地表水浮游藍(lán)藻監(jiān)測技術(shù)規(guī)范

地表水浮游藍(lán)藻監(jiān)測技術(shù)規(guī)范范圍本文件規(guī)定了地表水浮游藍(lán)藻監(jiān)測的術(shù)語和定義、樣品采集、樣品處理與保存、藍(lán)藻種屬鑒定及密度分析、質(zhì)量保證和質(zhì)量控制等技術(shù)要求。本文件適用于河流、湖泊、水庫等水體中浮游藍(lán)藻的監(jiān)測。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T14581水質(zhì)湖泊和水庫采樣技術(shù)指導(dǎo)HJ/T91地表水和污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范HJ493水質(zhì)樣品的保存和管理技術(shù)規(guī)定術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。

浮游藻類phytoplankton在水中營浮游生活的藻類，包括藍(lán)藻門、綠藻門、硅藻門、金藻門、黃藻門、甲藻門、隱藻門和裸藻門等。[來源：SL733—2016，3.1，有修改］

浮游藍(lán)藻planktoniccyanobacteria在水中營浮游生活的藍(lán)藻門藻類，含有葉綠素、能夠進(jìn)行光合作用、呈革蘭氏陰性。[來源：中國淡水藻類——系統(tǒng)、分類及生態(tài)，第二章，有修改］

藍(lán)藻密度cyanobacterialdensity單位體積中藍(lán)藻門藻類的數(shù)量，單位為cells/L。[來源：SL733—2016，3.3，有修改］

