艾滋病及HIV的檢測培訓

關于艾滋病及HIV的檢測培訓第1頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月一、HIV的基本生物學特性屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬。HIV在病毒分類中的定位是慢病毒屬中的人類免疫缺陷病毒組HIV分為HIV-1和HIV-2二個型別。HIV-1共有M組（主要亞型組）、O亞型組和N亞型組。M組又分為A、B、C、D、F1、F2、G、H、J、K共11個非重組亞型，另外近年來發(fā)現(xiàn)多個流行重組型（circulatingrecombinantform,CRFs），包括CRF01-CRF14。第2頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月HIV的分群和亞型A（A1A2）BCDF1F2GHJKCRFCRF01-AECRF02-AGCRF03-ABCRF04-CPXCRF05-DFCRF06-CPXCRF07-BCCRF08-BCCRF09-CPXCRF10-CDCRF11-CPXCRF12-BFCRF13-CPXCRF14-BGABCDEFGHIV-1

M組N組O組（O1-O3）HIV-2

第3頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月HIV病毒體呈球形，直徑約100~120nm。電鏡下成熟的HIV-1呈現(xiàn)一致密的圓柱狀核心和一個病毒包膜。病毒核心由病毒RNA、核心結(jié)構蛋白和病毒復制所必須的酶類組成。HIV的RNA為兩條相同拷貝（完全同源）的正股RNA鏈。第4頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月HIV對環(huán)境中物理因素和化學因素抵抗力均較弱，比HBV的抵抗力低得多。對HBV有效的消毒和滅活方法均適用于HIV。HIV對熱很敏感，對低溫耐受性強于高溫。因此，可以用高溫滅活病毒，在低溫條件下保存病毒。在室溫（22~27℃）液體環(huán)境下HIV可存活15天以上；經(jīng)56℃處理30min可使HIV在體外對人的T淋巴細胞失去感染性，但不能完全滅活血清中的HIV；經(jīng)過60℃3小時或80℃30min作用后不能檢出感染性病毒。第5頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月HIV耐堿不耐酸HIV對化學因素很敏感室溫中0.5%次氯酸鈉或75%酒精只需1min即不能檢出RT酶活性；0.2%次氯酸鈉、0.1%家用漂白粉、0.1%戊二醛等5min即可滅活HIV；30%酒精溶液5min、20%酒精溶液10min可滅活HIV。對紫外線不敏感，離開人體可存活數(shù)小時至數(shù)天。第6頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月二、艾滋病的傳播途徑艾滋病毒存在于艾滋病感染者和艾滋病人的血液、精液、陰道－宮頸分泌物、乳汁、唾液、淚液、尿液、腦脊液、汗液、糞便、耳分泌液、支氣管分泌液等人體的分泌液中，其中以血液、精液、陰道－宮頸分泌液艾滋病毒的含量最高，筑成了艾滋病傳染性很強的物質(zhì)基礎。