氣相色譜分析法在藥物分析中的應用

氣相色譜分析法在藥物分析中的應用2023/6/1第一頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日一、如何判斷待測物是否可以直接進行GC分析GC法廣泛應用于氣體、揮發(fā)性物質、高溫下可氣化的化合物，或經(jīng)過化學衍生后可轉化為高溫下可氣化的衍生物的液體或固體樣品的定性和定量分析。2023/6/1第二頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日（一）經(jīng)驗一對于分子量小于500的化合物，若分子結構中不含活潑氫的-OH，-NH2，-NH-，-COOH，-SO3H,-SH,—CONH2,-CONH-,-SO2NH2,-SO2NH-等極性官能團，且對熱穩(wěn)定，一般均可采用GC法直接分析。如：維生素E、維生素K1、四烯基萘醌、替補瑞酮、丁咯地爾等。2023/6/1第三頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日（二）經(jīng)驗二對于分子量小于200的化合物，若分子結構中含有-OH，-NH2，-NHR，-SH,-CONH2極性官能團，但分子結構中的極性官能團總數(shù)不超過2個，且對熱穩(wěn)定，則一般可采用GC法直接分析。如：偽麻黃堿、苯丙醇胺、丁香酚、薄荷醇、龍腦、異龍腦等。2023/6/1第四頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日（三）經(jīng)驗三1.糖類、氨基酸類、肽類、核酸類、蛋白質類等強化極性化合物或者生物大分子肯定不能直接進行GC分析。2.不符合經(jīng)驗一和二中很多分子量小于500的中等極性化合物往往可以直接進行GC分析。如：硝苯地平、尼莫地平、尼群地平、尼索地平等地平類降血藥，地西泮、硝西泮等西泮類安眠藥。2023/6/1第五頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日二、哪些化合物經(jīng)過衍生化后可以進行GC分析對于分子量小于500，但由于分子結構中含有-OH，-NH2，-NH-，-COOH，-SH,-CONH2,-CONH-七鐘活潑氫的極性官能團，且難以氣化，無法直接進行GC分析的化合物，一般需經(jīng)過衍生化后進行GC分析。實際上藥物中直接進行GC分析的不到15%，但經(jīng)過衍生化處理后70~80%的藥物可進行GC分析。2023/6/1第六頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日三、當待測物用GC法和HPLC法均可分析時應如何選擇情況1：常規(guī)藥物制劑主成分分析時，一般選用進樣準確度和精密度高的HPLC法進行分析。如測定沒有紫外吸收或紫外吸收很弱的揮發(fā)性油類成分的主成分或輔料的藥物制劑，則采用GC法進行分析。2023/6/1第七頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日情況2：化學藥品、中成藥、中藥中間體和中藥制品中殘留溶劑檢測一般采用GC法。原因：GC的FID和ECD檢測殘留溶劑的靈敏度高于HPLC的檢測器。2023/6/1第八頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日情況3：中藥中農(nóng)藥殘留檢測要根據(jù)農(nóng)藥的種類、實驗室的條件、實驗成本綜合考慮作出選擇。GC-ECD：有機氯類農(nóng)藥GC-NPD：有機磷類農(nóng)藥GC-MS和HPLC-MS：測定農(nóng)藥殘留有優(yōu)勢高的專屬性和靈敏度情況4：體內(nèi)藥物分析方面，要根據(jù)方法的專屬性、靈敏度、方便程度三個方面來考慮。2023/6/1第九頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日第六章

氣相色譜法在藥物分析中的應用第二節(jié)

