ISO9分析中質(zhì)量控制

ISO15189實驗室認可準則

---介紹15189：2007文件部分報告人：付紅偉醫(yī)大總醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗科目前一頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點5.技術(shù)要求5.1人員5.2設(shè)施和環(huán)境條件5.3實驗室的設(shè)備5.4檢驗前程序5.5檢驗程序5.6檢驗程序的質(zhì)量保證5.7檢驗后程序5.8結(jié)果報告2目前二頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點5.5檢驗程序?qū)嶒炇覒?yīng)當(dāng)制定符合實驗室工作要求和檢驗要求的檢驗程序，包括選擇和分取樣品程序。權(quán)威教科書、期刊發(fā)表的檢驗程序，或國際、國內(nèi)及地區(qū)性指南，是首選檢驗程序。如果采用實驗室內(nèi)部程序，必須對其預(yù)期應(yīng)用進行適當(dāng)驗證并完全文件化。要點：檢驗程序的要求3目前三頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點只有經(jīng)過驗證確認適合預(yù)期應(yīng)用的檢驗程序，實驗室才能采用。驗證應(yīng)當(dāng)涵蓋所有應(yīng)用范圍的要求。實驗室應(yīng)當(dāng)記錄驗證結(jié)果和采用的程序。在應(yīng)用于醫(yī)學(xué)檢驗之前，選擇的檢驗方法和程序應(yīng)當(dāng)經(jīng)過驗證并得到滿意的驗證結(jié)果。實驗室主任或其指定人員應(yīng)當(dāng)對檢驗程序進行最初的和定期的審核。審核通常每年進行一次。審核應(yīng)當(dāng)記錄。理解要點：檢驗程序的確認，臨床驗證，定期評審45.5檢驗程序目前四頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點5.5檢驗程序所有程序應(yīng)當(dāng)采用實驗室人員能夠普遍理解的語種文件化且置放在工作區(qū)域以方便相關(guān)人員使用。卡片式文件或類似的概述關(guān)鍵信息的系統(tǒng)，允許作為一種在工作臺面使用的快速參考資料，但是需有完整的手冊作為參考?？ㄆ轿募蝾愃葡到y(tǒng)應(yīng)當(dāng)與完整手冊相符合。作業(yè)程序應(yīng)當(dāng)全部或部分以制造商的使用說明書為基礎(chǔ)，但是，說明書需要符合和；且采用實驗室人員能夠普遍理解的語言編寫的實驗室操作程序。任何改動都需要進行審核并記錄。檢驗試劑盒的每一個涉及主要試劑或作業(yè)程序的新改變，都應(yīng)當(dāng)對其性能和是否適用預(yù)期用途進行驗證。5目前五頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點5.5檢驗程序具體文件內(nèi)容-1除了文件控制識別外，作業(yè)程序文件應(yīng)當(dāng)包括以下內(nèi)容：檢驗?zāi)康?；檢驗程序的原理；性能指標（如線性、精密度、以測量不確定度表示的準確度、檢測極限、測量區(qū)間、測量可靠性、敏感性和特異性等）；標本種類（如血漿、血清、尿液）；容器與添加物；所需的儀器和試劑；校正程序（測量的可追溯性）；程序步驟；6目前六頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點5.5檢驗程序具體文件內(nèi)容-2質(zhì)量控制程序；干擾（例如脂血、溶血、高膽紅素血）和交叉反應(yīng)；計算結(jié)果的原理，包括測量不確定度；生物參考區(qū)間；患者檢驗結(jié)果的可報告區(qū)間；警戒值／臨界值；實驗室的結(jié)果解釋；安全防護；潛在的誤差來源。7目前七頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點試劑性能指標評價準確度驗證精密度驗證線性范圍驗證參考范圍制定干擾實驗驗證8目前八頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點準確度驗證—回收實驗準確度評估資料是評價檢測系統(tǒng)有效性的重要依據(jù)。定量檢測方法的回收實驗是評估準確度的方法之一，用于評估定量檢測方法準確測定加入純分析物的能力，結(jié)果用回收率表示。910斤蘋果2斤蘋果？目前九頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點10回收實驗具體步驟目前十頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點回收實驗數(shù)據(jù)處理及結(jié)果報告11目前十一頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點實例分析-112