優(yōu)勢藍(lán)藻屬（種）dominantgenus（species）ofcyanobacteria在浮游藻類群落中數(shù)量占比大于15?%的藍(lán)藻屬（種）。[來源：SL733—2016，3.2，有修改］樣品采集采樣設(shè)備閉管式采樣器：應(yīng)符合GB/T14581的要求。桿式采樣器：將閉管式采樣器放置于可伸展的1.5?m～2?m的長桿末端。具刻度棕色磨口玻璃瓶：1?L。溶解氧儀：HJ506。pH計：HJ1147。濁度儀：HJ1075。溫度計：GB/T13195。塞氏盤：?20?cm，黑白色相間，配重錘及帶刻度的繩索等。定位系統(tǒng)。照相機(jī)。采樣點位布設(shè)采樣點位的設(shè)置與確定按照GB/T14581和HJ/T91的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行，與水質(zhì)監(jiān)測一致。采樣點位應(yīng)能代表整個水體，能反映調(diào)查水域藍(lán)藻的實際情況。應(yīng)保持采樣點位的長期一致。當(dāng)藍(lán)藻沿岸邊積聚形成浮渣時，應(yīng)在浮渣積聚處設(shè)置采樣點。采樣頻次與時間采樣頻次應(yīng)與水質(zhì)監(jiān)測同步。常規(guī)監(jiān)測的采樣頻次按照GB/T14581和HJ/T91的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。也可根據(jù)監(jiān)測目的確定：每月采樣1次；每季度采樣1次；豐水期、平水期和枯水期各采樣1次。當(dāng)水體藍(lán)藻密度大于200萬cells/L時，應(yīng)增加采樣監(jiān)測頻次。同一點位的采樣應(yīng)在相同時段進(jìn)行，并記錄采樣時間。采樣方法船只采樣適用于河流、湖泊和水庫水體較深區(qū)域。應(yīng)用閉管式采樣器進(jìn)行采樣。岸線采樣適用于河流、湖泊和水庫沿岸帶。應(yīng)用桿式采樣器進(jìn)行采樣。橋梁采樣適用于有橋梁的監(jiān)測斷面。采樣時應(yīng)將繩子一端系在閉管式采樣器上，另一端安全而牢靠地系在橋上固定的位置。應(yīng)使用閉管式采樣器或桿式采樣器采集水樣。采樣體積應(yīng)不少于1?L。樣品常規(guī)監(jiān)測的采集深度應(yīng)符合HJ/T91的要求，與水質(zhì)監(jiān)測一致；發(fā)現(xiàn)明顯水華（肉眼可見浮渣）時，在表層下0.5?m處采集水樣。所采集的樣品應(yīng)不含浮渣。藻類樣品采集應(yīng)安排在其他樣品采集之前，避免生物類群在采樣前受到擾動，并及時在現(xiàn)場進(jìn)行固定，固定及保存方法見第5章。樣品采集過程中的安全保護(hù)應(yīng)符合GB/T14581的要求。樣品標(biāo)識采樣瓶外側(cè)應(yīng)標(biāo)識采樣點信息、采樣時間以及采樣人姓名。采樣表應(yīng)記錄采樣時間、點位名稱、采樣工具等（見附錄A）。樣品標(biāo)識應(yīng)符合HJ493的要求。樣品處理與保存樣品處理使用X哥試劑固定藻類樣品，其制備方法為：60?g碘化鉀（分析純）加入1?L去離子水中，再加入40?g碘（分析純），充分?jǐn)嚢枋蛊淙芙?，靜置24?h以上。配制好的X哥試劑應(yīng)儲存于棕色磨口玻璃瓶避光保存。每升樣品中應(yīng)加入約15?mLX哥試劑對藻類進(jìn)行固定。對于發(fā)生藍(lán)藻水華的水樣，每升水樣中酌情再增加3?mL～5?mLX哥試劑。樣品保存樣品應(yīng)4?℃冷藏、避光保存，且在24?h內(nèi)密閉運輸至實驗室。X哥試劑固定后的樣品低溫（4?℃左右）避光保存不得超過12個月，儲存超過10周的樣品應(yīng)定期檢查X哥試劑的損耗情況，若樣品顏色變淺，則應(yīng)向樣品中適當(dāng)補充少量X哥試劑，直到樣品的顏色恢復(fù)為黃褐色。藍(lán)藻種屬鑒定及密度分析基本流程藍(lán)藻樣品的種屬鑒定及密度分析按照附錄B所示流程進(jìn)行。實驗室儀器設(shè)備虹吸管：?2?mm～3?mm。玻璃量杯：50?mL。螺口玻璃試管：10?mL。微量移液管：100?μL。塑料滴管：3?mL。