紫外可見分光光度法的基本原理

藥品分析技術(shù)課程第1課時(shí)-第7章節(jié)基本原理

一.概述

二.郎伯-比爾定律

基于物質(zhì)光化學(xué)性質(zhì)而建立起來(lái)的分析方法稱之為光化學(xué)分析法。分為:光譜分析法和非光譜分析法。光譜分析法是指在光（或其它能量）的作用下，通過(guò)測(cè)量物質(zhì)產(chǎn)生的發(fā)射光、吸收光或散射光的波長(zhǎng)和強(qiáng)度來(lái)進(jìn)行分析的方法。

第1課時(shí)-第7章節(jié)一、概述1.光的基本性質(zhì)

光是一種電磁波，具有波粒二象性。光的波動(dòng)性可用波長(zhǎng)、頻率、光速c、波數(shù)（cm-1）等參數(shù)來(lái)描述：

=c；波數(shù)=1/=/c

光是由光子流組成，光子的能量：

E=h=hc/

（Planck常數(shù)：h=6.626×10-34J×S)第1課時(shí)-第7章節(jié)光的波長(zhǎng)越短（頻率越高），其能量越大白光（太陽(yáng)光）：由各種單色光組成的復(fù)合光單色光：?jiǎn)尾ㄩL(zhǎng)的光（由具有相同能量的光子組成）紫外光區(qū)：近紫外區(qū)10-200nm（真空紫外區(qū)）遠(yuǎn)紫外區(qū)200-400nm

可見光區(qū)：400-750nm第1課時(shí)-第7章節(jié)第1課時(shí)-第7章節(jié)

紫外-可見分光光度法是利用物質(zhì)對(duì)光的吸收光譜，對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性分析或定量分析的方法。按所吸收光的波長(zhǎng)區(qū)域不同，分為紫外分光光度法和可見分光光度法，合稱為紫外-可見分光光度法。2、紫外-可見分光光度法第1課時(shí)-第7章節(jié)

當(dāng)一束光照射到某種物質(zhì)的固態(tài)物或溶液上時(shí)，一部分光會(huì)被吸收或被反射，不同的物質(zhì)對(duì)于照射它們的光束的吸收程度是不同的，對(duì)某個(gè)波長(zhǎng)的光吸收強(qiáng)烈，對(duì)另外波長(zhǎng)的光吸收很小或不吸收，我們把這種現(xiàn)象稱為光的選擇吸收。

一切物質(zhì)都會(huì)對(duì)可見和不可見光中的某些波長(zhǎng)的光進(jìn)行吸收。

3.物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收及吸收曲線第1課時(shí)-第7章節(jié)

物質(zhì)的結(jié)構(gòu)決定了物質(zhì)在吸收光時(shí)只能吸收某些特定波長(zhǎng)的光。我們可以利用測(cè)量物質(zhì)對(duì)某種波長(zhǎng)的光的吸收來(lái)了解物質(zhì)的結(jié)構(gòu)特性。用經(jīng)過(guò)分光后的不同波長(zhǎng)的光依次透過(guò)該物質(zhì)，通過(guò)測(cè)量物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的光的吸收程度（吸光度），以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作圖，就可以得到該物質(zhì)在測(cè)量波長(zhǎng)范圍內(nèi)的吸收曲線。這種曲線體現(xiàn)了物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的光的吸收能力，稱為吸收光譜。入射光透射光檢測(cè)器吸收光譜

不同波長(zhǎng)光

二.朗伯—比耳定律

布格(Bouguer)和朗伯(Lambert)先后于1729年和1760年闡明了光的吸收程度和吸收層厚度的關(guān)系。A∝b

1852年比耳(Beer)又提出了光的吸收程度和吸收物濃度之間也具有類似的關(guān)系。A∝c

二者的結(jié)合稱為朗伯—比耳定律，其數(shù)學(xué)表達(dá)式為：

第1課時(shí)-第7章節(jié)透光度(透光率)T透過(guò)度T:描述入射光透過(guò)溶液的程度:

T=It/I0吸光度A與透光度T的關(guān)系:

A＝－lgT

朗伯—比耳定律是吸光光度法的理論基礎(chǔ)和定量測(cè)定的依據(jù)。應(yīng)用于各種光度法的吸收測(cè)量；摩爾吸光系數(shù)ε在數(shù)值上等于濃度為1mol/L、液層厚度為1cm時(shí)該溶液在某一波長(zhǎng)下的吸光度；吸光系數(shù)a(L·g-1·cm-1）相當(dāng)于濃度為1g/L、液層厚度為1cm時(shí)該溶液在某一波長(zhǎng)下的吸光度。第1課時(shí)-第7章節(jié)第1課時(shí)-第7章節(jié)Lambert–Beer光吸收定律：當(dāng)一束平行