經(jīng)典液相色譜分析技術(shù)-薄層色譜分離分析技術(shù)（儀器分析技術(shù)）

薄層色譜分離分析技術(shù)

——薄層色譜參數(shù)介紹儀器分析技術(shù)主要內(nèi)容比移值12相對比移值儀器分析技術(shù)一、比移值(Rf值)儀器分析技術(shù)

在薄層色譜中，一般采用定時(shí)展開，即在同一展開時(shí)間內(nèi)組分與展開劑遷移的距離。組分的移動(dòng)距離（L）與展開劑移動(dòng)距離（L0）之比稱為比移值，為定性參數(shù)。

Rf=L/L0L：原點(diǎn)至斑點(diǎn)中心的距離L0：原點(diǎn)至溶劑前沿的距離

L0

原點(diǎn)

溶劑前沿ABL1L2Rf的測量示意圖當(dāng)Rf=0組分留在原點(diǎn)Rf=1

組分隨溶劑前沿一起移動(dòng)Rf可用范圍是0.2～0.8，最佳范圍是0.3～0.5，Rf總是小于1影響Rf值的因素

(1)待分離物的化學(xué)性質(zhì)(2)薄層板的性質(zhì)：固定相的粒度、厚度(3)展開劑的極性(4)其他條件：溫濕度、飽和情況等儀器分析技術(shù)二、相對比移值（Rr值）

指被測組分的比移值與參照組分的比移值之比。Rf(i)、Rf(s)分別為組分i和參考物質(zhì)S在同一波層板上同一展開條件下所測得比移值。儀器分析技術(shù)特點(diǎn)：在不同的實(shí)驗(yàn)室、不同實(shí)驗(yàn)者間進(jìn)行的測定Rf是比較困難的，因此建議采用相對比移值Rr值。由于參考物與組分在完全相同的條件下展開，能消除系統(tǒng)誤差，重復(fù)性和可靠性都比比移值好。Rr可以大于1，也可以小于1。儀器分析技術(shù)謝謝觀看！儀器分析技術(shù)薄層色譜分離分析技術(shù)

——薄層色譜參數(shù)介紹儀器分析技術(shù)主要內(nèi)容相平衡參數(shù)12分離度儀器分析技術(shù)一、相平橫參數(shù)儀器分析技術(shù)在色譜條件確定的情況下，Rf只與組分性質(zhì)有關(guān)，是薄層色譜基本定性參數(shù)，說明組分的色譜保留行為，K或k大Rf小，K或k小Rf大。

容量因子

k=

CsVs/CmVm分配系數(shù)K=Cs/Cm

K、k與Rf值的關(guān)系：二、分離度

衡量薄層色譜分離效果的重要指標(biāo)，是指相鄰兩斑點(diǎn)中心至原點(diǎn)的距離之差與兩斑點(diǎn)平均徑向?qū)挾龋◤较驅(qū)挾仁侵赴唿c(diǎn)沿著展開方向的寬度）的比值。儀器分析技術(shù)L2、L1：原點(diǎn)至兩斑點(diǎn)中心的距離W1、W2：兩色譜峰寬

計(jì)算舉例在薄層板上分離A、B兩組分的混合物，當(dāng)原點(diǎn)至溶劑前沿距離為16.0cm時(shí)，兩斑點(diǎn)質(zhì)量重心至原點(diǎn)的距離分別為6.9cm和5.6cm，斑點(diǎn)直徑分別為0.83cm和0.57cm。求兩組分的分離度及Rf值。解：儀器分析技術(shù)謝謝觀看！儀器分析技術(shù)儀器分析技術(shù)薄層色譜分離分析技術(shù)

——薄層色譜操作技術(shù)3、展開2、點(diǎn)樣1、制板4、檢視薄層色譜操作技術(shù)主要包括四個(gè)步驟儀器分析技術(shù)一、制板儀器分析技術(shù)1、自制薄板無黏合劑：將固定相直接涂布玻璃板上。含黏合劑：固定相中加煅石膏（10%～15%）、羧甲基纖維素鈉水溶液（0.2%～0.5%）。具體操作如下2、市售薄板普通薄層板：玻璃、聚酰胺薄膜、鋁基薄層板高效薄層板：固定相粒徑為5-7μm