艾滋病流行至今二十多年的科學研究證明，艾滋病在人群中的傳播只有三條‘路’：性途徑、血液途徑和母嬰傳播。第7頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月母親是怎樣將艾滋病病毒傳給自己的孩子的？母嬰傳播一般指感染艾滋病毒的母親傳給其胎兒或嬰兒的傳播方式。這種傳播可能發(fā)生在懷孕、分娩和哺乳期。研究報告指出，HIV感染母親所產(chǎn)的新生兒有11％～60％可能發(fā)生感染。母嬰傳播有以下幾個階段：（1）宮內(nèi)感染：是胎兒生前在母親子宮中通過損傷胎盤進入胎兒體內(nèi)，母親的胎盤、羊水中存在大量的艾滋病病毒，可直接從胎兒嬌嫩的、未發(fā)育完全的皮膚中進入胎兒體內(nèi)。第8頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月（2）生產(chǎn)過程中感染生產(chǎn)過程中由于胎兒通過產(chǎn)道受到反復撞擊和擠壓，血液和羊水等分泌物可被胎兒吸入體內(nèi)，也可通過皮膚損傷進入體內(nèi)。研究發(fā)現(xiàn)，可在剛出生胎兒胃引流物中查出艾滋病病毒。所有這些發(fā)現(xiàn)表明，母嬰傳播可能有高達50％的新生兒在出生時通過與母親生殖器官分泌液或血液接觸而發(fā)生感染。（3）哺乳期感染：科學家研究了100多例非洲感染HIV的哺乳女性，發(fā)現(xiàn)有58％的乳汁樣品中可檢測HIV，有時乳汁中感染性病毒數(shù)量很高，乳汁中病毒可通過嬰兒免疫不健全或損傷的口腔粘膜、消化道進入體內(nèi)。母嬰傳播中有30％是在哺乳期感染的。對感染HIV懷孕母親用抗艾滋病毒預防服藥治療能降低母嬰傳播的感染率已得到肯定。第9頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月三、HIV感染在體內(nèi)的動態(tài)分期病毒進入體內(nèi)在2天內(nèi)到達局部淋巴結(jié)，5天內(nèi)進入血液循環(huán)。其結(jié)果是導致全身性播散，到達腦部和淋巴組織。從暴露于HIV到出現(xiàn)癥狀的時間一般是2-4周在急性感染的數(shù)天內(nèi)，出現(xiàn)高水平的病毒復制，血漿中可檢出107/ml個病毒RNA分子。CD8+細胞數(shù)上升，伴有短暫的CD4+細胞計數(shù)下降。HIV抗體出現(xiàn)后，病毒血癥減輕，血漿中HIVRNA的滴度下降，急性HIV感染的癥狀消失.1、原發(fā)HIV感染期第10頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月通常4-12周發(fā)生HIV抗體陽轉(zhuǎn)。從HIV感染到產(chǎn)生抗體（或血請抗體陽轉(zhuǎn)）稱為“窗口期”，>95%的HIV感染都發(fā)生在感染后的5.8個月內(nèi)，故一般認為窗口期為3個月；高度懷疑者可追蹤至6個月?！?/p>

