mNGS 二代測序檢測全流程

mNGS檢測全流程---予果生物讓

病

原

診

斷

更

簡

單01

樣本采集和運輸02

樣本接收目錄CONTENT03

樣本預(yù)處理和核酸提取04

文庫構(gòu)建和文庫質(zhì)控05

Pooling和上機(jī)S06

下機(jī)數(shù)據(jù)分析07

報告出具和結(jié)果解讀1PARTONE樣

本

采

集

和

運

輸樣本采集和運輸積液（關(guān)節(jié)積液、心包積液、等），膿液，尿液血液、腦脊液樣本類型有哪些？痰液、肺泡灌洗液、咽拭子組織、人工關(guān)節(jié)假體、燒傷創(chuàng)面感染標(biāo)本、防污染毛刷刷頭、人工靜脈導(dǎo)管、心臟瓣膜眼部樣本（房水、玻璃體、分泌物），胸水，腹水其他樣本（陰道拭子、精液、羊水）樣本采集和運輸2PARTTWO樣

本

接

收樣本接收接收拆箱異常反饋、記錄錄入系統(tǒng)樣本拍照、接收樣本核對3PARTTHREE樣本預(yù)處理和核酸提取樣本預(yù)處理和核酸提取樣本預(yù)處理和核酸提取柱純化法/過柱法加蛋白酶K，BufferAL等轉(zhuǎn)移離心吸附洗滌洗脫降解蛋白、聚合DNA樣本吸附DNA吸附DNA純化DNAcfDNA4PARTFOUR文

庫

構(gòu)

建

和

文

庫

質(zhì)

控文庫構(gòu)建和文庫質(zhì)控末端修復(fù)接頭連接磁珠純化PCR富集磁珠純化文庫構(gòu)建和文庫質(zhì)控※末端修復(fù)接頭連接※PCR富集※p

cfDNA平末端化p

5'磷酸化p

3'端加dA反應(yīng)體系試劑純化后洗脫液HiFiPCRMasterMix，2×

25μLPrimerMixTotal反應(yīng)體系試劑DNAEnd-polishingBuffer10×End-polishingEnzymeMix

2μL體積23.5μL反應(yīng)體系試劑體積38μL5μL體積50μL2μL末端修復(fù)反應(yīng)液Adaptor1.5μL50μLUltralowInputLigationBuffer,

4×

25μLRNase-FreeWaterTotal5μL50μL溫度時間

循環(huán)數(shù)UltralowInputLigaseRNase-FreeWateTotal5μL18μL100μL98℃

2min198℃60℃72℃20s30s30s溫度時間1525℃

30min65℃

15min溫度時間72℃

1min10℃1125℃10min∞文庫構(gòu)建和文庫質(zhì)控5PARTFIVEPooling和上機(jī)Pooling和上機(jī)p

Pooling：低濃度文庫高濃度文庫一定體積一定體積子Pooling1子Pooling2Pooling后的文庫需要經(jīng)過變性、中和、稀釋等步驟，形成最終可上機(jī)測序的終溶液。（主）PoolingPooling和上機(jī)邊合成邊測序-SBS(SequencingbySynthesis)6PARTSIX下

機(jī)

數(shù)

據(jù)

分

析下機(jī)數(shù)據(jù)分析生信分析云端算法引擎大容量數(shù)據(jù)庫數(shù)