自制薄板的操作方法將1份固定相和3份水（或羧甲基纖維素鈉水溶液）在研缽中沿同一方向研磨混勻，去除表面的氣泡后，置玻璃板上使涂布均勻，或倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布(涂層厚度為0.2mm～0.3mm)，取涂好的薄層板，置水平臺(tái)上于室溫下晾干后，在110℃活化30分鐘，立即置于有干燥劑的干燥器中備用。手動(dòng)涂布器儀器分析技術(shù)市售薄板臨用前的處理一般應(yīng)在使用前110℃活化30分鐘，聚酰胺薄膜不需活化，鋁基片薄層板和聚酰胺薄膜可根據(jù)需要剪裁，但需注意剪裁后的薄層板底邊硅膠層不得有破損，如存放期間被空氣雜質(zhì)污染，使用前可用甲醇、二氯甲烷和甲醇的混合溶液在展開容器中上行展開預(yù)洗，取出、晾干，110℃活化后，置干燥器中備用。硅膠類薄層板儀器分析技術(shù)每次點(diǎn)樣后，使其自然干燥或?qū)⑵浯蹈?，只有干后，才能第二次點(diǎn)樣；點(diǎn)樣時(shí)勿損傷薄層表層，不得出現(xiàn)凹點(diǎn)，不可刺出空洞。二、點(diǎn)樣儀器分析技術(shù)普通板點(diǎn)樣基線：距底邊2.0cm圓點(diǎn)狀：直徑≤3mm條帶狀：點(diǎn)樣寬度5～10mm點(diǎn)或條帶間距：＜8mm

點(diǎn)樣量：＜10μl高效板點(diǎn)樣基線：距底邊0.8～1cm圓點(diǎn)狀：直徑R≤2mm條帶狀：點(diǎn)樣寬度4～8mm點(diǎn)或條帶間距：＜5mm

點(diǎn)樣量：＜5μl三、展開同一物質(zhì)在同一薄層板上出現(xiàn)中間部分的Rf值比邊緣部分的Rf值小，這種現(xiàn)象稱為邊緣效應(yīng)，所以展開缸預(yù)先用展開劑飽和可避免此效應(yīng)。

要求：將點(diǎn)好樣的薄層板放入展開缸中，浸入展開劑的深度為距薄層板邊0.5-1cm，密封頂蓋待展開至規(guī)定的距離，如20cm的薄層板，上行距離為8-10cm，高效薄層板上行距離為5-8cm，取出薄板在前沿處做好標(biāo)記，晾干，待檢。儀器分析技術(shù)展開方式展開方式有:上行、近水平、雙向、多次展開上行展開近水平展開儀器分析技術(shù)四、檢視儀器分析技術(shù)在日光下直接檢視化學(xué)檢出法：利用化學(xué)試劑與被測物質(zhì)反應(yīng)，使斑點(diǎn)產(chǎn)生顏色而定位，顯色的方法有：噴霧法、熏蒸法、浸漬法。熒光檢出法：對無色物質(zhì)可在紫外燈下，觀察有無暗斑或熒光斑點(diǎn)，并記錄其顏色、位置、強(qiáng)弱；有熒光的物質(zhì)或顯色后激發(fā)產(chǎn)生熒光的物質(zhì)可在紫外燈（254nm或365nm）下觀察熒光斑點(diǎn)。有色物質(zhì)斑點(diǎn)無色物質(zhì)斑點(diǎn)謝謝觀看！儀器分析技術(shù)薄層色譜分離分析技術(shù)

——薄層色譜法分類及原理儀器分析技術(shù)主要內(nèi)容薄層色譜法及其分類12薄層色譜法的原理儀器分析技術(shù)一、薄層色譜法及其分類1、定義將固定相均勻地涂布在具有光潔表面的玻璃、塑料、金屬板上形成薄層，在此薄層上進(jìn)行色譜分離的方法稱為薄層色譜法。

鋪固定相的板稱為薄層板或薄板。薄層色譜儀器分析技術(shù)2、薄層色譜分類吸附薄層色譜法

分配薄層色譜法

分子排阻薄層色譜法膠束薄層色譜法按分離機(jī)制分儀器分析技術(shù)1）吸附薄層色譜法

固定相為吸附劑的薄層色譜法。固定相通常為硅膠。2）分配薄層色譜法

利用樣品中各組分在固定相與流動(dòng)相之間的分配系數(shù)差別實(shí)現(xiàn)分離的薄層色譜法。固定相通常是液體。3）膠束薄層色譜法

以表面活性劑膠束溶液為展開劑的薄層色譜法。常用聚酰胺薄層板，也用氧化鋁板，較少用硅膠板。儀器分析技術(shù)二、薄層色譜法的原理薄層色譜是一種開放性色譜，是將混合組分樣品溶液點(diǎn)在薄層板一端的起始線上，點(diǎn)樣處稱為原點(diǎn)，在密閉容器中用適宜的流動(dòng)相（展開劑）展開。因吸附劑對不同組分的吸附能力不同，展開劑對不同組分的解吸能力也不完全相同，造成各組分在薄層析上移動(dòng)的速度有快有慢，經(jīng)過一段時(shí)間展開后，不同的組分彼此分開，最終形成相互分離的斑點(diǎn)。儀器分析技術(shù)謝謝觀看！儀器分析技術(shù)薄層色譜分離分析技術(shù)