基礎(chǔ)樣本

基礎(chǔ)樣本+C.fas

基礎(chǔ)樣本+高值質(zhì)控

項目第一次第二次第三次均值第一次第二次第三次均值第一次第二次第三次均值TP68706868.6773737373.0073727573.33ALB42444242.6747474546.3346464746.33GLO26262626.0026262826.6727262827.00ALT18191818.3328282828.0030313130.67AST21212020.6732323131.6737363636.33ALP102103102102.33125125126125.33124123125124.00GGT16171716.6727272827.3340414140.67LDH155156156155.67183181182182.00184185186185.00測定濃度加入濃度回收濃度回收率基本樣本分析樣本1分析樣本2樣本制備：基本樣本：自制基質(zhì)血清0.9mL+超純凈水0.1mL分析樣本1：自制基質(zhì)血清0.9mL+C.FAS定標液0.1mL分析樣本2：自制基質(zhì)血清0.9mL+高值指控血清0.1mL分別對上述三種樣本連續(xù)測定三次求均值，并將數(shù)值填入下述表格目前十二頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點13

生化分析儀準確度驗證試驗

項目：血糖GLU單位：mmol/L驗證方法：回收實驗儀器Roche7600試劑批號658081標準液批號161454操作者付紅偉審核者王倩

測定濃度加入濃度回收濃度回收率%

基礎(chǔ)樣本4.67

分析樣本15.971.111.30117.12

分析樣本26.231.501.56104.00

平均回收率%110.56

比例系統(tǒng)誤差%10.56

TEa/25%

可接受性判斷：比例系統(tǒng)誤差大于CLIA88允許總誤差的1/2

日期：2012-08-06

生化分析儀準確度驗證試驗

項目：谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT單位：U/L驗證方法：回收實驗儀器Roche7600試劑批號660856標準液批號161454操作者付紅偉審核者王倩

測定濃度加入濃度回收濃度回收率%

基礎(chǔ)樣本18.33

分析樣本1288.679.67111.53

分析樣本230.6711.712.34105.47

平均回收率%108.50

比例系統(tǒng)誤差%8.50

TEa/210%

可接受性判斷：比例系統(tǒng)誤差小于CLIA88允許總誤差的1/2

驗證日期：2012-08-06

結(jié)果報告目前十三頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點精密度驗證—參考EP5-A文件批內(nèi)精密度評估

對低值質(zhì)控血清同一天內(nèi)連續(xù)測定20次，排除離散點后求其均值、SD及CV值與試劑說明書比較，看與試劑盒標注的批內(nèi)精密度是否一致；14項目第1次第2次第3次-----第19次第20次均值標準差SD95%置信區(qū)間CV%廠商聲稱CV%結(jié)論TP666666-----656666.100.790.590.991.190.50精密度欠佳ALB485050-----494950.101.170.871.462.330.90精密度欠佳ALT414141-----403940.600.820.621.032.022.90精密度良好AST686968-----696967.900.790.590.991.162.10精密度良好ALP868686-----858686.350.990.741.241.140.70精密度欠佳GGT444444-----434343.150.670.500.841.550.50精密度欠佳LDH165162164-----163162162.601.230.921.540.761.30精密度良好TBIL23.520.220.6-----20.420.420.590.730.550.923.573.10精密度良好DBIL14.414.214.6-----1414.214.190.380.290.482.700.85精密度欠佳目前十四頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點批間精密度驗證15方法：參考EP5-A文件，對質(zhì)控血清連續(xù)測定5日，每日測定2批次，每批次重復(fù)測定8次，得到80個數(shù)據(jù)，排除離散點后，求其均值、SD及CV值與試劑說明書比較，看與試劑盒標注的批間精密度是否一致；項目日期/批次批1-1批1-2批1-8批2-1批2-2批2-7批2-8均值標準差SD95%置信區(qū)間CV%廠商聲明CV%結(jié)論ALT第一天4142404040414240.730.810.611.011.993.7精密度良好

