酶工程問答題

酶工程習(xí)題集第_章緒論1、發(fā)展史：1903年Henri中間絡(luò)合物學(xué)說；1913年LeonorMichaelis和MaudMenten米氏方程；DanielE.Koshland提出了誘導(dǎo)契合學(xué)說。1926年，薩母納（Sumner）提出酶的本質(zhì)是蛋白質(zhì)的觀點。1960年.雅各（Jacob）和莫若德（Monod）提出操縱子學(xué)說，1982年，切克（Cech）等人發(fā)現(xiàn)四膜蟲（Tetrahynena）細胞的26srRNA前體具有自我剪接功能（self-splicing）。核酶（Ribozyme,也稱核糖核酸酶，以區(qū)別于蛋白質(zhì)酶）；1983年阿爾徹曼（Sidney.Altman）發(fā)現(xiàn)核糖核酸酶P（RNAaseP）2、 核酸類酶（ribozyme）:具有生物催化劑所有特性，是一類由RNA組成的酶。底物有哪些？3、 酶的新概念？分類？4、 人工酶、模擬酶、化學(xué)修飾酶、克隆酶、突變酶、新酶、抗體酶第二章酶學(xué)基礎(chǔ)1、 酶促反應(yīng)的特點？優(yōu)缺點？2、 按酶促反應(yīng)性質(zhì)將生物體所有的酶分為哪六大類？如何編號？3、 終止一個酶促反應(yīng)的方法有哪些？4、 全酶的組成？按酶蛋白結(jié)構(gòu)不同分類？5、 別構(gòu)酶、別構(gòu)效應(yīng)、配體6、 活性部位（結(jié)合部位與催化部位），必需基團，活性中心的親核性基團：酸堿性基團：7、 參與蛋白類酶活性中心頻率最高的氨基酸7種？8、 酶活力單位（U）；比活力；同族酶；絲氨酸蛋白酶與巰基蛋白酶各有哪些？9、 酶活性中心基團的檢測方法有哪三種？10、 酶的pH穩(wěn)定性與溫度穩(wěn)定性如何測定？第三章酶的催化機制1、 酶高效率催化的五種機制2、 何謂鄰近與定向效應(yīng)？何謂構(gòu)象變化效應(yīng)？何謂共價催化？何謂酸堿催化？何謂微環(huán)境效應(yīng)？如何理解？第四章酶的催化動力學(xué)1、 繪制底物濃度對酶促反應(yīng)速度影響的雙曲線（標明各參數(shù)），并簡述其影響。2、 米-曼氏方程（Michaelis-Mentenequation）；中間產(chǎn)物學(xué)說3、 穩(wěn)態(tài)的含義，中心內(nèi)容。3、 繪制酶反應(yīng)過程中各物質(zhì)濃度變化曲線圖4、 如何利用雙倒數(shù)作圖法(又稱林-貝氏作圖法)求K值與V值測定5、 通過酶促動力學(xué)方法鑒別一個抑制劑對酶的抑制是可逆還是不可逆抑制作用？6、 從線性動力學(xué)模型表示式、動力學(xué)方程、米氏方程圖、雙倒數(shù)方程作圖區(qū)別競爭性抑制、非競爭性抑制作用和反競爭性抑制作用？7、 競爭性抑制、非競爭性抑制作用和反競爭性抑制的特點是什么？8、 各舉一例說明何謂Ks型不可逆抑制劑和Kcat型不可逆抑制劑(自殺性底物)？9、 酶活力、比活力、純化倍數(shù)、得率概念，計算。例：下表是對蝦幾丁質(zhì)酶的分離純化方案，請把表格中未完成的空格填好?？偟鞍琢?mg)總酶活量(u)比活力(u/mg)純化倍數(shù)得率(%)粗酶液5756.28987513.00171.551.00100.0%35%飽和硫酸胺3850.63876710.4075%飽和硫酸胺1810.50489537.10幾丁質(zhì)親和層析973.24286919.20SephadexG-100206.2589821.20DEAE32離子交換層析109.5548248.55第五章微生物發(fā)酵產(chǎn)酶1、 與酶的生物合成有密切關(guān)系的基因有哪些？2、 轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控的3種模式是什么？3、 何謂分解代謝物阻遏作用？其作用機理是什么？實質(zhì)是什么？4、 何謂酶生物合成的誘導(dǎo)作用？