醫(yī)院感染衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測(cè)操作規(guī)程

#醫(yī)院感染衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測(cè)操作規(guī)程醫(yī)療器械滅菌效果監(jiān)測(cè)采樣時(shí)間：在滅菌處理后，存放有效期內(nèi)采樣。無(wú)菌檢驗(yàn)（無(wú)菌檢驗(yàn)是指檢查經(jīng)滅菌的敷料、縫線、一次性使用的醫(yī)療用品、無(wú)菌器械以及適合于無(wú)菌間查的其它品種是否無(wú)菌的一種方法。）.無(wú)菌檢驗(yàn)應(yīng)在潔凈度為100級(jí)單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行，應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，避免微生物污染；對(duì)單向流空氣區(qū)域及工作臺(tái)面，必須進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。無(wú)菌檢驗(yàn)前準(zhǔn)備洗脫液與培養(yǎng)基無(wú)菌性試驗(yàn)：無(wú)菌試驗(yàn)前3d,于需-厭氧培養(yǎng)基與霉菌培養(yǎng)基內(nèi)各接種1ml洗脫液，分別置30℃-35℃與20℃-25℃培養(yǎng)72h，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。陽(yáng)性對(duì)照管菌液制備：TOC\o"1-5"\h\z在試驗(yàn)前一天取金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]的普通瓊脂斜面新鮮培養(yǎng)物，接種1環(huán)至需-厭氧培養(yǎng)基內(nèi)，在30℃-3℃5培養(yǎng) 后，用 無(wú)菌氧化鈉溶液稀釋至 ；取生孢梭菌 （） 的需氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基新鮮培養(yǎng)物接種環(huán)種于相同培養(yǎng)基內(nèi)，于℃℃培養(yǎng) 后，用 無(wú)菌氧化鈉溶液稀釋至取白色念珠菌 （） 真菌瓊脂培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物接種環(huán)于相同培養(yǎng)基內(nèi)，于℃ ℃培養(yǎng)后，用無(wú)菌氧化鈉溶液稀釋至 。無(wú)菌操作：取縫合針、針頭、刀片等小件醫(yī)療器械5件直接浸入6管需-厭氧培養(yǎng)管（其中一管作陽(yáng)性對(duì)照）與4管霉菌培養(yǎng)管。培養(yǎng)基用量為15ml/管。取5付注射器，在5ml洗脫液中反復(fù)抽吸5次，洗下管內(nèi)細(xì)菌，混合后接種需-厭氧菌培養(yǎng)管（共6管，其中1管作陽(yáng)性對(duì)照）與霉菌培養(yǎng)管（共4管）。接種量：1ml注射器為0.5ml,2ml注射器為1ml,5ml-10ml注射器為2ml，20ml-50ml注射器為5ml，培養(yǎng)基用量：接種量為2ml以下為15ml/管，接種量5ml為40ml/管。手術(shù)鉗、鑷子等大件醫(yī)療器械取兩件用沾有無(wú)菌洗脫液的棉拭子反復(fù)涂抹采樣，將棉拭子投入5ml無(wú)菌洗脫液中，將采樣液混勻，接種于需-厭氧培養(yǎng)管（共6管,其中1管作陽(yáng)性對(duì)照）與霉菌培養(yǎng)管（共4管）。接種量為1ml/管，培養(yǎng)基用量為15ml/管。培養(yǎng)：在待檢樣品的需-厭氧培養(yǎng)管中,接種預(yù)先準(zhǔn)備的金黃色葡萄球菌陽(yáng)性對(duì)照管液1：1000稀釋1ml，將需-厭氧培養(yǎng)管以及陽(yáng)性與陰性對(duì)照管于0 ℃培養(yǎng)，培養(yǎng)期間逐日檢查是否有細(xì)菌生長(zhǎng)，如加入供試品后培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁或沉淀，經(jīng)培養(yǎng)后不能從外觀上判斷時(shí)，可取培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種入另一支相同的培養(yǎng)基中或斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng) 后,觀察是否再現(xiàn)渾濁或在斜面上有無(wú)菌落生長(zhǎng)，并在轉(zhuǎn)種的同時(shí)，取培養(yǎng)液少量，涂片染色，用顯微鏡觀察是否有菌生長(zhǎng)。結(jié)果判定：陽(yáng)性對(duì)照在24h內(nèi)應(yīng)有菌生長(zhǎng)，陰性對(duì)照在培養(yǎng)期間應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，如需-厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管內(nèi)均有澄清或雖顯渾濁但經(jīng)證明并非有菌生長(zhǎng)，判為滅菌合格；如需-厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管中任何1管顯渾濁并證實(shí)有菌生長(zhǎng)，應(yīng)從新取樣，分別同法復(fù)試2次，除陽(yáng)性對(duì)照外，其他各管均不得有菌生長(zhǎng)，否則判為滅菌不合格。