第二天41414042404139

第三天40404042404041

第四天42414140414142

第五天41414041404241項目日期/批次批1-1批1-2批1-8批2-1批2-2批2-7批2-8均值標準差SD95%置信區(qū)間CV%廠商聲明CV%結(jié)論AST第一天6463656564646466.461.811.362.262.723.2精密度良好

第二天68696767686967

第三天68676868676668

第四天65656564636564

第五天68696868676668項目日期/批次批1-1批1-2批1-8批2-1批2-2批2-7批2-8均值標準差SD95%置信區(qū)間CV%廠商聲明CV%結(jié)論ALP第一天8888888888878787.341.050.791.321.210.5精密度欠佳

第二天86868888878786

第三天85858888888786

第四天88878889888787

第五天85868887878988目前十五頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點線性范圍驗證---參考EP6-A16樣本號123456低值血清mL1.000.800.600.400.200.00高值血清mL0.000.200.400.600.801.00目前十六頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點實例分析-117方法：參考EP6-A文件要求，選取高濃度和低濃度人血清標本，通過倍比稀釋的方式得到6份梯度濃度待測樣本，每樣本重復(fù)測定4次，進行該項目的線性范圍評估項目總膽固醇TC日期2010/8/7

儀器Roche7600試劑批號標準液批號操作者付紅偉審核者王倩

標本號測定1測定2測定3測定4均值

19.179.039.069.109.09

28.027.957.978.007.99

36.456.656.506.606.55

45.445.275.315.415.36

54.034.044.033.984.02

62.502.462.472.492.48

結(jié)論：本實驗室TC檢測系統(tǒng)在常用醫(yī)學(xué)決定水平區(qū)間內(nèi)具有很好的線性，與試劑盒聲明相符。目前十七頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點5.5檢驗程序檢驗中的每一個步驟的性能指標，應(yīng)當(dāng)與該作業(yè)程序的預(yù)期用途相關(guān)。

理解要點：

性能參數(shù)應(yīng)滿足和符合所規(guī)定的要求為前提18目前十八頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點5.5檢驗程序生物參考區(qū)間應(yīng)當(dāng)定期審核。如果實驗室有理由相信某個特定的生物參考區(qū)間不再適合參考人群，應(yīng)當(dāng)進行調(diào)查研究，如果需要的話，采取糾正措施。當(dāng)實驗室改變檢驗程序或檢驗前程序時，適當(dāng)時，同樣應(yīng)當(dāng)審核生物參考區(qū)間。理解要點：必須驗證；必須定期審核19目前十九頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點5.5檢驗程序?qū)嶒炇覒?yīng)當(dāng)提供現(xiàn)有檢驗項目清單，包括相關(guān)的性能指標，以供申請檢驗者索取。

理解要點：檢驗程序文件可供服務(wù)對象使用（知情權(quán)）20目前二十頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點5.5檢驗程序如果實驗室計劃改變某個檢驗程序，其結(jié)果或結(jié)果解釋可能明顯不同，在引入改變之前，應(yīng)當(dāng)以書面方式向申請檢驗者解釋含義。

理解要點：書面告知；解釋其含義21目前二十一頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點5.6檢驗程序的質(zhì)量保證實驗室應(yīng)當(dāng)設(shè)計內(nèi)部質(zhì)量控制系統(tǒng)，以確認達到預(yù)期的檢驗結(jié)果質(zhì)量。重要的是，質(zhì)量控制系統(tǒng)向?qū)嶒炇胰藛T提供清楚、易懂的信息，作為技術(shù)和醫(yī)學(xué)決定的基礎(chǔ)。理解要點：實驗室應(yīng)建立內(nèi)部質(zhì)量控制體系22目前二十二頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點5.6檢驗程序的質(zhì)量保證實驗室應(yīng)確定檢驗結(jié)果的不確定度。應(yīng)當(dāng)考慮測量不確定度的重要影響因素，如標本采集、標本制備、標本分部收集、校準、參考品、加樣量、儀器使用、環(huán)境條件、標本條件以及操作者更換等。理解要點：

