的因素，加深對生理止血過程的理解。2實驗原理血液凝固是一個酶解激活過程，有多種凝血因子參與。根據(jù)凝血過程起動時凝血因子來源不同，可將凝血分為內(nèi)源性激活途徑和外源性激活途徑?，F(xiàn)在是20頁\一共有48頁\編輯于星期日表1血液凝固及其影響因素試管號實驗處理凝血時間（秒）1空白2液體石蠟2滴3棉花少許4冰水環(huán)境5肝素4滴6草酸鉀4滴7肺組織浸液4滴5號管加CaCl24滴6號管加CaCl24滴現(xiàn)在是21頁\一共有48頁\編輯于星期日【注意事項】l.采血過程要盡量快，以減少計時誤差，對比實驗的采血時間要緊接著進行。2.每支試管口徑大小及采血量要相對一致，不可相差太大。3.判斷凝血的標準要一致，一般以傾斜試管達45°時試管內(nèi)血液不見流動為準。現(xiàn)在是22頁\一共有48頁\編輯于星期日紅細胞脆性的測定1.實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)測定紅細胞滲透脆性的方法，理解細胞外液滲透張力對維持細胞正常形態(tài)與功能的重要性。2.實驗原理正常紅細胞懸浮于等滲的血漿中，若置于高滲溶液內(nèi)，則紅細胞會因失水而皺縮；反之，置于低滲溶液內(nèi)，則水進入紅細胞，使紅細胞膨脹。如環(huán)境滲透壓繼續(xù)下降，紅細胞會因繼續(xù)膨脹而破裂，釋放血紅蛋白，稱之為溶血。紅細胞膜對低滲溶液有一定的抵抗力，這一特征稱為紅細胞的滲透脆性?，F(xiàn)在是23頁\一共有48頁\編輯于星期日3.溶液配置表2不同濃度NaCl溶液配制管號123456789101%NaCl（mL）6.05.04.54.03.53.02.52.01.51.0蒸餾水(mL)4.05.05.56.06.57.07.58.08.59.0NaCl濃度（%）0.600.500.450.400.350.300.250.200.150.10現(xiàn)在是24頁\一共有48頁\編輯于星期日4.結(jié)果觀察①未溶血試管：液體下層有大量紅細胞下沉，上層為無色透明，表明無紅細胞破裂。②不完全溶血試管：液體下層有紅細胞下沉，上層出現(xiàn)透明淡紅色，表明部分紅細胞已經(jīng)破裂，稱為不完全溶血。②完全溶血試管：液體完全變成透明紅色，管底無紅細胞下沉?，F(xiàn)在是25頁\一共有48頁\編輯于星期日【注意事項】1.試管要干凈，加抗凝血的量要一致。2.配制NaCI溶液時應(yīng)力求準確、無誤。3.混勻時，輕輕傾倒1～2次，損少機械震動，避免人為溶血。4.靜置時間足夠，應(yīng)在光線明亮處判定結(jié)果。