光學(xué)顯微鏡：物鏡4×、10×、40×、100×，目鏡10×或15×。血球計數(shù)板：1/400?mm2，容量0.1?mm3。計數(shù)框：20?mm×20?mm，容量0.1?mL。超聲波細(xì)胞破碎儀：功率250?W，工作頻率20?kHz～25?kHz，破碎容量：0.5?mL～150?mL。實驗室預(yù)處理樣品沉淀和濃縮的具體方法為：藻類樣品在采樣瓶中靜置沉淀24?h后，用虹吸管于水面下5mm處抽取上清液，直至藻類沉淀物體積約40?mL。將藻類沉淀物轉(zhuǎn)入玻璃量杯中，用少許上清液沖洗采樣瓶2次～3次，將沖洗水一并轉(zhuǎn)入玻璃量杯中。玻璃量杯中的藻類沉淀物沉淀24?h后，用塑料滴管吸取上清液，保留約10?mL藻類沉淀物轉(zhuǎn)移到螺口玻璃試管中，靜置定容后用于種屬鑒定及密度分析。顯微鏡校準(zhǔn)顯微鏡的校準(zhǔn)方法參見GB/T2985。玻片標(biāo)本制備將藻類樣品充分搖勻后，用塑料滴管（或微量移液管）取樣品置血球計數(shù)板或計數(shù)框內(nèi)，蓋上蓋玻片，制成玻片標(biāo)本，計數(shù)室或者計數(shù)框內(nèi)不得有氣泡。藍(lán)藻種屬鑒定及優(yōu)勢屬（種）確定參考相關(guān)藻種形態(tài)學(xué)書目在光學(xué)顯微鏡下對玻片標(biāo)本中的藍(lán)藻進(jìn)行種屬鑒定。優(yōu)勢個體或群體應(yīng)鑒定到種，其他個體或群體至少鑒定到屬。在鑒定記錄表中記錄藍(lán)藻種名、數(shù)量，并且記錄其他藻類的數(shù)量（附錄C）。鑒定藻類數(shù)量應(yīng)至少為200個。藻類鑒定書目見附錄D。書目中未包含的湖泊偽魚腥藻及拉氏擬柱孢藻見附錄E。藍(lán)藻屬（種）所占比例： （AUTONUM）式中：P——藍(lán)藻某屬（種）所占比例；A藍(lán)——鑒定過程中藍(lán)藻某屬（種）細(xì)胞數(shù)量；A總——鑒定過程中藻細(xì)胞總數(shù)量。當(dāng)P＞15?%時，該藍(lán)藻屬（種）屬于優(yōu)勢藍(lán)藻屬（種）。藍(lán)藻密度分析基本要求采用光學(xué)顯微鏡對玻片標(biāo)本進(jìn)行總藻及藍(lán)藻密度分析。當(dāng)某些藍(lán)藻（例如微囊藻屬）以群體形式存在時，若群體大小相對均勻，可通過確定群體的平均細(xì)胞數(shù)再進(jìn)行計數(shù)；若群體大小不均勻，應(yīng)對藍(lán)藻群體進(jìn)行解團(tuán)（如超聲解團(tuán)）后再進(jìn)行計數(shù)。對絲狀藍(lán)藻進(jìn)行計數(shù)前，應(yīng)計算其藻絲和藻細(xì)胞平均長度。大于200?μm的藻種（如顫藻）應(yīng)在低放大倍數(shù)（物鏡10×）下計數(shù)，小于200?μm的藻種（如銅綠微囊藻）應(yīng)在較高放大倍數(shù)（物鏡40×）下計數(shù)。每個樣品應(yīng)重復(fù)計數(shù)2次～3次，每兩次結(jié)果的絕對偏差不得大于15?%，否則應(yīng)繼續(xù)取樣計數(shù)。血球計數(shù)板計數(shù)法將玻片標(biāo)本放置于載物臺上，靜置3min～5min后，對左上、左下、右上、右下和中心五個中格進(jìn)行計數(shù)（見圖1）。在計數(shù)過程中，應(yīng)不斷調(diào)整焦距，保證藻細(xì)胞無遺漏。血球計數(shù)板計數(shù)法當(dāng)藻體一半以上處于計數(shù)視野內(nèi)則計數(shù)；當(dāng)藻體少于一半在計數(shù)視野內(nèi)，計上不計下，計左不計右。每個中格藻數(shù)量應(yīng)在3～5范圍內(nèi)；如不在此范圍，應(yīng)對水樣進(jìn)行適當(dāng)?shù)臐饪s或稀釋以保證計數(shù)的準(zhǔn)確性。把計數(shù)所得結(jié)果按下式換算成總藻密度： （AUTONUM）式中：N總——每升水中藻細(xì)胞總數(shù)量，cells/L；A總——五個中格中藻細(xì)胞總數(shù)量；V——1?L水樣經(jīng)濃縮后的樣品定容體積，mL；k——計數(shù)過程中稀釋倍數(shù)；若濃縮n倍，則k=1/n。