HIV感染早期”定義：血清抗體陽轉(zhuǎn)和HIV感染6個月之間的階段。6個月時病毒載量達到一個“固定值”，早期抗病毒治療可降至很低，如果不進行抗病毒治療，幾年內(nèi)不會有很大變化。此固定值和預后有很大關系。早期治療的目標之一是重新設定固定值，使固定值保持較低水平。第11頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月病人無臨床癥狀，體檢時無異常，少數(shù)可查到“持續(xù)性全身性淋巴腺病”（PGL），腫大的淋巴結(jié)至少發(fā)生在兩處,且不是腹股溝淋巴結(jié)。細胞內(nèi)的病毒大部分處于潛伏狀態(tài)，所以淋巴結(jié)中病毒濃度很高。淋巴組織是病毒的主要藏身處，外周血中的病毒載量相對不高。2、無癥狀感染期(潛伏期)第12頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月3、艾滋病前期（“ARC”或“B期”）

艾滋病前期癥狀包括被HIV感染后更常見更嚴重的癥狀（包括鵝口瘡、口腔毛狀黏膜白斑病、發(fā)熱、體重減輕等），但還不是艾滋病的典型癥狀。

4、艾滋病期

當患者出現(xiàn)典型癥狀時，CD4+細胞計數(shù)通常降至200/ul以下，血和淋巴結(jié)中的HIV又上升到相當高的水平，同時抗病毒CD8+細胞反應減弱。在艾滋病期病人血液中的HIV群體又一次變得相當均一，通常是細胞融合（S1）表型為主，與T細胞嗜性有關。第13頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月四、HIV感染的三種臨床結(jié)局和長期存活的相關因素：1.典型進展者在感染早期，其免疫功能未受損害，但在8~10年內(nèi)免疫控制能力逐漸下降，最后發(fā)展成艾滋病。2.快速進展者病程快速進展，CD4+細胞計數(shù)在2-5年內(nèi)迅速下降,抗HIV的抗體水平很低，而且該抗體中和HIV的能力也較差。快速進展者最顯著的特征：HIV感染后一直維持較高的病毒載量，而且分離的HIV有均一性。第14頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月3.長期存活者（又稱長期不進展者）這些感染者能維持健康狀態(tài)12年以上，并且CD4+細胞計數(shù)維持正常。長期存活者在感染者中的比例一般在8~10%，目前最長已達20多年。第15頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月3、尿液HIV抗體檢測標本：除血液外還可用唾液檢測HIV（Orasure，如Salivacard），尿液檢測HIV。1996年美國FDA首次批準HIV-1尿檢EIA試劑，我國也正在研制。主要適用于靜脈注射毒品（IDUs）人群和其它高危人群的大面積流行病學調(diào)查。陽性標本仍需采血做確認試驗才能確定HIV抗體陽性。另外還有家庭用HIV檢測（HomeAccessSystem）。

第16頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月樣品篩查檢測選用篩查試劑陽性反應陰性反應復

測陰性報告原有試劑+另一種篩查試劑一陰一陽均陰性反應均陽性反應送確認陰性報告4、HIV抗體篩查的流程圖第17頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月1、免疫印跡式驗（WB）：WB是將HIV病毒蛋白用SDS電泳，把分子量大小不等的蛋白帶分離開來，然后再把這些已經(jīng)分離的不同蛋白帶電轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上。將此膜切割成條裝，每一條硝酸纖維膜上均含有經(jīng)電泳分離過的HIV病毒抗原。待檢血清樣品1：100稀釋，加到放置硝酸纖維膜的槽內(nèi)，恒溫震蕩，充分接觸反應。血清中抗-HIV抗體，與膜條上的抗原帶相結(jié)合。加入抗人-IgG酶結(jié)合物和底物后，即可使抗原-抗體結(jié)合帶呈現(xiàn)紫褐色。根據(jù)出現(xiàn)條帶情況判定結(jié)果。（二）HIV抗體確認試驗第18頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月表3不同國際組織HIV抗體免疫印跡（WB）試驗陽性結(jié)果判斷標準國際組織對HIV-1對HIV-2美國CDCgp41、gp120或gp160和P24中的任何兩條帶無美國FDAP24和P31，再加gp41或gp120/gp160之中任意一條無世界衛(wèi)生組織（WHO）要有兩條Env帶，無論有無Gag或Pol帶（也可能存在）要有兩條Env帶，無論有無Gag帶或Pol帶逆轉(zhuǎn)錄病毒血清學標準委員會P24或P31中的一條，并有一條Env帶無美國紅十字會Gag、Pol和Env帶各有一條無德國PaulEhrlich研究院有兩條帶，其中一條必須是Env帶無

第19頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月我國判定標準：（1）HIV-1抗體陽性（+） 有下列任何一項者，即可確認：①至少有二條env帶（gp41和gp160或gp120）出現(xiàn)，gp41和gp160，或gp41和gp120，或gp41和gp160/gp120。②至少有一條env帶和p24帶同時出現(xiàn)。（2）HIV-2抗體血清學陽性反應（+）符合WHO標準（有二條env帶，有或無gag帶），符合試劑盒標準，方可判為血清學陽性反應。（3）HIV抗體陰性（-） 無HIV抗體特異帶出現(xiàn)，或僅有p17。（4）HIV抗體不確定（±）：出現(xiàn)HIV特異性抗體帶，但帶型不足以確認陽性者。第20頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月2、免疫熒光試驗（IFA）