5、 何謂酶生物合成的反饋阻遏作用？6、 產(chǎn)酶促進劑有哪些？提高酶產(chǎn)量的措施有哪些？酶發(fā)酵生產(chǎn)中誘導(dǎo)物有哪三類？各舉一例。7、 請根據(jù)酶生物合成的調(diào)節(jié)類型提出提高生物酶產(chǎn)量的策略。8、 產(chǎn)酶細胞生長經(jīng)歷了哪四個階段？9、 四種酶生物合成的模式是什么？圖示加以區(qū)別，各有何特點？10、 影響酶生物合成模式的主要因素是什么？酶工業(yè)生產(chǎn)上，為了提高酶產(chǎn)率和縮短發(fā)酵周期，最理想的是何模式？其它合成類型的酶要如何適當調(diào)節(jié)其生產(chǎn)工藝？11、 寫出Monod(莫諾德)的生長動力學(xué)模型方程。指出方程中各參數(shù)的含義。12、 寫出宏觀產(chǎn)酶動力學(xué)方程。指出方程中各參數(shù)的含義。13、 根據(jù)不同的細胞產(chǎn)酶模式，分析產(chǎn)酶速率與細胞生長動力學(xué)的關(guān)系有何不同？14、14、第六章動植物細胞培養(yǎng)產(chǎn)酶1、 植物細胞培養(yǎng)的特點是什么？植物細胞培養(yǎng)產(chǎn)酶的工藝流程。2、 動物細胞培養(yǎng)主要用于生產(chǎn)哪些功能蛋白？3、 動物細胞的培養(yǎng)方式有哪些？培養(yǎng)基的組成成分是什么？第七章酶的提取與分離純化1、 細胞破碎方法及其原理是什么？機械破碎法與物理破碎法有哪些具體的方法？最常用的物理破碎法？化學(xué)破碎法常用的化學(xué)試劑有哪些？2、 何謂酶的抽提？酶的主要提取方法有哪些？影響提取的主要因素有哪些？從動物組織中提取胰島素為何采用6.8%乙醇溶液并用草酸調(diào)溶液的pH為2.5?3.0進行提?。棵冈诔樘釙r經(jīng)常添加一些酶的保護劑，具體有哪些？3、 沉淀分離方法有哪些？何謂分段鹽析法與Ks分段鹽析、。分段鹽析？硫酸銨鹽析法有何優(yōu)、缺點？需注意哪些問題？硫酸銨濃度的表示方法是什么？4、 根據(jù)下表的硫酸銨分級試驗結(jié)果，如何根據(jù)不同情況選擇硫酸銨飽和度的范圍？表硫酸銨分級試驗批次百分飽和度范圍/%酶沉淀/%蛋白質(zhì)沉淀/%純化倍數(shù)第一次0?4042540?6062222.860?8032321.0第二次0?4563245?7090382.4第三次0?48103548?6575253.04、 有機溶劑沉淀法有哪些優(yōu)點與缺點？5、 何謂離心分離？按離心機轉(zhuǎn)速的不同離心機可分為哪幾類？按使用溫度分為哪幾類？超速離心機的最大轉(zhuǎn)速可達多少？最大離心力達多少？在超速離心中，離心方法有哪些？密度梯度離心的梯度介質(zhì)有哪些？使用最多的是什么？等密度梯度離心的特點以及常用的介質(zhì)是什么？密度梯度的制備主要采用什么設(shè)備？6、 在離心機及轉(zhuǎn)子定下后，10000r/min離心10min,計算若用5000r/min需離心的時間多少？7、 相對離心力RCF與轉(zhuǎn)速n有何關(guān)系？8、 何謂膜分離技術(shù)？主要包括哪些？何謂超濾？主要用途是什么？何謂反滲透？有何特點與用途？9、 何謂層析分離？最基本的特征是什么？按機理來分為哪幾類？酶的分離純化中，吸附層析的吸附劑常用有哪些？何謂分配層析與分配系數(shù)？何謂離子交換層析？離子交換劑的特點？陰、陽離子交換樹脂有何不同？如何正確使用？離子交換纖維素主要有哪些？如何根據(jù)酶分子帶電情況不同選擇不同離子交換劑？梯度洗脫有哪兩種方法？舉例說明離子交換劑如何轉(zhuǎn)型？如何洗脫離子交換柱上的陽離子B+？10、 凝膠層析的基本原理是什么？何謂外水體積Vo與峰洗脫體積Ve？葡聚糖商品名是什么？有何特點？主要用途？三種型號的葡聚糖凝膠SephadexG-50、G-75、G-100、G-150、G-200，其膨脹度從大到小的順序？凝膠孔徑從大到小的順序？11、 何謂親和層析？有何特點？