建立不確定度評價的程序文件

嘗試進行關(guān)鍵項目的不確定度評價23目前二十三頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點5.6檢驗程序的質(zhì)量保證實驗室應(yīng)當(dāng)設(shè)計并執(zhí)行測量系統(tǒng)校準計劃和可信度驗證計劃，以確保檢驗結(jié)果可以追溯到SI單位，或以一個自然常數(shù)或其他規(guī)定的標準作為參考。如果以上都無法實現(xiàn)，應(yīng)當(dāng)采用其他方法驗證可信度，包括但不限于以下方法：參加適當(dāng)?shù)氖议g比對計劃；使用適當(dāng)?shù)摹⒁驯蛔C明指示物質(zhì)特性的參考品；以其他程序檢查或校準；采用比率法或相互測量法采用相關(guān)專業(yè)制定、規(guī)定、證明的、一致認可的標準或方法；當(dāng)可追溯性由供應(yīng)商或制造商提供時，將試劑、程序或檢驗系統(tǒng)相關(guān)的可追溯性聲明文件化。24目前二十四頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點25目前二十五頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點26目前二十六頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點27目前二十七頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點5.6檢驗程序的質(zhì)量保證實驗室應(yīng)當(dāng)參加室間質(zhì)量比對。實驗室管理層應(yīng)當(dāng)監(jiān)控外部質(zhì)量評價的結(jié)果，當(dāng)質(zhì)量控制標準沒有實現(xiàn)時，應(yīng)當(dāng)參加糾正措施的實施。室間比對計劃應(yīng)當(dāng)真正符合ISO/IECGuide43-1要求。外部質(zhì)量評價計劃應(yīng)當(dāng)盡可能地提供模擬患者標本的臨床相關(guān)的質(zhì)控物，具有驗證整個檢驗過程（包括檢驗前和檢驗后程序）的效果。理解要點：實驗室應(yīng)參加室間質(zhì)評28目前二十八頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點5.6檢驗程序的質(zhì)量保證如果不能參加正式的室間質(zhì)量比對計劃，實驗室應(yīng)當(dāng)建立確定（而非評估）檢驗程序可接受性的機制。如果可行，該機制應(yīng)當(dāng)應(yīng)用外部的質(zhì)控物，例如與其他實驗室交換標本。實驗室管理層應(yīng)當(dāng)監(jiān)控室間比對機制的結(jié)果，參加糾正措施的實施和記錄。理解要點：無室間質(zhì)評，應(yīng)與其他實驗室進行比對29目前二十九頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點5.6檢驗程序的質(zhì)量保證對于采用不同程序或儀器或在不同地點進行的檢驗，應(yīng)當(dāng)明確規(guī)定驗證結(jié)果可比性的機制。應(yīng)當(dāng)根據(jù)檢驗程序或儀器的特性明確規(guī)定驗證的周期并實施驗證。理解要點：

同一檢測項目的不同檢測系統(tǒng)的比對

比對周期30目前三十頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點5.6檢驗程序的質(zhì)量保證對于參加室間比對的結(jié)果，實驗室應(yīng)當(dāng)文件化、記錄，適當(dāng)時，及時采取措施。對于發(fā)現(xiàn)的問題和缺陷，應(yīng)當(dāng)采取措施并保持記錄。理解要點：