現(xiàn)在是26頁\一共有48頁\編輯于星期日血紅蛋白的測定1實驗?zāi)康恼莆毡壬y定動物血紅蛋白含量的方法。2實驗原理血紅蛋白的顏色與氧結(jié)合量有關(guān)，當(dāng)用一定的氧化劑將其氧化時，可使其轉(zhuǎn)變?yōu)榉€(wěn)定、棕色的高鐵血紅蛋白，而且顏色與血紅蛋白的濃度成正比。因此，可與標準色板進行對比，求出血紅蛋白的濃度，即每升血液中含血紅蛋白的克數(shù)（g.L-1）?，F(xiàn)在是27頁\一共有48頁\編輯于星期日3實驗對象：動物種類不限4方法與步驟：使用沙里氏血紅蛋白計測定。比色法是用HCl使血紅蛋白酸化形成粽色的高鐵血紅蛋白，然后和標準比色板進行比色。（1）血紅蛋白計由標準比色箱和測定管組成。測定管兩側(cè)有刻度，一側(cè)為血紅蛋白量的絕對值，以每100mL血液中所含血紅蛋白的克數(shù)表示；另一側(cè)為相對值，以％（即相當(dāng)于正常平均值的百分數(shù)）來表示?，F(xiàn)在是28頁\一共有48頁\編輯于星期日血紅蛋白測定①先檢查血紅蛋白吸管和測定管是否清潔，如不清潔則依次用自來水→蒸餾水→無水乙醇清洗。②將0.1N鹽酸加入測定管中至刻度“2”處。③用血紅蛋白吸管吸取血液至刻度20μL處，用脫脂棉擦凈外壁血液后，立即將血液緩緩吹入測定管的鹽酸中，并利用上層鹽酸將吸管反復(fù)洗滌多次（避免起泡），使吸管中的血液全部進入鹽酸液層中，混勻。④酸化10min后，逐滴加入蒸餾水使液體顏色變淺，邊加邊混勻并與標準比色板比較，至二者顏色相同為止。⑤讀出測定管內(nèi)液體凹面最低處的刻度，即為每100mL血液中血紅蛋白的克數(shù)?，F(xiàn)在是29頁\一共有48頁\編輯于星期日【注意事項】1.吹血入測定管時，不宜用力過猛，避免起泡以影響讀數(shù)。2.稀釋時應(yīng)逐滴加入，防止稀釋過量。3.血液與鹽酸作用時間不能少于10min，否則血紅蛋白不能充分轉(zhuǎn)變?yōu)楦哞F血紅蛋白，使結(jié)果偏低。4.用血紅蛋白吸管吸血時要準確，比色應(yīng)在自然光下進行?，F(xiàn)在是30頁\一共有48頁\編輯于星期日實驗報告的撰寫1實驗原理2材料與方法2.1主要器材2.2主要藥品2.3實驗動物2.4實驗方法2.4.1Hb測定：按魚類生理學(xué)實驗方法進行[1]。2.4.2RBC脆性測定：按魚類生理學(xué)實驗方法進行[1]。2.4.3影響血凝因素：按魚類生理學(xué)實驗方法進行[1]?，F(xiàn)在是31頁\一共有48頁\編輯于星期日3實驗結(jié)果3.1Hb含量及RBC脆性測定表1鳙魚Hb含量及RBC脆性測定分組Hb測定含量（g/L）RBC脆性測定（NaCl%）最小抵抗最大抵抗實驗組對照組750.48～0.400.33～0.21現(xiàn)在是32頁\一共有48頁\編輯于星期日3.2不同因素對血液凝固時間的影響表2血液凝固及其影響因素試管號實驗處理凝血時間（秒）1空白2液體石蠟4滴3棉花少許4冰水環(huán)境5肝素4滴6草酸鉀4滴7肺組織浸液4滴5號管加CaCl24滴6號管加CaCl24滴現(xiàn)在是33頁\一共有48頁\編輯于星期日4分析與探討4.1Hb測定結(jié)果比對照高（或低、或基本一致），從操作過程方面說明原因：……。4.2RBC脆性測定結(jié)果，與對照組相比，最小抵抗高（或低、或基本一致），最大抵抗……，從操作過程方面說明原因：……。4.3凝血時間測定結(jié)果表明，××處理能加快（抑制或不凝）血液凝固，為什么？××管加CaCl2后凝固，為什么？（從凝血機制分析）5參考文獻[1]楊秀平.動物生理學(xué)實驗[M].北京：高等教育出版社，2004，85-99.現(xiàn)在是34頁\一共有48頁\編輯于星期日家兔Hb、RBC脆性測定及影響血凝的因素觀察

