小分子肝素的制備

小分子肝素的制備第一頁(yè)，共十二頁(yè)，編輯于2023年，星期二目錄概述1制備方法2酶活測(cè)定方法及分子量測(cè)定方法3實(shí)驗(yàn)進(jìn)度及問題4第二頁(yè)，共十二頁(yè)，編輯于2023年，星期二1概述肝素（Unfractionatedheparin,UFH）作為抗凝劑和抗血栓藥在臨床上使用已有60余年，但長(zhǎng)期使用會(huì)導(dǎo)致出血和血小板減少等不良現(xiàn)象。低分子肝素(Low-molecular-weightheparin,LMWH)是由普通肝素裂解而來(lái)。與普通肝素比較，其抗血栓能力較強(qiáng)而抗凝血能力較低，在其抗血栓能力形成時(shí)對(duì)凝血系統(tǒng)的影響較小。另外低分子肝素還具有分子量小、生物利用度高、體內(nèi)半衰期長(zhǎng)、出血傾向小等特點(diǎn)，因此低分子肝素的制備具有重要的意義。第三頁(yè)，共十二頁(yè)，編輯于2023年，星期二

根據(jù)其末端鏈的差異和制備方法的不同，低分子肝素主要分為八種。平均分子量制備方法FXa/FⅡa的比例末端鏈那屈肝素依諾肝素達(dá)肝素舍托肝素亭扎肝素瑞維肝素阿地肝素帕肝素45003500-50004000-60004500-80004900400060005000亞硝酸降解乙醇分級(jí)苯甲化并堿降解亞硝酸降解凝膠過濾亞硝酸異戊酯降解肝素酶降解亞硝酸降解過氧化氫降解過氧化氫降解3.63.82.04.21.95.01.92.02，5-脫水-D-甘露糖還原末端4，5-不飽和糖醛酸非還原末端2，5-脫水-D-甘露糖還原末端2，5-脫水-D-甘露糖還原末端4，5-不飽和糖醛酸非還原末端2，5-脫水-D-甘露糖還原末端不穩(wěn)定的糖苷鍵不穩(wěn)定的糖苷鍵第四頁(yè)，共十二頁(yè)，編輯于2023年，星期二2制備方法化學(xué)裂解法亞硝酸降解法、過氧化氫降解法、β-消除降解法和其它化學(xué)降解法制備方法物理分離法有機(jī)溶劑分級(jí)沉淀法、凝膠色譜法、親和色譜法、離子交換色譜法和超濾法（不適用與工業(yè)化生產(chǎn)）酶解法肝素酶第五頁(yè)，共十二頁(yè)，編輯于2023年，星期二2.1.1亞硝酸降解法肝素鈉溶液降解液中和液沉淀低分子肝素2.1化學(xué)降解法1%醋酸PH2.3-3.0亞硝酸鈉-5～30℃，3.5h氫氧化鈉中和PH6.5-7.0無(wú)水乙醇丙酮脫水，干燥該解聚肝素的過程受溫度、溶液pH值、亞硝酸鹽的濃度及降解時(shí)間的影響較大。

第六頁(yè)，共十二頁(yè)，編輯于2023年，星期二2.1化學(xué)降解法2.1.2過氧化氫降解法

肝素鈉溶液溶液反應(yīng)液濃縮液中和液沉淀低分子肝素

該法制備LMWH

的過程也主要受反應(yīng)的溫度、pH值和過氧化氫濃度的影響

乙酸鈉PH7.8抗壞血酸、乙酸銅水溶液PH7.8邊攪拌邊加入過氧化氫PH7.8，40℃，24h真空濃縮EDTA鈉鹽PH6.5-6.7無(wú)水甲醇干燥第七頁(yè)，共十二頁(yè)，編輯于2023年，星期二2.1化學(xué)降解法2.1.3β-消去降解法β-消除降解法包括肝素季銨化和降解兩步處理。肝素的季銨鹽和鹵代烴或鹵代芐基化合物在二氯甲烷或二甲基甲酰胺中可以發(fā)生酯化反應(yīng),生成的肝素酯可在堿性條件下水解成LMWH。肝素解聚程度可由酯化率，堿性條件或酯的類型決定。2.1.4其它化學(xué)降解法除亞硝酸降解、β-消除降解法和過氧化氫降解這三種工業(yè)上用來(lái)制備LMWH的化學(xué)方法以外，還可采用高碘酸降解、次氯酸降解、γ-照射和硫酸一氯磺酸降解等幾種方法制備LMWH。這幾種制備方法目前沒有其投入工業(yè)化生產(chǎn)的報(bào)道。第八頁(yè)，共十二頁(yè)，編輯于2023年，星期二2.1化學(xué)降解法優(yōu)點(diǎn)：化學(xué)裂解法工藝簡(jiǎn)單，成本低廉，適宜工業(yè)化生產(chǎn)。缺點(diǎn)：化學(xué)裂解法在裂解過程中容易導(dǎo)致硫酸基丟失ATlll一結(jié)合部位減少，同時(shí)其在裂解過程中易引入有毒物污染環(huán)境。第九頁(yè)，共十二頁(yè)，編輯于2023年，星期二2.2酶解法肝素的酶法降解己經(jīng)被用作分析肝素的結(jié)構(gòu)和制備LMWH。肝素酶是能特異性的裂解肝素和類肝素主鏈糖苷鍵的酶，最初是從肝素黃桿菌（Flavobacteriumheparinum）中發(fā)現(xiàn)并分離。后在一些其它的微生物和真核生物中也有發(fā)現(xiàn)，如擬桿菌屬、棒桿菌屬和芽孢桿菌屬等幾種，真核生物的霉菌、胎盤、胸腺、血小板等中均有發(fā)現(xiàn)。肝素酶主要用于低分子肝素生產(chǎn)和鏈上精確結(jié)構(gòu)的研究，現(xiàn)在市場(chǎng)上肝素酶價(jià)格昂貴且都是肝素黃桿菌肝素酶，這是由于分離肝素酶穩(wěn)定性差及產(chǎn)量不高所造成的。第十頁(yè)，共十二頁(yè)，編輯于2023年，星期二2.2酶解法微生物方法構(gòu)建高效表達(dá)且不易產(chǎn)生包涵體的基因工程菌基因工程方法相較化學(xué)裂解法，酶解法裂解環(huán)境溫和、對(duì)環(huán)境無(wú)污染，但目前市場(chǎng)上售賣肝素酶，價(jià)格昂貴，且均是肝素黃桿菌肝素酶。為了降低肝素酶的價(jià)格，可嘗試以下三條途徑：篩選新