免疫學(xué)試驗：實驗三

實驗三內(nèi)容示教：淋轉(zhuǎn)、E花環(huán)、免疫熒光操作：ELISA（請A、B、C液帽子不要蓋錯）；錄像：免疫學(xué)標(biāo)記技術(shù)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗轉(zhuǎn)化百分率正常值為70%左右分裂相：即染色體型母細(xì)胞：大4-5倍；核質(zhì)疏松，有1-3個核仁；核周透明區(qū)；胞漿有空泡過渡型：略大；核質(zhì)略疏松；著色較淡小淋巴細(xì)胞：核質(zhì)致密；著色深；胞漿少示教片E玫瑰花環(huán)試驗T細(xì)胞表面有綿羊紅細(xì)胞受體，可在自然情況下與綿羊紅細(xì)胞結(jié)合，形成E玫瑰花環(huán)，由此可區(qū)分T淋巴細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞。示教片

酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）

（EnzymelinkedlmmunosorbentAassay）【原理】把抗原抗體的免疫反應(yīng)和酶（主要有辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）的高效催化作用有機地結(jié)合起來，并仍保持其免疫和酶的活性。結(jié)合在抗原抗體復(fù)合物上的酶在遇到相應(yīng)的底物時，可以催化底物水解、氧化或還原，從而產(chǎn)生有色的物質(zhì)。顏色反應(yīng)的深淺與抗體或抗原的量成正比。

【方法】主要有間接法和雙抗體夾心法

ELISA

：間接法------用于測定抗體ELISA：雙抗體夾心法------用于測定抗原

ELISA：雙抗體夾心法檢測HCG（操作）器材：1個小杯/1人，標(biāo)本1、標(biāo)本2A、B、C液方法：小杯內(nèi)加標(biāo)本兩滴

甩干、水洗三次加一滴C液（紅色）甩干、水洗三次加A、B液各一滴置于白紙上，觀察結(jié)果結(jié)果判斷：藍色為+*瓶蓋不能蓋錯，小杯用后扔進雜物盆?。?！5min5min免疫熒光技術(shù)（熒光抗體技術(shù)）【原理】是在免疫學(xué)、生物化學(xué)及顯微鏡術(shù)進展的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一項技術(shù)，具有特異、敏感、快速的特點。將熒光色素（常用異硫氰基熒光黃，簡稱FITC）與特異性抗體（或抗原）以共價鍵基團牢固結(jié)合，但不影響該血清抗體的免疫特性。這種熒光標(biāo)記的抗原抗體復(fù)合物，可通過熒光燈源中產(chǎn)生的紫外光或藍紫光激發(fā)產(chǎn)生熒光，而從熒光顯微鏡加以觀察?！痉椒ā恐饕兄苯臃ê烷g接法?？购丝贵w在多種疾病中出現(xiàn)SLE：50%-100%RA：10%-20%硬皮?。?5%-90%狼瘡性肝炎：95%-100%原發(fā)性膽汁性肝硬化：95%-100%皮質(zhì)激素治療后陽性率下降熒光顯微鏡

實驗材料小鼠待檢血清FITC標(biāo)記的羊抗人IgG熒光顯微鏡丙酮、甘油、解剖器械、玻片和濕盒等操作步驟抗原片的制備1.小鼠斷椎處死，取肝臟2.清洗，鋒利剪刀取直徑1cm左右的肝組織3.印片4.晾干5.丙酮固定10-15min熒光染色1.在印片上加待檢血清2.濕盒中37℃孵育30min3.PBS洗滌4.晾干后加熒光標(biāo)記的抗體5.濕盒中37℃孵育30min6.PBS洗滌7.晾干后甘油封片熒光顯微鏡鏡檢免疫熒光C3