氣相色譜法在中藥分析中的應用一、中藥材分析三、中藥中農(nóng)藥殘留的分析二、中成藥和中藥制品的分析2023/6/1第十頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日一、中藥材分析GC在中藥材分析中主要用于藥材中揮發(fā)性油類有效成分或指標性成分，以及測定藥材中農(nóng)藥的殘留量。如：薄荷藥材中薄荷醇和薄荷酮，丁香藥材中丁香酚，石菖蒲藥材中的α-細辛醚和β-細辛醚揮發(fā)性成分等，以及殘留的有機氯、磷、擬除蟲菊類農(nóng)藥。藥材中不易氣化的組分可以衍生后進行GC分析。2023/6/1第十一頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日二、中成藥和中藥制品的分析GC在中成藥和中藥制品分析中主要用于藥材中揮發(fā)性油類有效成分或指標性成分，以及測定藥材中農(nóng)藥的殘留量。還用于測定中成藥和中藥制品中有機溶劑的殘留量。2023/6/1第十二頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日三、中藥中農(nóng)藥殘留的分析農(nóng)藥殘留分析特點：樣品中農(nóng)藥殘留量很低，屬痕量分析（fg/kg~mg/Kg)；常用的農(nóng)藥有數(shù)百種，各類農(nóng)藥性質差異大，分析方法需根據(jù)各類農(nóng)藥的特點而定；樣品種類多，組成各異、各類樣品的農(nóng)藥殘留檢測的錢處理方法差異較大；測定樣品中農(nóng)藥殘留量時，對方法的靈敏度要求高，而準確度和精密度要求不高。2023/6/1第十三頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日農(nóng)藥殘留分析主要采用毛細管柱氣相色譜法進行分析，配以高靈敏度和專屬性的檢測優(yōu)勢。器在農(nóng)藥殘留分析中具有很大的農(nóng)藥殘留分析前處理——對農(nóng)藥提取、并對提取液凈化、濃縮。檢測2023/6/1第十四頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日（一）樣品的前處理技術——檢測的關鍵環(huán)節(jié)作用萃取及濃縮被測痕量農(nóng)藥，提高方法靈敏度消除樣品基質對測定的干擾，通過樣品提取液進行凈化，除去提取時的共萃取物。2023/6/1第十五頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日1.提取提取方法要根據(jù)待測農(nóng)藥的性質、檢測方法和樣本決定，遵循盡量完全提取出待測農(nóng)藥，且共萃取物盡量少原則。提取溶劑的選擇原則：相似相溶原理注意：所用溶劑對氣相色譜檢驗應無干擾2023/6/1第十六頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日提取技術液液萃取振蕩萃取索氏萃取超聲波萃取微波萃取加速溶劑提取超臨界流體提取固相微萃取2023/6/1第十七頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日2.提取液的凈化和濃縮由于萃取過程中不可避免將樣品中的油脂、蠟質、葉綠素及胺類、糖類、酚類等可溶于提取溶劑的物質一起被萃取出來，嚴重影星殘留量大的分析。凈化——將被測農(nóng)藥與干擾物質的分離2023/6/1第十八頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日凈化要求與方法：主要取決于農(nóng)藥和樣本的性質以及最終的檢測方法，并保證具有一定的回收率。凈化方法：液-液分配法、吸附柱色譜法、固相萃取法、凝膠色譜法。2023/6/1第十九頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日（二）氣相色譜分離與分析目前農(nóng)藥殘留分析向著多類型、多殘留檢測方法發(fā)展，同一方法中同時要求檢查幾種。幾十種甚至上百種農(nóng)藥的殘留量?！捎么罂趶矫毠苤⒋篌w積進樣技術的氣相色譜分析法。2023/6/1第二十頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日農(nóng)藥殘留分析常用固定液：非極性的HP-1，HP-5或同級品中等極性的HP-1701，HP-50或同級品。有機氯農(nóng)藥和多氯聯(lián)苯：OV-17,OV-1701氨基甲酸酯殺蟲劑：SE-54有機磷農(nóng)藥：OV-1012023/6/1第二十一頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日農(nóng)藥殘留分析常用檢測器：ECDFPDNPDMSD常用檢測器通用檢測器2023/6/1第二十二頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日（三）農(nóng)藥鑒定方法單一以保留時間定性鑒定殘留農(nóng)藥并不十分可靠。往往在第一根色譜柱上所得的陽性鑒別結果應在第二根色譜質作進一步確認或至少以另一種其他方法技術作為支持。2023/6/1第二十三頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日常用確證方法質譜法——可準確鑒定化合物結構，用于實驗結果的確證。雙柱法——采用不同的色譜柱再次進行分析。衍生化法——采用小規(guī)模的化學反應，反應產(chǎn)物再通過色譜技術進行復驗。2023/6/1第二十四頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日（四）應用實例2023/6/1第二十五頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日第六章