注意事項(xiàng)時(shí)間不得超過(guò)6h,若樣品保存于0℃-4℃,則不得超過(guò)24h被采樣本表面積＜100cm2取全部表面；被采樣本表面積三1002cm若消毒因子為化學(xué)消毒劑，采樣液中應(yīng)加入相應(yīng)中和劑。手和皮膚黏膜消毒效果監(jiān)測(cè)采樣時(shí)間：在消毒后立即采樣。采樣方法手的采樣：被檢人五指并攏，用浸有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的棉拭子在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦2次（一只手涂擦面積約30cm2）,皮膚粘膜采樣：用5cmX5cm的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢皮膚處，用浸有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入10ml含相應(yīng)中和劑和無(wú)菌洗脫液的試管內(nèi)，立即送檢。不規(guī)則的粘膜皮膚處可用棉拭子直接涂擦采樣。檢測(cè)方法細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)：將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打80次，用無(wú)菌洗管吸取1.0ml待檢樣品接種于滅菌平皿，每一樣本接種2個(gè)平皿，內(nèi)加入已溶化的40℃~48℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂15ml?18ml,邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置36℃±1℃溫箱培養(yǎng)48h,計(jì)數(shù)菌落數(shù)。采樣結(jié)果計(jì)算方法：細(xì)菌總數(shù)（cfu/cm2）=平板上菌落數(shù)X稀釋倍數(shù)采樣面積（cm2）致病菌檢測(cè)：按致病菌檢測(cè)的原則執(zhí)行。物品和環(huán)境表面消毒效果的監(jiān)測(cè)采樣時(shí)間：在消毒處理后進(jìn)行采樣。采樣方法用5cmX5cm的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面采樣面積三100cm2,連續(xù)采樣4個(gè)，用浸有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的棉拭子一支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之轉(zhuǎn)棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入10ml含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液試管內(nèi),立即送檢。門(mén)把手等不規(guī)則物體的表面用棉拭子直接涂擦采樣。檢測(cè)方法細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)：檢測(cè)方法同上執(zhí)行。小型物體表面的結(jié)果計(jì)算，用cfu/件表示。致病菌檢測(cè)：檢測(cè)方法按致病菌檢測(cè)原則執(zhí)行。結(jié)果判定II類(lèi)區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)W5cfu/cm2,并未檢出致病菌為消毒合格。III類(lèi)區(qū)域細(xì)菌:細(xì)菌總數(shù)W10cfu/cm2并未檢出致病菌為消毒合格.W類(lèi)區(qū)域細(xì)菌：總數(shù)W15cfu/cm2,并未檢出致病菌為消毒合格。母嬰同室，早產(chǎn)兒室，嬰兒室，新生兒室及兒科病房的物體表面不得檢出沙門(mén)菌。注意事項(xiàng)采樣時(shí)間：在滅菌處理后，存放有效期內(nèi)采樣。樣本量及處理：按無(wú)菌檢驗(yàn)前準(zhǔn)備執(zhí)行?？諝庀拘Ч谋O(jiān)測(cè)采樣時(shí)間：在消毒處理后，操作前進(jìn)行采樣。采樣方法：平板暴露法布點(diǎn)方法：室內(nèi)面積^!^,設(shè)內(nèi)，中，外對(duì)角線3點(diǎn)，內(nèi)，外點(diǎn)布點(diǎn)部位距墻壁1M處；室內(nèi)面積＞30m2,設(shè)4角及中央5點(diǎn),4角的布點(diǎn)部位距墻壁1m處。采樣方法：將普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板（直徑為9cm）放在室內(nèi)各采樣點(diǎn)處，采樣高度為距地面1.5m采樣時(shí)將平板蓋打開(kāi)，扣放于平板旁，暴露5min,蓋好立即送檢。檢測(cè)方法：按照2.1.3要求進(jìn)行。平板暴露法結(jié)果計(jì)算公式：細(xì)菌總數(shù)（cfu/cm3）=50000N/（AXT）式中A為平板面積（cm2）；T為平板暴露時(shí)間（min）；N為平板菌落數(shù)（cfu）結(jié)果判定I類(lèi)區(qū)域:細(xì)菌總數(shù)W10cfu/cm3（或0.2cfu/平板），未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；II類(lèi)區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)W200cfu/cm3（或4cfu/平板），未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；III類(lèi)區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)W500cfu/cm3（或10cfu/平板），未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格。