高效液相色譜儀及固定相流動(dòng)相

儀器分析課程講義第四節(jié)高效液相色譜儀目錄高效液相色譜儀高效液相色譜的固定相和流動(dòng)相輸液系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)分離系統(tǒng)檢測(cè)系統(tǒng)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)6.2高效液相色譜儀

一、輸液系統(tǒng)

1．貯液器貯液罐的材料應(yīng)耐腐蝕，對(duì)溶劑呈惰性，容積約為0．5—2．0L；貯液罐放置要高于泵體；使用過程貯液罐應(yīng)密閉；溶劑在放入貯液罐之前必須經(jīng)過0．45um濾膜過濾。2．脫氣裝置

作用：脫去流動(dòng)相中的溶解氣體。(1)吹氮脫氣法(2)加熱回流法(3)抽真空脫氣法(4)超聲波脫氣法(5)在線真空脫氣法(on—1inedegasser)3、高壓輸液泵輸送流動(dòng)相壓力：150～350×105

Pa

作用：將流動(dòng)相以穩(wěn)定的流速或壓力輸送到色譜系統(tǒng)。輸液泵的穩(wěn)定性直接關(guān)系到分析結(jié)果的重復(fù)性和準(zhǔn)確性。高壓泵按其性質(zhì)可分為恒壓泵、恒流泵兩類1）往復(fù)式柱塞泵：恒流泵；易于更換溶劑，適用于梯度洗脫但有脈沖波動(dòng)，可以加一阻尼器抑制脈沖。2）氣動(dòng)放大泵：

恒壓泵液缸體積大，更換流動(dòng)相不方便，不便于梯度洗脫，無脈沖、穩(wěn)定流量的輸出,現(xiàn)多用于裝柱。高壓定量進(jìn)樣閥：（六通閥進(jìn)樣裝置）優(yōu)點(diǎn)：進(jìn)樣準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，適于定量分析c.自動(dòng)進(jìn)樣器：計(jì)算機(jī)控制，適合大量進(jìn)樣。二、進(jìn)樣裝置停留進(jìn)樣裝置：

缺點(diǎn)：不能承受高壓，須停流進(jìn)樣；無法取得精確的保留時(shí)間三、高效分離柱色譜柱是實(shí)現(xiàn)分離的核心部件。發(fā)展趨勢(shì)是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。

常規(guī)液相色譜柱1～6mm，10～50cm。

微孔填充柱0.5-1mm

毛細(xì)管柱30-50μm裝柱方法：有干法和濕法，按粒度20μm劃分。柱溫控制下列幾種情況需要控制柱溫：法定標(biāo)準(zhǔn)分析方法中，要求保留時(shí)間具有再現(xiàn)性；必須通過改變柱溫來提高分離效率；對(duì)高分子化合物或黏度大的樣品；對(duì)一些具有生物活性的生物分子；對(duì)一些組成復(fù)雜的樣品，使用二維色譜技術(shù)。四、液相色譜檢測(cè)器1.紫外檢測(cè)器:應(yīng)用最廣，對(duì)大部分有機(jī)化合物有響應(yīng)。作用原理：被分析試樣組分對(duì)特定波長(zhǎng)紫外光的選擇性吸收，組分濃度與吸光度的關(guān)系遵守比爾定律。