實驗室應(yīng)文件化并記錄比對活動

對存在的問題要求采取措施并記錄31目前三十一頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點方法學(xué)比對具體流程321儀器熟悉階段2.質(zhì)量控制分析3方法比對試驗3.1實驗樣本的選擇3.2實驗樣本的測定4初步數(shù)據(jù)檢查4.1方法內(nèi)雙份數(shù)據(jù)的離群值檢驗4.2數(shù)據(jù)作圖4.3線性相關(guān)的目測檢查4.4方法間離群值的目測檢查4.5X值合適范圍的檢驗5線性回歸5.1計算5.2分散均勻性的目測檢查6計算預(yù)期偏倚及其可信區(qū)間6.1線性回歸法（當(dāng)數(shù)據(jù)通過合適范圍及均勻離散度檢查時）6.2當(dāng)數(shù)據(jù)未通過合適范圍及均勻離散度檢查時，使用分部偏倚法6.3當(dāng)數(shù)據(jù)有不恒定（可變的）精密度時，用分部殘差計算預(yù)期偏倚7結(jié)果解釋以及內(nèi)部性能標準比較目前三十二頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點33工作組建議在至少5個工作日內(nèi)最少要分析完40個患者樣本。增加測定樣本數(shù)及測定天數(shù)，可以提高實驗的可靠性及有效性。應(yīng)盡可能使至少50％樣本的測定結(jié)果處于實驗室的參考區(qū)間之外。如果從一個患者得不到所需的樣本量，可以將兩個（但不能多于兩個）病史相同，被測物濃度也大致相近的患者標本混合使用，成為“微混合樣本”。3.1實驗樣本的選擇目前三十三頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點34分別用兩種方法對待測標本進行雙份重復(fù)測定。指定第一次測定順序，按反向順序檢測第二次（雙份）。即：樣品可以按下述順序進行，1、2、3、4、5、6、7、8和8、7、6、5、4、3、2、1。對于全部標本，均應(yīng)在兩小時內(nèi)測定完畢。如果可能，最好使用測定當(dāng)天的標本。如果使用儲存標本，儲存方式必須能確保樣本的穩(wěn)定性，以滿足參比方法和待評方法的要求。3.2實驗樣本的測定目前三十四頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點354初步數(shù)據(jù)檢查4.1方法內(nèi)雙份數(shù)據(jù)的離群值檢驗計算每個方法雙份測定的差值絕對值的均值，

取各方法的平均絕對差值的四倍作為每個方法的“可接受”限如果刪除的數(shù)據(jù)超出一個，則需擴大調(diào)查范圍，查找出現(xiàn)偏差的原因。如果能夠找到問題所在并能追蹤到引起偏差的樣品，則應(yīng)替換這些樣品，且將問題記錄在案。判斷有目前三十五頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點4.2數(shù)據(jù)作圖36圖1：重復(fù)檢測均值散點圖（試驗方法均值對比較方法均值）4.3線性相關(guān)目測檢測4.4方法間離群值目測檢測目前三十六頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點374.2數(shù)據(jù)作圖4.4方法間離群值目測檢測圖2：均值差異與二種方法的均值的偏倚圖（試驗方法均值—比較方法均值）對（試驗方法均值+比較方法均值）/25.2分散均勻性的目測檢查目前三十七頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點一般情況下，如果r≥0.975（或r2≥0.95），則可認為X值取值范圍合適。如果根據(jù)測定數(shù)據(jù)算出的r能滿足上述要求，則可認為X的誤差已被數(shù)據(jù)范圍所抵消。這時就可用簡單的直線回歸來估計斜率和截距。如果r2≤0.95，則必須分析更多的樣品以擴大數(shù)據(jù)濃度分布范圍，然后再重新分析全部數(shù)據(jù)。如果X的取值范圍無法擴大，則可采用6.2節(jié)中描述的分部偏倚法代替回歸方法來評價平均偏倚。384.2X值合適范圍的檢驗?zāi)壳叭隧揬總數(shù)四十六頁\編于十四點395線性回歸分析平均Y對平均X值斜率b和截距a的計算公式如下：可用以下方程表示：其中：目前三十九頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點6計算預(yù)期偏倚及其可信區(qū)間6.1線性回歸法（當(dāng)數(shù)據(jù)通過適合范圍和均勻離散度的檢查）40在給定的醫(yī)學(xué)決定水平Xc處的預(yù)期偏倚（Bc）的估計值，按以下公式計算：Bc的95%可信區(qū)間（在Xc處的真正偏倚）按以下公式計算：目前四十頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點6.2當(dāng)數(shù)據(jù)未通過適合范圍檢查時，使用分部個別差異法計算平均偏倚（分部偏倚法）6.3當(dāng)數(shù)據(jù)有非恒定精密度時，用分部殘差計算預(yù)期偏倚（分部殘差法）416計算預(yù)期偏倚及其可信區(qū)間目前四十一頁\總數(shù)四十六頁\編于十四點7.結(jié)果的解釋以及與內(nèi)部性能標準的比較根據(jù)數(shù)據(jù)的檢查結(jié)果，使用簡單的線性回歸方法估計在醫(yī)學(xué)決定水平處的預(yù)期偏倚