將HIV感染的淋巴細胞涂于玻片上，經(jīng)固定后即為試驗用抗原片。待檢血清中的抗-HIV抗體與抗原結(jié)合后再與熒光素標記的抗人免疫球蛋白結(jié)合，在熒光顯微鏡下可見到含草綠色熒光的細胞和多核巨細胞（胞漿熒光）。目前國內(nèi)尚無商品化產(chǎn)品，僅在少數(shù)有條件的實驗室使用。第21頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月（一）孕期孕期產(chǎn)前檢查：應在知情同意的情況下常規(guī)做HIV抗體篩查試驗。最好選擇ELISA方法（無條件地區(qū)可用快速檢測）篩查。二、HIV檢測方法的選擇第22頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月圖3孕產(chǎn)期保健服務流程（適用于有充分的時間進行復測和確認試驗者）對產(chǎn)前檢查的孕婦進行預防艾滋病母嬰傳播咨詢，獲得知情同意，采集樣本HIV抗體篩查試驗第1種篩查試劑（高敏感性）陽性陰性第2種篩查試劑（高特異性）陽性陰性第3種篩查試劑（高特異性）不確定陽性陰性提供疑似陽性咨詢，建議做確認試驗確認試驗提供咨詢隨訪，建議3個月后再次做確認試驗出具“HIV抗體陽性”報告提供咨詢、指導、隨訪出具“HIV抗體陰性”報告提供咨詢、指導、常規(guī)孕期保健第23頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）產(chǎn)時

孕期未接受HIV抗體檢測的產(chǎn)婦：

首先應進行咨詢，取得知情同意以后，可同時用兩種不同的快速檢測試劑進行HIV抗體篩查試驗。

根據(jù)檢測結(jié)果給予不同的咨詢和干預。若產(chǎn)婦已臨產(chǎn)，且只能用一種快速檢測試劑檢測，結(jié)果陽性，即視為HIV抗體陽性處理。第24頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月圖4產(chǎn)時保健服務流程（適用于沒有充分的時間進行復測和確認試驗者）對產(chǎn)前未接受HIV抗體檢測的即將/或臨產(chǎn)產(chǎn)婦進行預防艾滋病母嬰傳播咨詢，獲得知情同意，采集樣本同時用兩種不同的快速檢測試劑進行HIV抗體篩查試驗若產(chǎn)婦已臨產(chǎn)，且只能用一種快速試劑檢測，結(jié)果陽性，即視為HIV抗體陽性處理檢測后咨詢，解釋結(jié)果檢測后咨詢，知情同意選擇干預措施正常分娩正常分娩產(chǎn)后進行HIV確認試驗產(chǎn)后暫時無法進行確認試驗時第25頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月（三）產(chǎn)后

篩查試驗陽性的產(chǎn)婦在產(chǎn)后要進行HIV確認試驗。根據(jù)檢測結(jié)果再進行咨詢和干預。

（四）嬰兒檢測

嬰兒應于12個月進行HIV抗體檢測，結(jié)果陰性則排除感染，納入正常兒童保??；陽性者繼續(xù)追蹤隨訪，至18個月再次進行HIV抗體檢測，結(jié)果陰性排除感染，納入正常兒童保??；陽性嬰兒轉(zhuǎn)入當?shù)匕滩【C合防治系統(tǒng)。

為配合治療，嬰兒HIV感染的早期診斷也可以采用核酸檢測。目前以2次核酸檢測結(jié)果作為診斷的依據(jù)，2次不同時間的樣本核酸檢測均為陰性診斷未感染，2次不同時間的樣本核酸檢測均為陽性診斷為HIV感染。至18個月仍要進行HIV抗體檢測加以確認。第26頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月圖5嬰兒檢測和隨訪服務流程如下：對艾滋病病毒感染的產(chǎn)婦進行預防艾滋病母嬰傳播咨詢，指導喂養(yǎng)，常規(guī)兒童保健嬰兒12個月進行HIV抗體篩查*試驗陰性陽性用另一種篩查*試劑再次檢測陰性陽性排除兒童感染常規(guī)兒童保健18個月時再進行HIV抗體篩查*試驗用另一種篩查*試劑再次檢測確認試驗陰性陰性陰性陰性陽性第27頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月從事快速HIV檢測單位必須遵守有關部門批準購買有效的試劑從事檢測人員經(jīng)過培訓，有上崗證按規(guī)定對象檢測嚴格按廠家說明書操作滿足質(zhì)量保證要求做好檢測前后咨詢第28頁，課件共32頁，創(chuàng)作于2023年2月（一）實驗室1.艾滋病