主要用途？有哪幾種方法？何謂免疫親和層析？何謂配基？12、 何謂電泳？聚丙烯酰胺凝膠電泳的原理是什么？催化體系中化學(xué)聚合與光聚合過程有何不同？不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳包含三個效應(yīng)？13、 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳的原理？蛋白質(zhì)分子的遷移速度主要取決于什么？如何用來測定蛋白質(zhì)分子量？14、 為什么SDS電泳會不受蛋白質(zhì)所帶電荷及分子性狀的影響？15、 凝膠材料主要有哪些？選擇凝膠主要是依據(jù)什么？適用于分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)和多糖的分離純化的凝膠是什么？16、 何謂膜分離技術(shù)？在酶的生產(chǎn)中有何應(yīng)用？17、 何謂等電聚焦電泳？主要用途？18、 萃取的方法有哪些？何謂超臨界萃??？何謂反膠束萃取與反膠束？19、 濃縮方法有哪些？20、 如何檢查一種酶制劑是否達到了純的制劑？試用所學(xué)過的知識加以論述。21、 有三種酶蛋白，其相對分子質(zhì)量和等電點各不相同，試設(shè)計一個方案來分離純化這三種蛋白質(zhì)。22、 今欲生產(chǎn)糖化酶結(jié)品產(chǎn)品，試擬出合理的工藝步驟，并說明下游工程的主要工藝條件。第八章酶分子修飾1、 酶分子改造、模擬酶、酶的化學(xué)修飾、抗體酶的概念2、 金屬離子置換修飾的主要作用與置換步驟是什么？3、 何謂大分子結(jié)合修飾？常見的水溶性大分子修飾劑有哪些？4、 PEG有何特點？常用的修飾劑是什么？PEG化學(xué)修飾時則何物質(zhì)為修飾劑?5、 大分子結(jié)合修飾后酶性質(zhì)主要發(fā)生哪些變化？何謂分子內(nèi)交聯(lián)修飾？6、 以L-19IVS的形成為例說明何謂核苷酸鏈剪切修飾？7、 下列化合物是氨基酸哪些基團的修飾劑？DNFB；TNBS；炭二亞胺；DTT；巰基乙醇；TNM；碘乙酸；DPC；NBS；丁二酮；戊二醛；已二胺；DTNB8、 氨基酸置換修飾的作用有哪些？各舉一例說明。9、 何謂定點突變技術(shù)？其特點是什么？主要運用在哪方面？10、 為什么要進行酶分子修飾，酶分子修飾都能解決哪些問題？第九章固定化酶1、 何謂固定化酶？固定化酶的制備原則是什么？2、 比較吸附法、離子結(jié)合法、共價結(jié)合法、包埋法和交聯(lián)法五種固定化酶方法的優(yōu)缺點？包埋法包括哪兩種？最常用的包埋法是什么？共價結(jié)合法主要有哪些？3、 固定化對酶穩(wěn)定性有哪些影響？4、 固定化酶與游離酶比較有哪些優(yōu)缺點？5、 固定化植物細胞有哪些特點？6、 固定化動物細胞有哪些特點？7、 何謂轉(zhuǎn)瓶與微載體？各有何特點？第十章酶的非水相催化1、 非水相催化、微水介質(zhì)（體系）、非水酶學(xué)、超臨界介質(zhì)、正膠束、反膠束、最適水量、水活度、必需水、極性系數(shù)lgP、手性化合物、pH印記，2、 非水介質(zhì)中的生物催化反應(yīng)特點有哪些？3、 有機介質(zhì)反應(yīng)體系有哪些？4、 簡述水活度對有機介質(zhì)中酶催化的影響？5、 簡述有機溶劑極性系數(shù)lgP對有機介質(zhì)中酶催化的影響？6、 如何理解酶在有機介質(zhì)中的催化特性？酶在有機介質(zhì)中有哪些酶學(xué)特性發(fā)生改變？7、 黏合劑酚樹脂、導(dǎo)電聚合物聚苯胺、甜味劑天苯肽是如何在非水相中催化合成的？8、 非水介質(zhì)酶催化反應(yīng)的優(yōu)點有哪些？9、 酶在非水介質(zhì)中的結(jié)構(gòu)性質(zhì)發(fā)生怎樣的變化？10、 非水介質(zhì)中酶催化反應(yīng)是否在無水環(huán)境中進行，為什么？11、 不同有機溶劑對酶的非水