——吸附劑與展開劑儀器分析技術(shù)主要內(nèi)容吸附劑12展開劑儀器分析技術(shù)一、吸附劑吸附薄層色譜法的固定相為吸附劑，常用的有硅膠、氧化鋁、聚酰胺等。氧化鋁硅膠儀器分析技術(shù)1、硅膠薄層色譜用硅膠的粒度是10-40μm，平均孔徑是100nm，硅醇基密度為8μmol/m2。分類組成適用硅膠H不含粘合劑硅膠硅膠G硅膠和煅石膏混合而成硅膠HF254不含粘合劑含有無機(jī)熒光劑本身不發(fā)光，且不易顯色的物質(zhì)儀器分析技術(shù)2、氧化鋁氧化鋁和硅膠類似，主要有三種形式分類組成適用氧化鋁H不含粘合劑氧化鋁G氧化鋁和煅石膏混合而成氧化鋁HF254不含粘合劑含有無機(jī)熒光劑本身不發(fā)光，且不易顯色的物質(zhì)儀器分析技術(shù)吸附劑對薄層色譜的影響顆粒大，總表面積小，吸附量低，展開速度快，展開斑點(diǎn)較寬，分離效果差。顆粒小，總表面積大，吸附量大，展開速度慢。吸附劑顆粒大小適宜，粒度分布窄。顆粒大小兩種表示方式：一、顆粒直徑表示；二、用目表示儀器分析技術(shù)二、展開劑吸附薄層色譜過程中，組分的分子與展開劑分子爭奪吸附劑表面活性中心，色譜條件的選擇主要是展開劑的選擇。儀器分析技術(shù)分離極性較小組分，宜選用吸附活性較大的薄層板，以極性較小的洗脫劑展開；否則Rf太大，不利于分離。分離極性較大組分，宜選用吸附活性較小的薄層板，以極性較大的洗脫劑展開；否則Rf太小，分離不好。展開劑的選擇條件：①對的所需成分有良好的溶解性；②可使成分間分開；③待測組分的Rf在0.2～0.8之間，定量測定在0.3～0.5之間④不與待測組分或吸附劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；⑤沸點(diǎn)適中，黏度較??；⑥展開后組分斑點(diǎn)圓且集中；⑦混合溶劑最好用新鮮配制。儀器分析技術(shù)謝謝觀看！儀器分析技術(shù)儀器分析技術(shù)薄層色譜分離分析技術(shù)

——薄層色譜法常用儀器與材料主要內(nèi)容吸附劑12載板儀器分析技術(shù)4展開容器點(diǎn)樣器36顯色裝置顯色劑5檢視裝置7一、吸附劑硅膠聚酰胺微晶纖維素氧化鋁硅藻土常用粒徑5~40μm硅膠H硅膠G硅膠GF254硅膠HF254

儀器分析技術(shù)玻璃板（常用）塑料膜金屬箔厚度2mm5cm×20cm10cm×10cm10cm×15cm10cm×20cm種類要求：表面光滑、平整清潔玻板處理措施：清潔劑或鉻酸洗液浸泡洗滌，用清水充分清洗，再用蒸餾水或去離子水沖洗，表面應(yīng)不附水珠，晾干備用二、載板儀器分析技術(shù)三、點(diǎn)樣器手動(dòng)全自動(dòng)點(diǎn)樣儀定量毛細(xì)管平口微量注射器定量毛細(xì)管全自動(dòng)點(diǎn)樣儀平口微量注射器儀器分析技術(shù)四、展開容器雙槽薄層色譜專用展開缸平底色譜專用展開缸展開缸應(yīng)適合薄層板的大小，并配有嚴(yán)密的蓋子，展開缸底部應(yīng)平整光滑，側(cè)面應(yīng)便于觀察，常用的有以下兩種。儀器分析技術(shù)五、顯色劑通用型：與多數(shù)有機(jī)化合物反應(yīng)，顯示相同顏色斑點(diǎn)專屬型：對特定官能團(tuán)化合物起反應(yīng)，顯示特定顏色斑點(diǎn)。顯色劑適用范圍顯色方法斑點(diǎn)顏色濃硫酸乙醇溶液多數(shù)有機(jī)化合物噴霧加熱多數(shù)加熱后呈黑色碘