計數(shù)框計數(shù)法將玻片標(biāo)本放置于載物臺上，靜置3min～5min后，依照目鏡行格法，間隔選取四個“半行”（見圖2）進(jìn)行計數(shù)。在計數(shù)過程中，應(yīng)不斷調(diào)整焦距，保證藻細(xì)胞無遺漏。當(dāng)藻體一半以上處于計數(shù)視野內(nèi)則計數(shù)；當(dāng)藻體少于一半在計數(shù)視野內(nèi)，計上不計下，計左不計右。一個“半行格”內(nèi)的藻數(shù)量應(yīng)在75～250范圍內(nèi)；如不在此范圍，應(yīng)對水樣進(jìn)行適當(dāng)?shù)臐饪s或稀釋以保證計數(shù)的準(zhǔn)確性。計數(shù)框半行格計數(shù)法把計數(shù)所得結(jié)果按下式換算成總藻密度： （AUTONUM）式中：N總——每升水中藻細(xì)胞總數(shù)量，cells/L；A總——四個“半行格”中藻細(xì)胞總數(shù)量；V——1L水樣經(jīng)濃縮后的樣品定容體積，mL；k——計數(shù)過程中稀釋倍數(shù)；若濃縮n倍，則k=1/n。藍(lán)藻密度分析利用藍(lán)藻屬（種）占比及總藻密度按下式計算藍(lán)藻屬（種）密度： （AUTONUM）式中：N藍(lán)——每升水中藍(lán)藻某屬（種）細(xì)胞數(shù)量，cells/L；N總——每升水中藻細(xì)胞總數(shù)量，cells/L；P——藍(lán)藻某屬（種）所占比例。質(zhì)量保證和質(zhì)量控制樣品采集質(zhì)量保證與質(zhì)量控制采樣過程采樣設(shè)備應(yīng)處于良好的運行狀態(tài)，日常應(yīng)進(jìn)行常規(guī)檢查、維護(hù)和校準(zhǔn)。應(yīng)保證所有采樣設(shè)備的清潔。對于泥沙較多的點位，在進(jìn)行樣品固定前應(yīng)靜置沉淀3?min～5?min去除泥沙。運輸過程運輸過程中應(yīng)保證樣品無破損、無污染。運輸過程應(yīng)嚴(yán)格按照5.2.1的要求執(zhí)行。運輸前后應(yīng)保證標(biāo)簽的完整性，若有損壞應(yīng)及時進(jìn)行替換。實驗室質(zhì)量保證與質(zhì)量控制樣品的交接與記錄樣品交接時，接收人員應(yīng)檢查樣品狀態(tài)并進(jìn)行記錄。樣品應(yīng)有唯一性標(biāo)識及檢測過程中的狀態(tài)標(biāo)識。藍(lán)藻種屬鑒定、密度分析實驗室應(yīng)在以下幾方面加強內(nèi)部質(zhì)量控制：實驗室定期隨機(jī)抽取樣品，由另一名實驗室檢測人員或資深藻類鑒定專家進(jìn)行重復(fù)鑒定，兩次鑒XX果的百分比差異應(yīng)小于等于50?%。百分比差異計算按下式： （AUTONUM）式中：a——原檢測人員記錄的種（或?qū)伲┧{(lán)藻數(shù)量占藍(lán)藻總數(shù)量的比例；b——重復(fù)檢測人員記錄的同一種（或?qū)伲┧{(lán)藻數(shù)量占藍(lán)藻總數(shù)量的比例。新種、新記錄種及已有種屬的新形態(tài)必須留出典型、完好的樣品；對新種、新記錄種和已有種屬的新形態(tài)應(yīng)保存對應(yīng)的圖片信息，并附上詳細(xì)文字描述，包括鑒定依據(jù)及種屬特征描述；實驗室應(yīng)當(dāng)保存并更新相關(guān)的分類學(xué)文獻(xiàn)。數(shù)據(jù)記錄及保存記錄檢測過程中所取得的相應(yīng)數(shù)據(jù)，包括檢測人、檢測時間、樣品信息、原始數(shù)據(jù)，描述從原始數(shù)據(jù)到最終結(jié)果的計算過程、數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換步驟，并進(jìn)行歸檔保存?？蛇M(jìn)行藍(lán)藻拍照的實驗室，應(yīng)對新種、優(yōu)勢藍(lán)藻種、同一藍(lán)藻的不同形態(tài)及不同角度進(jìn)行拍照存底，并歸檔保存。留樣實驗室分析剩余的藻類樣品至少保留3個月，有條件的實驗室可在4?℃冷藏條件下保留1年。

