生化檢驗項目校準

生化檢驗項目校準

瀘州市人民醫(yī)院

校準：在規(guī)定條件下，為確定測量儀器(或測量系統(tǒng))所指示的量值，或?qū)嵨锪烤?或參考物質(zhì))所代表的值，與對應的由標準所復現(xiàn)的量值之間關系的一組操作。儀器的性能驗證：零點漂移波長準確度及重復性雜散光吸光度正確度吸光度重復性吸光度線性誤差交叉污染率溫度正確度比色杯間差距檢測項目校準

參考方法決定性方法

廠家方法

常規(guī)分析

一級標準品二級標準品校準品校準目的是準確度的傳遞溯源校準項目校準主要涉及內(nèi)容校準方法的選擇校準品的選擇及準備校準頻率的選擇校準后的驗證問題討論

校準方法的選擇K因子法（+-）：理論k值：根據(jù)理論摩爾消光系數(shù)來計算。通常試劑生產(chǎn)廠家給出的k值都屬于。實測K值：是根據(jù)儀器實測的摩爾消光系數(shù)來設置K值校準k值：是根據(jù)儀器當前的實際狀態(tài)，試劑的穩(wěn)定性等通過校準品校準后得到的K值。K因數(shù)法適用的分析方法有一點終點法，兩點終點法，兩點速率法，多點速率法。線性校準（Linear）：其反應為線性（直線），一般只需一個校準品進行校準。非線性法：又稱非直線性校準法非線性法包括logit-log法、指數(shù)函數(shù)法、樣條函數(shù)法等方法Logit-log3p對數(shù)函數(shù)法中的一種，適用于濃度升高而吸光度表現(xiàn)為收束的工作曲線。P表示參數(shù)之意，由3個參數(shù)（S1Abs、k、a）參與計算。S1Abs表示試劑空白，K表示校準所得斜率，a表示近似常數(shù)。logit-log4p對數(shù)函數(shù)法中的一種，適用于濃度升高而吸光度表現(xiàn)為收束的工作曲線。

樣條函數(shù)法（spline）：是將每一標準液測定的吸光度連接起來（點對點），形成一個完整曲線，即為曲線擬合。該曲線擬合優(yōu)于折線法校準。logit-logXp與樣條函數(shù)法拋物線型(左下圖)，則多考慮用logic方法擬合。曲線類型不確定時，或校準曲線類型如圖12-37所示的S型非線性校準類型，則多考慮Splain方法擬合。校準品的選擇及準備校準品：含有已知量的欲測物，用以校準該測定方法的數(shù)值，它與該方法、試劑、儀器是相關聯(lián)的。校準品的作用是為了減少或消除儀器、試劑等造成的系統(tǒng)性誤差。最好為人血清基質(zhì)，減少基質(zhì)效應儀器、試劑、校準品的配套性如有可能校準品應溯源到參考方法或參考物質(zhì)要有明確的不確定度冰凍產(chǎn)品的處理步驟：從-70℃或-20℃冰箱中取出樣本，置室溫（18-25）℃下平衡，使之完全融化，溫和混勻。凍干產(chǎn)品的復溶步驟：從冰箱中取出樣本，置室溫（18-25）℃下平衡，并放置在水平桌面上，輕拍小瓶，以確保所有物質(zhì)已沉淀在該小瓶底部，小心拔開膠塞，采用已校準的移液管沿瓶壁緩慢精確加入規(guī)定體積的去離子水，壓膠塞到原位后置室溫下使之完全溶解，溫和混勻。應按廠家提供說明書操作。校準品濃度水平及個數(shù)選擇校準至少包含你需要報告結果的內(nèi)容/范圍。校準范圍也定義為分析方法的工作范圍。個數(shù)要與儀器要求相匹配案例分析一、現(xiàn)象：某品牌HCY試劑（儀器：雅培C8000），校準無法通過，出現(xiàn)“校準失敗”的報警。試劑參數(shù)為：Primarywavelength：340nm；

Secondarywavelength：700nm；

Mainreadtime：31-33；

Blankreadtime：26-28；

Samplevolume：10ul；

R1reagentvolume：185ul；

R2reagentvolume：50ul；Calibrationmethod：Spline；

校準品個數(shù)設置：3；

濃度分別設置為：0、10、33umol/L。

二、了解情況：

查看校準結果，發(fā)現(xiàn)其每個濃度的吸光度實際在該儀器上已做出測定，分別為：0：-0.002710：-0.034433：-0.0738，但參與最終結果計算的CalFactor（校準因數(shù)）卻顯示為0，說明該儀器并未通過所測定的吸光度進行曲線擬合，故出現(xiàn)“校準失敗”報警。三、處理：分別對10umol/L、33umol/L的校準品進行對倍稀釋，得到5umol/L、16.5umol/L濃度的校準；把參數(shù)中校準品個數(shù)修改為：5；濃度設置修改為0、5、10、16.5、33umol/L。仍采用Spline定標模式重新進行校準，后校準順利通過，結果如下：

0umol/L5umol/L10umol/L16.5umol/L33umol/LCalFactor

-87.2-213.5-279.6-365.3吸光度-0.0032-0.0195-0.0366-0.0558-0.07445、之后校準顯示通過，質(zhì)控在控，證明校準成功四、分析：全自動生化分析儀的校準模式設置中均有線性或非線性的選擇。當我們對其進行設置時，會根據(jù)試劑盒的反應原理選擇合適的校準模式。通常情況下，常規(guī)的生化項目我們會選擇線性模式校準，而免疫比濁項目我們會選擇非線性模式校準。若選擇線性校準，往往我們只需帶一個校準品進行兩點校準即可。若選擇非線性校準時，我們會帶多個濃度校準品進行多點校準。5.不同的儀器，在做非線性校準時所要求的校準品個數(shù)是不同的。例如：日立、奧林巴斯等儀器，要求至少帶三個濃度的校準品即可進行非線性擬合；貝克曼、東芝等儀器，則要求至少帶四個濃度的校準品才進行非線性擬合。五、總結：

我們在進行新項目實驗前，除了選擇正確的校準模式外，還要根據(jù)該儀器的性能特點，選擇符合要求的校準品個數(shù)，以保證實驗的順利進行。校準頻率的選擇1.1實驗室用房選址：BSL-2級實驗室在選址和建筑物間距方面并沒有特殊要求，也不要求有單獨的建筑物，不過BSL-2級實驗在布局上還是強調(diào)要與辦公用房和其它公共用房隔離，盡量自成一區(qū)或設在建筑物的一端，遠離公共活動場所，屏蔽電磁，震動。一般選擇2-3樓層為宜，通風，寬敞明亮，靠近整棟建筑污物電梯，附近有廁所。理想狀況下進行每批次檢測前都應進行試劑改變了種類或更換了批號儀器進行了大的維護維修或更換了重要的配件，如光源燈、濾光片等室內(nèi)質(zhì)控出現(xiàn)了趨勢性變化或飄移（系統(tǒng)性誤差）；或者超出了實驗室規(guī)定接受限，采取了一般性糾正措施后，不能識別和糾正問題時廠家試劑有明確校準時限規(guī)定的校準后的驗證校準后用校準品當樣本進行測試，看其值與定值之間的差異測定室內(nèi)質(zhì)控，看結果是否在控。參加室間質(zhì)評或返測已知濃度的室間質(zhì)評樣本。記錄每次校準結果，與之前的校正結果進行比較。問題討論定值質(zhì)控品是否可以替