注意事項(xiàng):采樣前，關(guān)好門(mén)，窗，在無(wú)人走動(dòng)的情況下，靜止 進(jìn)行采樣。消毒液的監(jiān)測(cè):（使用中消毒液染菌量測(cè)定）檢測(cè)方法：傾注法：用無(wú)菌洗管吸取消毒液 ，加入到含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌生理鹽水采樣管中混勻，分別取放入支滅菌平皿內(nèi)，加入已熔化的 ?的營(yíng)養(yǎng)瓊脂?邊傾注邊搖勻待瓊脂凝固一平板置培養(yǎng) 觀察霉菌生長(zhǎng)情況另一個(gè)平板置土培養(yǎng) 記數(shù)菌落數(shù)同時(shí)按 的原則檢測(cè)病菌消毒液染菌量 每個(gè)平板上的菌落數(shù)X內(nèi)鏡消毒效果的監(jiān)測(cè)采樣時(shí)間:在消毒滅菌后,使用前進(jìn)行采樣.采樣方法:用沾有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌生理鹽水的棉拭子,在檢內(nèi)鏡下從鏡頭至鏡身反復(fù)涂擦，剪去手接觸部位，將棉拭子投入到5ml含相應(yīng)中和劑的生理鹽水采樣管中，立即送檢。檢測(cè)方法細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè):將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打80次，用無(wú)菌洗管吸取1.0ml待檢樣品接種于滅菌平皿，每一樣本接種2個(gè)平皿，內(nèi)加入已溶化的40℃~48℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂15ml?18ml,邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置36℃±1℃溫箱培養(yǎng)48h,計(jì)數(shù)菌落數(shù)。致病菌檢測(cè)：將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打80次，按3.17.15原則檢測(cè)致病菌。結(jié)果判定：滅菌后內(nèi)鏡，未檢出任何微生物為合格。消毒后的內(nèi)鏡，細(xì)菌總數(shù)W20cfu/件，并未檢出致病菌為合格。注意事項(xiàng)：采樣面積同物品和環(huán)境表面效果進(jìn)行采樣。.致病菌的檢測(cè)檢測(cè)原則：致病菌的檢測(cè)依據(jù)污染情況進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)。金黃色葡萄球菌檢測(cè)增菌，分離：取采樣液1ml,接種于5mlSCDLP液體培養(yǎng)基中，于360C±10C增菌24h。取1白金耳上述增菌液，在血平板上劃線分離，360C±10C培養(yǎng)24h。觀查菌落特征：在血瓊脂平板上菌落形態(tài)為金黃色，圓形凸起，表面光滑，周?chē)腥苎?。鏡檢：挑取典型菌落作染色鏡檢。鏡下為革蘭陽(yáng)性。成葡萄狀排列的球菌。生化反應(yīng)：取可疑菌落作觸酶，葡萄糖發(fā)酵，血漿凝固酶，接種于甘露醇發(fā)酵，新生霉素敏感實(shí)驗(yàn)，均為陽(yáng)性者極為金黃色葡萄球菌。甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)：取上述可疑菌落接種于甘露醇培養(yǎng)基，于360C±10C培養(yǎng)24h,發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸者為陽(yáng)性。血漿凝固實(shí)驗(yàn)：①玻片法：潔凈玻片一端滴一滴滅菌生理鹽水，另一端滴一滴血漿，用白金耳挑取菌落分別與生理鹽水和血漿混勻，5min內(nèi)觀察有無(wú)固體顆粒狀物，若血漿出現(xiàn)凝塊，生理鹽水均勻混濁為陽(yáng)性，兩者均混濁為陰性。②試管法：吸取1：4新鮮血漿0.5ml，放在滅菌小試管中，再加入等量待檢菌24h肉湯培養(yǎng)物，混勻后放入360C±10C孵箱中，同時(shí)以已知血漿凝固酶陽(yáng)性和陰性菌肉湯培養(yǎng)物作對(duì)照，每30s觀察一次，6h內(nèi)出現(xiàn)凝塊者為陽(yáng)性。乙型溶血性鏈球菌檢測(cè)增菌，分離：取樣品1ml,接種于1%葡萄糖肉湯，370C增菌24h。取1白金耳增菌液在血平板上作劃線分離，360C±10C培養(yǎng)24h觀查菌落特征：菌落形態(tài)為灰白色，半透明或不透明，針尖狀突起，表面光滑，邊緣整齊，周?chē)蠦溶血圈。鏡檢：挑取典型菌落作染色鏡檢。鏡下為革蘭陽(yáng)性。成鏈球狀排列的球菌。生化反應(yīng)：取可疑菌落作如下生化實(shí)驗(yàn)，如觸酶陰性，鏈激酶試驗(yàn)陽(yáng)性，對(duì)桿菌肽敏感者，即為乙型溶血性鏈球菌。鏈激酶試驗(yàn)：吸取草酸鉀血漿0.2ml（0.02g草酸鉀加5ml人血漿混勻，經(jīng)離心沉淀，吸取上清），加入0.8ml滅菌生理鹽水混勻后再加入待查菌24h肉湯培養(yǎng)物0.5ml和0.25%氯化鈣0.25ml,混勻，放入360C±10C水浴中，每2min觀察一次（一般10min內(nèi)