氣相色譜法在藥物分析中的應用第三節(jié)

氣相色譜法在化學藥物分析中的應用一、化學藥物的鑒別三、有機溶劑殘留測定二、化學藥物有關物質的鑒別與檢查四、含量測定2023/6/1第二十六頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日一、化學藥物的鑒別藥物分析中色譜法鑒別實驗常采用對照品法。一般很少單獨采用GC法進行鑒別，除有機溶劑殘留測定外，含量或有關物質項下才采用GC法的化學藥品常同時進行GC法鑒別。2023/6/1第二十七頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日二、化學藥物有關物質的鑒別與檢查對已知有關物質的檢查，最常用的GC檢測器為FID。對未知有關物質的檢查，最常用的GC檢測器為MSD

GC對有關物質的分析，最關鍵的是方法的耐用性和粗放度。不同實驗室對同一樣品的檢測結果應一致，如有偏差也應在允許的范圍內(nèi)。2023/6/1第二十八頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日建立有關物質的分析方法時，除了檢出限和定量限的考察，最好在色譜系統(tǒng)的系統(tǒng)適用性中提供雜質對照、雜質混合樣品，建立色譜系統(tǒng)的評價體系。GC中對色譜參數(shù)調(diào)整范圍均有規(guī)定2023/6/1第二十九頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日三、有機溶劑殘留測定有機溶劑毒性避免使用的溶劑——為已知的致癌物質或較強潛在致癌作用的物質，對人體具有不可接受的毒性和對環(huán)境造成毒害的有毒試劑限制使用的溶劑——為已知的致癌物質或較強潛在致癌作用的物質，和對環(huán)境造成毒害的有毒試劑一般量存在對人體無害的溶劑——日攝入量低于50mg時，不需任說明溶劑限度定為5mg/L。2023/6/1第三十頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日對沒有足夠毒理學數(shù)據(jù)的有機溶劑，人三氟乙酸、三氯乙酸、石油醚、異丙醚、異辛烷、甲基四氫呋喃、甲基異丙酮、1,1-二甲氧基甲烷、1,1-二乙氧基丙烷、2,2-二乙氧基丙烷等制定殘留水平限度時給出合理解釋。測定溶劑殘留可以選擇填充柱或毛細管柱，進樣方式可以自由選擇。頂空進樣和毛細管柱成為目前溶劑殘留溶劑控制的趨勢。2023/6/1第三十一頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日

《中國藥典》（2005年版）規(guī)定測定溶劑殘留方法:

1.毛細管柱頂空進樣等溫法柱溫：40~100C載氣：氮氣，1.0~1.2mL/min頂空瓶溫度（水位溶劑）：75~85C進樣口溫度：200C檢測器：FID，250C頂空瓶平衡時間：30~60min2023/6/1第三十二頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日

2.毛細管柱頂空進樣程序升溫法柱溫：30C維持7min，升溫速率8C/min升至120C，維持15min非極性色譜系統(tǒng):極性色譜系統(tǒng):柱溫：60C維持6min，升溫速率8C/min升至100C，維持20min2023/6/1第三十三頁，共三十五頁，編輯于2023年，星期日載氣：氮氣，2.0mL/min進樣口溫度：200C檢測器：FID，250C頂空瓶溫度（水位溶