特點(diǎn)貍：靈敏全度高翠，可啊達(dá)10-9g.幅mL-1；線性體范圍娘高；可用幟梯度怒洗脫翅；對(duì)流例動(dòng)相楊的流梅速和猛溫度耳變化曬不敏祖感；不適懲用于喘對(duì)紫支外不蹈吸收畫的試修樣；紫外控光不修透過煤的溶男劑不則能用咳（苯假等）靠。2.光電匠二極妖管陣朽列檢粘測(cè)器紫外造可見途光度醒檢測(cè)暖器的釣重要緒進(jìn)展竿；群10理21灶個(gè)二蝦極管尋陣列哲，各款檢測(cè)恰某一恨特定籃波長(zhǎng)粘，無息需停顛流掃督描而刃觀察觀色譜件柱流臘出物帖的各工個(gè)瞬攏間的議動(dòng)態(tài)么光譜耽吸收阻圖光電日二極越管陣寶列檢潔測(cè)器3.差示否折光飾檢測(cè)矮器（di夾ff山er興en蛙ti晴al嬸r勤ef耳ra訂ct遠(yuǎn)iv識(shí)e簡(jiǎn)in工de誰x按de連te剝ct責(zé)or瓦）除紫寶外檢劍測(cè)器砌之外階應(yīng)用銅最多萍的檢巡壽測(cè)器盜；可連某續(xù)檢暫測(cè)參鬼比池與和樣哨品池仔中溶鋤液的紹折光仰指數(shù)略差值諒。差衰值與雹濃度扎呈正購(gòu)比；特點(diǎn)挪：通用昏型檢先測(cè)器;靈敏永度低難（1借0-7g.場(chǎng)mL-1），不帳能用吹于痕橫量分掘析;對(duì)溫款度敏學(xué)感，們要求續(xù)使用盞溫度山恒定;對(duì)流盾動(dòng)相言流量語變化嘴敏感禁，不請(qǐng)能用篇于梯潑度洗哪脫。許多件有機(jī)請(qǐng)化合里物，豆特別滑是芳抖香族畢化合很物、受紫榆外光載激發(fā)除后能字夠輻炊射出弄熒光粘。4.熒光控檢測(cè)刑器（fl相uo參re驅(qū)sc著en卸ce址d蜜et帶ec押to國(guó)r）高靈廈敏度飛(比再紫外與檢測(cè)刑器高更兩個(gè)債數(shù)量共級(jí)，招達(dá)1碧0-1丑1g.慕ml-1)高選艦擇性;線性版范圍湯窄；測(cè)量情中不臉能使尋用抑備制、禾吸收宏熒光億的溶滑劑；對(duì)不支產(chǎn)生蒙熒光四的物潮質(zhì)，徐可使徒其轉(zhuǎn)昂變成梅熒光勺物質(zhì)頁；廣泛絨應(yīng)用死于生喇物化戲工、呼制藥幻玉、食艱品和顆環(huán)境感監(jiān)測(cè)惑中.5.電導(dǎo)致檢測(cè)寧器（el乳ec欲tr弄ic社al信c協(xié)on社du煉ct罰iv臂it玩y賢de碰te都ct膏or狐）屬電化臉學(xué)檢潔測(cè)器，是敢離子永色譜窄法中披應(yīng)用漂最為括廣泛蹈的檢舞測(cè)器作用港原理：根往據(jù)物揀質(zhì)在移某些竹介質(zhì)鐵中電追離后總所產(chǎn)獻(xiàn)生的皺電導(dǎo)爆變化食來測(cè)腿定電擋離物證質(zhì)的槳含量參。五、液相展色譜雄法固奸定相固定刷相的恐形狀（1麻）全符多孔剃型最初器由氧跨化硅責(zé)、氧倒化鋁故、硅平藻土斗等制羅成的煌多孔泳球體劃10日0μm的大岔顆粒理，表味面涂腦漬固德定液塑。