（資料性）

藍(lán)藻樣品采樣表在采集藻類樣品時，填寫表A.1。藍(lán)藻樣品采樣表河（湖、庫）名稱采樣時間點位名稱點位坐標(biāo)固定劑固定劑加入量樣品量采樣工具透明度/m水深/m水溫/℃溶解氧/（mg/L）濁度/NTUpH值采樣人記錄人備注記錄風(fēng)向、是否可見浮渣、泥沙情況、現(xiàn)場干擾（如來往船只引起水力擾動）等信息

（規(guī)范性）

藍(lán)藻鑒定及計數(shù)流程圖藍(lán)藻鑒定及計數(shù)按照圖B.1所示流程進(jìn)行。藍(lán)藻鑒定及計數(shù)流程圖

（資料性）

藍(lán)藻鑒定記錄表在進(jìn)行藍(lán)藻種屬鑒定時，填寫表C.1。藍(lán)藻鑒定記錄表分析日期分析人屬種樣品（需記錄采樣時間、采樣點位等）樣品1樣品2樣品3微囊藻屬銅綠微囊藻惠氏微囊藻水華微囊藻其他顫藻屬巨顫藻阿氏顫藻兩棲顫藻其他平裂藻屬銀灰平裂藻優(yōu)美平裂藻微小平裂藻其他偽魚腥藻屬湖泊偽魚腥藻其他…………其他門類總數(shù)量備注可畫“正”字來記錄對應(yīng)藻種的數(shù)量。對于圖譜未有或無法確定的藍(lán)藻種，應(yīng)做好圖片保存。

（資料性）

藻種鑒定書目胡鴻鈞.水華藍(lán)藻生物學(xué)[M].XX:科學(xué)出版社，2011.胡鴻鈞，魏印心.中國淡水藻類——系統(tǒng)、分類及生態(tài)[M].XX:科學(xué)出版社，2006.胡鴻鈞，李堯英，魏印心等.中國淡水藻類[M].XX:科學(xué)技術(shù)出版社，1980.

（資料性）

藻種鑒定書目中未包括的藍(lán)藻種形態(tài)特征及圖譜藻種鑒定書目中未包含的湖泊偽魚腥藻及拉氏擬柱孢藻見圖E.1和圖E.2。偽魚腥藻屬（PseudanabaenaKomárek1992）形態(tài)特征細(xì)胞常為兩端鈍圓的圓柱狀，長大于寬，頂端具或不具氣囊。藻體呈絲狀；藻絲單生或聚合呈很細(xì)的、膠狀的墊，直線略呈波狀或彎曲；無分枝，寬0.8

μm～3?μm；由圓柱形細(xì)胞組成，細(xì)胞橫壁處常略收縊，幼絲體橫壁不清晰，無硬的鞘，有時具薄的、無色的鞘，藻絲末端不漸細(xì)，頂端細(xì)胞有時為圓柱形，有時運動（顫動）。常見種形態(tài)特征及鏡檢圖偽魚腥藻屬常見種為湖泊偽魚腥藻（Pseudanabaenalimnetica）。毛狀體單生，直的或彎曲的，沒有膠鞘，1.2?μm～2.0?μm寬，相鄰細(xì)胞間橫壁明顯，無縊縮或略縊縮；細(xì)胞呈圓柱狀，邊緣呈圓形，長4.5?μm～7.0?μm，不存在氣泡。湖泊偽魚腥藻具體形態(tài)特征見圖E.1。湖泊偽魚腥藻鏡檢圖擬柱孢藻屬（CylindrospermopsisKütz1843）形態(tài)特征擬柱孢藻藻絲末端具異形胞，呈尖細(xì)狀或鈍圓狀，具偽空泡。厚壁孢子出現(xiàn)在藻絲一端或兩端，距異形胞1個～3個營養(yǎng)細(xì)胞。常見種形態(tài)特征及鏡檢圖擬柱孢藻屬常見種為拉氏擬柱孢藻（Cylindrospermopsisraciborskii）。單根絲體，偽空泡多，藻絲筆直不彎曲，藍(lán)綠色，相鄰的細(xì)胞壁沒有縊縮。藻絲長度變化極大，范圍為17?μm～1?220?μ