1實驗相關(guān)信息及目的2材料2.1動物2.2主要藥品：2.3主要儀器：3實驗方法：簡述或按生理實驗指導(dǎo)書a～b頁介紹方法進行[1]。

4結(jié)果4.1家兔Hb、RBC脆性測定：見表1。分組實驗組對照組Hb（g/L）RBC脆性（NaCL%）最小抵抗最大抵抗80-1500.6～

0.550.4～0.35表1家兔Hb、RBC脆性測定4.2家兔血凝時間的測定：見表2。表2不同因素對家兔血凝時間的影響5討論5.1家兔Hb測定結(jié)果與對照比較，其值偏高，原因：5.2家兔RBC脆性測定結(jié)果與對照比較，其值，原因：5.3家兔血凝時間測定結(jié)果表明，時間長短，原因：參考文獻[1]陳杰.家畜生理學(xué)（第四版）[M].北京：中國家業(yè)出版社，2004，23-34.血凝時間（S）實驗管號處理因素草+Ca++肝素+Ca++對照棉花肝素冰水石蠟草肺組織[2]王力.論文題目[J].中國獸醫(yī)雜志，2006（25）9：12-23.現(xiàn)在是35頁\一共有48頁\編輯于星期日實驗四蛙心收縮的記錄和心肌特性證明

【實驗?zāi)康摹繉W(xué)習(xí)蟾蜍心臟活動描記的方法，觀察心肌收縮的特點。【實驗原理】心肌的有效不應(yīng)期特別長，幾乎占據(jù)了整個收縮期和舒張早期。在此期內(nèi)任何刺激均不能引起心肌收縮。因此心肌不會產(chǎn)生強直收縮，心臟總是有節(jié)律的舒縮。在心臟舒張早期之后，給心肌一次有效刺激，會引起心臟一次期前收縮，緊接著出現(xiàn)一次較長的間歇——代償間歇。現(xiàn)在是36頁\一共有48頁\編輯于星期日【實驗對象】蛙或蟾蜍【實驗藥品】任氏液【實驗方法與步驟】

1.實驗準備（1）在體蛙心制備：取蛙一只，破壞腦、脊髓，仰臥固定于蛙板上。左手持鑷子提起胸骨后端的皮膚剪一小口，然后向左、右兩側(cè)鎖骨外側(cè)剪開皮膚、肌肉，剪斷左右鎖骨，使創(chuàng)口呈一倒三角形，充分暴露心臟部位，并用眼科剪剪開心包膜，徹底暴露心臟?，F(xiàn)在是37頁\一共有48頁\編輯于星期日（2）觀察心臟的結(jié)構(gòu)識別蛙心臟。自心臟腹面可觀察到心室、心房、動脈球和主動脈。用玻璃分針向前翻轉(zhuǎn)蛙心，暴露心臟背面可觀察到靜脈竇和心房。（3）連接實驗裝置將蛙心夾上的細線與張力換能器相連，讓心臟搏動信號傳入計算機生物信號采集處理系統(tǒng)。將銅絲與心室接觸良好并固定穩(wěn)妥后，與刺激器的輸出連接?，F(xiàn)在是38頁\一共有48頁\編輯于星期日2.實驗項目（1）描記正常曲線，觀察曲線的收縮相和舒張相。（2）用中等強度的單個閾上刺激在收縮期刺激心室，有何變化？為什么？（3）用中等強度的單個閾上刺激在舒張中后期刺激心室，有何變化？為什么？（4）心肌“全或無”反應(yīng)：用絲線在靜脈竇與心房之間作一結(jié)扎，心臟停止跳動。然后給予閾下及不同強度的閾上刺激，觀察蛙心收縮強度的變化?，F(xiàn)在是39頁\一共有48頁\編輯于星期日【結(jié)果及分析】1.心縮期單個閾上刺激，心臟有何變化，為什么？2.心舒期單個閾上刺激，心臟有何變化，為什么？3.第一結(jié)扎后，心房、心室活動有何變化，為什么？4.閾下刺激心縮曲線幅度有何變化，為什么？5.不同強度的閾上刺激，心縮曲線幅度有何變化，為什么？現(xiàn)在是40頁\一共有48頁\編輯于星期日【注意事項】1.破壞蛙的大腦和脊髓要徹底。2.經(jīng)常給心臟滴加任氏液，以保持心臟適宜的環(huán)境。3.張力傳感器與蛙心夾之間的絲線應(yīng)保持適宜的緊張度。4