傳位質(zhì)速類度慢粒，柱頑效低雹?，F(xiàn)采蝴用1魔0μm以下憤的小胳顆粒薦。（2嘉）表壤面多羊孔型記(薄屯殼型畝微珠講)30未～4四0μm的玻險(xiǎn)璃微焦球，捧表面組附著萬一層謝厚度衰為1稈～咽2μm的多蜂孔硅索膠。表面劑積小詳，傳頑質(zhì)速閥度快而，但艇柱容養(yǎng)量低聞；2.風(fēng)液-溉固吸鉆附固訓(xùn)定相極性到：硅錘膠、掙氧化漁鎂、萬分子即篩科等；非極剪型：輕高聚絕物微他球、程石墨康化碳浩黑、濕聚合釋物包迎裹固千定相她。結(jié)構(gòu)替類型雀：全冷多孔拴型和形薄殼掩型；粒度好：5我～1框0μm；3.液-聰液色礎(chǔ)譜固佛定相惰性針載體：硅膠嶄，無羅機(jī)氧蔑化物執(zhí)、高州分子鑄聚合爛物、品脲醛懷樹脂軌等，班多為3—迅10溉um的全氧多孔滴微球。固定飲液：正析相：剖氰古基柱拴、胺貞基柱涼等反相:烷基冷柱、必苯基名柱。4.化學(xué)梁鍵合團(tuán)固定逢相化學(xué)窩鍵合豬固定查相:目前診應(yīng)用斜最廣敲、性袖能最麻佳的匠固定昨相，串一般帝用硅嶼膠作舞為基息體。a.硅氧竭碳鍵鐮型：諷≡Si—O—Cb.硅氧母硅碳筆鍵型簽：≡Si—O—Si—Cc.硅碳縮慧鍵型墳：易≡Si—Cd.硅氮粥鍵型蘋：佩≡Si—N化學(xué)司鍵合禿固定窩相的偏特點(diǎn)（1急）傳包質(zhì)快，表籮面無口深凹芽陷;（2遵）壽命惜長(zhǎng)，傻無固生定液非流失歲，耐脆流動(dòng)考相沖姻擊；（3勵(lì)）選聚擇性度好，可村鍵合搞不同絹官能構(gòu)團(tuán)矩；（4邁）有張利于床梯度熊洗脫奴；六、液相摩色譜故法流燥動(dòng)相流動(dòng)瓶相特豆性（1默）流由動(dòng)相犬的種均類、己配比晃可顯唱著改倆變組王分分抹離狀紫況；（2子）親殼水性價(jià)固定朽液常診采用裁疏水朝性流撈動(dòng)相蘭，追稱為另正相般液液歌色譜士法;（3洋）流惱動(dòng)相化的極螺性大暗于固糖定液鵝的極愁性，及則稱舟為反抵相液叛液色元譜移。組分嬌在兩瀉種類復(fù)型分登離柱侄上的濫出峰雙順序右相反焦。2.刪流轉(zhuǎn)動(dòng)相末類別按流民動(dòng)相圣組成澆分：?jiǎn)谓M箱分和漆多組福分；按極醒性分：極性育、弱茫極性勾、非至極性攀；按使雷用方養(yǎng)式分：固定莊組成逃淋洗杯和梯宮度淋務(wù)洗常用堂溶劑波的極名性順喘序：水、壤酰胺液、腈顏、醇爽、酮巾、酯像、醚啞、烴稀類,et幟c.流動(dòng)與相可孫分為壘：底劑及洗脫各劑底劑浙：決定繞基本頸的色勻譜分鼓離情桂況；洗脫腳劑：調(diào)節(jié)翁試樣軋組分銹的滯師留并孤對(duì)幾今個(gè)組辭分具矮有選雕擇性睡的分惑離作拳用。3.流動(dòng)向相的悲選擇采用菊二元個(gè)或多鹿元組叼合溶務(wù)劑作斬為流鑄動(dòng)相顯可以級(jí)靈活乳調(diào)節(jié)滿流動(dòng)勒相的樂極性殘或增慘加選柄擇性珍，以溪改進(jìn)彩分離蛙或調(diào)男整出便峰時(shí)走間。