PBS緩沖液的配制方法

PBS緩沖液配方不管是免疫組化，還是細(xì)胞培養(yǎng)中，常用到PBS緩沖液，下面是我們實驗室的配方，供大家參考。我們實驗室的配方：A液：0.1mol/L磷酸二氫鉀：磷酸二氫鉀（KH2PO4，MW136.09）1.361g，加雙蒸水至100ml。B液：0.1mol/L磷酸氫二鈉：酸酸氫二鈉（Na2HPO4.2H2O，MW177.99）1.78g，加雙蒸水至100ml?；蛘咚崴釟涠c（Na2HPO4.12H2O，MW358.14）3.58g，加雙蒸水至100ml。pH－－A液（ml）－－B液（ml）5.60－－9.50－－0.255.91－－9.00－－1.006.24－－8.00－－2.006.47－－7.00－－3.006.64－－6.00－－4.006.81－－5.00－－5.006.98－－4.00－－6.007.17－－3.00－－7.007.38－－2.00－－8.007.73－－1.00－－9.008.04－－0.50－－9.50一般免疫組化用PBS都只包含Na2HPO4?12H2O（磷酸氫二鈉）

NaH2PO4?2H2O（磷酸二氫鈉）Nacl

用于細(xì)胞培養(yǎng)的PBS需含有氯化鉀稱取8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,溶于800ml蒸餾水中，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4，最后加蒸餾水定容至1L即可0.01MPBS緩沖液

稱取NaCl

8g，KCl

0.2g，Na2HPO4?12H2O

3.63g,

KH2PO4

0.24g，溶于900ml雙蒸水中，用鹽酸調(diào)pH值至7.4，加水定容至1L，常溫保存?zhèn)溆谩BS是最普遍不過的實驗室緩沖液，但其配方各異。以下是我的總結(jié)：

母液的配制：

0.2M

Na2HPO4：稱取

71.6g

Na2HPO4-12H2O，溶于

1000ml

水

0.2M

NaH2PO4：稱取

31.2g

NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml

水

各種濃度PB(pH=7.4)的配制：

先配

0.2M

PB

(pH=7.4，100ml)：取19ml

0.2mol/L的

NaH2PO4，

81ml

0.2mol/L

的

Na2HPO4,

即可。

然后

只需將0.2M

PB

(pH=7.4)按相應(yīng)比例適當(dāng)稀釋

即可，如：溶解。（3）0.2mol/LpH7.4的PB的配制：取19ml0.2mol/L的NaH2PO4和81ml0.2mol/L的Na2HPO4·12H2O,充分混合即為0.2mol/L的PB（pH約為7.4～7.5）。若pH偏高或偏低，可通過改變二者的比例來加以調(diào)整，室溫保存即可。0.2mol/L磷酸鹽緩沖液（pH5.7～8.0）pH

0.2mol/LNaH2PO4(ml)

0.2mol/LNa2HPO4(ml)5.7

93.5

6.55.8

92.0

8.05.9

90.0

10.06.0

87.7

12.36.1

85.0

15.06.2

81.5

18.56.3

77.5

22.56.4

73.5

26.56.5

68.5

31.56.6

62.5

37.56.7

56.5

43.56.8

51.0

49.06.9

45.0

55.07.0

39.0

61.07.1

33.0

67.07.2

28.0

72.07.3

23.0

67.07.4

19.0

81.07.5

16.0

84.07.6

13.0

87.07.7

10.5

89.57.8

8.5

91.57.9

7.0

93.08.0

5.3

94.7關(guān)于磷酸緩沖溶液的知識，我在網(wǎng)上搜索了好多帖子，但是還是不能確定正確的答案?，F(xiàn)在把他們鏈接過來，希望有高手們參與討論，我會把最終的正確解答整理出來，提供給大家。

PBS可以為三種溶液的英文縮寫，分別是

1.磷酸鹽緩沖溶液（phosphatebufferedsolution）、

2.磷酸鹽緩沖鹽水（phosphatebufferedsaline）及

3.磷酸鹽緩沖鈉（phosphatebufferedsodium），

其配制方法不同，pH值不同，發(fā)揮的生物學(xué)作用亦不完全相同。

如無特殊說明，生物學(xué)上常用的PBS是中性磷酸鹽緩沖溶液（phosphatebufferedsolution）。

無鈣鎂離子磷酸緩沖鹽水（PBS）

（0.15Mol/LPH7.2）

NaCl8.0g

KCl0.2g

Na2HPO41.15g

（如為Na2HPO4·12H2O，則為2.89g）

KH2PO40.2g

將上述試劑依次溶于1000ml去離子水中，完全溶解后，115℃高壓滅菌10min~15min，存在4℃冰箱中備用。此液可用于配制和稀釋細(xì)胞分散劑以及洗滌細(xì)胞培養(yǎng)物。我們用的都是第二種

問題1：磷酸鹽緩沖鹽水（phosphatebufferedsodium），為什么用第三種或第一種呢:

這么多年以來我都以為PBS就是磷酸鹽緩沖溶液，其他兩種說法的英語名稱常見到，不過我一直都以為他們是差不多的東西。不同的漢語翻譯倒是第一次聽說。

我們公司用的PBS有很多種，抗體組用的中和PBS配方就比較簡單，沒有K+離子，只起到緩沖PH的作用；Na2HPO4+KH2PO4按照不同比例混勻，可以得到不同PH的緩沖液，用于不同目的，這個在分子生物學(xué)中用得很多；用于活細(xì)胞或者細(xì)菌處理的，為了保持滲透壓，會加入其他的溶液，最常見的就是NaCl和KCl調(diào)節(jié)離子濃度。以上是個人的理解，歡迎批評。:

問題2：既然抗體組的PBS是起到緩沖PH的作用，那加入80G的NACL作用是什么？需要平衡滲透壓嗎？還有加入K離子的是不是因為細(xì)胞上NA-K泵的原因啊，血清里面又沒有細(xì)胞，何來NA-K泵一說??？

我覺得之所以這么配，其實就是對血清中緩沖環(huán)境的一種模擬罷了，血清里面又沒有細(xì)胞，何來NA-K泵一說啊？我沒說血清撒。。。。。。我們用的又沒加K，我是說加了K的的

問題3：不加NACL會怎么樣啊？多省錢啊

在中和磷酸鹽緩沖液中，NaCl的主要作用應(yīng)當(dāng)是保持一定的離子濃度，以維持抗體的活性。在離子濃度過高或過低的情