正相階液-暑液分寨配分輪離（聽液固弱色譜兼極性吐固定齒相）：底劑筒：低佛極性亮的溶杜劑，急如正受己烷躁、苯剪、氯惕仿等置，洗脫檔劑：救根據(jù)駕試樣濱的性慕質(zhì)選揭取中罩等極更性溶竿劑如缸醚、勢(shì)酮、害醇等捕。反相闖色譜問（液霧固色會(huì)譜非濫極性柔固定晃相）：底劑利：昂水。洗脫脾劑：朵有敞機(jī)溶繼劑作淺為極著性調(diào)理節(jié)劑。4梯度預(yù)洗脫梯度暢洗脫，與扎氣相絮色譜賞中的程序耳升溫一樣叨，可獄極大竿地改程善分譽(yù)離效占果在分就離過來程中志按照牢一定投的程描序連列續(xù)改怎變載科液中尺溶劑喉的配駛比和辨極性不，通棒過載抱液中拒極性熊的變敏化來嘗改變耗被分嚴(yán)離組稼分的昌分離祖因素彼。通過患梯度霞洗脫姐，可示縮短撇分離叛時(shí)間秧、提提高分狹辨能勻力、萌改善但峰形拘，還粉可提波高分策析精辛度。溶劑峰的組袖成在半15mi蛋n內(nèi)，濃從1加0％餃（V/茄V）浪CH3CN乖-H2O隨時(shí)高間改踢變至林50瓶％CH3CN星-H2O梯度票淋洗徑裝置外梯虛度:兩臺(tái)膊高壓辮泵，裕將兩銹種不葉同極毅性的江溶劑愿按一豎定的茄比例鳴送入就梯度恒混合付室，謎混合緒后進(jìn)駛?cè)肷俗V柱跡。內(nèi)梯補(bǔ)度:一臺(tái)愈高壓姻泵,屠通題過比線例調(diào)姨節(jié)閥歷,將繁兩種譯或多芽種不篩同極寬性的約溶劑身按一踐定的仗比例頁抽入婆高壓拍泵中飼混合天。討論1用OD鏡S柱分卡析一腔有機(jī)寒弱酸惡混合帽物樣她品，湯以某倦一比旱例甲掀醇-水為儉流動(dòng)淺相時(shí)蓋，樣芽品容圣量因恒子較格小，芬若想否使容氣量因炸子增很加，漸較好抬的辦索法是A增加凈流動(dòng)任相中壘甲醇皇的比籠例B增加光流動(dòng)華相中摟水的查比例C流動(dòng)抓相中捎加入棕少量HA立cD流動(dòng)筋相中咬加入甩少量莫的氨微水討論2在反術(shù)相色董譜法觸中，塌若以菠甲醇-水為障流動(dòng)蝴相，鉤增加燒甲醇番的比矩例時(shí)頸，組毅分的濤容量騾因子k與保猴留時(shí)降間tR如何值變化案？作業(yè)1.在OD憲S柱上絡(luò)，以姨甲醇智為流事動(dòng)相殼，某借組分敬的分涂配容絞量k=駁1.偉2,如以疑乙腈掃為流紋動(dòng)相蠅，其k值是稠增加揉還是之減少慚，為林什么屈？2.在硅豆膠柱辮上，脹用甲扇苯為慕流動(dòng)斑相，身某組閉分的殖保留催時(shí)間擠是30彩mi焦n，如狡果改樓用四屬氯化蟻碳或口乙醚萬為流胖動(dòng)相非，試能分析錯(cuò)該組層分的越保留精時(shí)間傲如何孔變化溝？3.在液確相色土譜法挎中，阻梯度墻淋洗趟適用偷于分墳離何怕種試儉樣？人干旗擾素武-γ等電漢點(diǎn)8混.5底劑廚：50mm假ol/L磷酸昂鹽緩儲(chǔ)沖液悄，pH結(jié)8.況0洗脫喇劑：50mm驕ol/L磷酸灶鹽緩哄沖液匆，pH郊8.執(zhí)5，灰1m慕ol慌/LNa擊Cl2）離款子交厘換色性譜流蜜動(dòng)相組分晃