藥物分析藥物的含量測定方法與驗證詳解演示文稿

藥物分析藥物的含量測定方法與驗證詳解演示文稿當前第1頁\共有58頁\編于星期日\14點（優(yōu)選）藥物分析藥物的含量測定方法與驗證當前第2頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo前言藥物的含量測定化學、物理學、生物學、微生物學方法基礎在規(guī)定條件下選用適當微生物測定某物質(zhì)含量的方法。被測定的物質(zhì)可以是某些生物生長所必需的維生素、氨基酸等，也可以是抑制某些微生物生長的抗生素、農(nóng)藥等。常使用的有液體稀釋法和固體平板擴散法。

利用某些生物對某些物質(zhì)如維生素、氨基酸)的特殊需要，或?qū)δ承┪镔|(zhì)如激素、抗生素、藥物等)的特殊反應來定性、定量測定這些物質(zhì)的方法?；瘜W反應如UV光吸收特性、濁度當前第3頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo前言藥物的含量測定基于化學或物理學原理的含量測定。分兩類基于生物學原理的效價測定?；A生物檢定法，微生物檢定法，酶法。目標本章的目標：含量測定。P40：效價測定方法：凡以生物學方法或者酶學方法對藥品中的特定成分以標準品為對照，作量反應平行線測定方法進行的生物活性（活力）測定量反應平行線測定方法：同時測定供試品和標準品的劑量反應曲線，且兩條反應線必須具有平行性，即供試品和標準品的活性只有量的區(qū)別，并無質(zhì)的區(qū)別當前第4頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo前言藥物的含量測定容量分析法三種分析方法光譜分析法色譜分析法特點操作簡單、結果準確，耐用性高，但專屬性差特點特點簡便快速、靈敏度高，有一定的準確度，但專屬性稍差靈敏度與專屬性都高，有一定的準確度，但結果需要對照品適用于準確度與精確度要求較高的樣品測定適用于靈敏度要求較高，樣本量較大的分析項目適用于專屬性和靈敏度要求較高的復雜樣品當前第5頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第一節(jié)定量分析方法的分類與特點容量分析法定義將已知濃度的滴定液（標準物質(zhì)溶液），由滴定管滴加到被測藥物的溶液中，直至滴定液與被測藥物反應完全（通過適當?shù)姆椒ㄖ甘荆缓蟾鶕?jù)滴定液消耗的濃度和被消耗的體積，按化學計量關系式計算出被測藥物的含量。亦稱滴定法通過指示劑顏色變化，或者電子設備的電位或電流突變來指示滴定終點滴定終點和計量點不一致，就會引入滴定誤差，應該盡量避免。特點適用范圍1、方法簡便易行：所用儀器價廉易得，操作簡便快速廣泛應用于化學原料的測定，較少應用于藥物制劑的測定2、方法耐用性高：影響測定的試驗條件與環(huán)境因素少3、測定結果準確：誤差低于0.2%，滿足準確度高樣品4、方法專屬性差：對相近雜質(zhì)干擾缺少選擇，適用于主成分含量較高的樣品分析?當前第6頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第一節(jié)定量分析方法的分類與特點容量分析法有關計算滴定度每1ml規(guī)定濃度的滴定液所相當?shù)谋粶y藥物質(zhì)量。《中國藥典》用毫克（mg）表示。例如用碘量法測定維生素C的含量時，《中國藥典》規(guī)定：每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相當于8.806mg的維生素C（C2H8O6）當前第7頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第一節(jié)定量分析方法的分類與特點被測藥物滴定液容量分析法有關計算滴定度計算用B來滴定A滴定液反應的質(zhì)量被測藥物反應的質(zhì)量被測藥物的摩爾質(zhì)量滴定液的摩爾質(zhì)量當前第8頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第一節(jié)定量分析方法的分類與特點容量分析法有關計算滴定度計算用B來滴定A滴定液待測液等于1ml濃度乘體積=nB計算有一個從質(zhì)量到物質(zhì)的量，再到濃度再到滴定度的轉(zhuǎn)變過程濃度mB當前第9頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點示例一計算Vc的滴定度T碘量法測定Vc含量[M(C6H6O6)=176.13]，C(I2)=0.05mol/LMb=0.05mol/L11MA=176.13當前第10頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點示例二異煙肼的滴定度溴酸鉀法測定異煙肼含量[M(C6H7N3O)=137.14]，C溴酸鉀=0.01667mol/Lab當前第11頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點直接滴定法間接滴定法直接滴定法在實際工作中，滴定液的濃度可能與藥典規(guī)定的濃度并不一致，所以應該進行校正當前第12頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點直接滴定法的含量計算方法直接讀取藥典規(guī)定自己標定取樣量當前第13頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點間接滴定法不直接對待測物進行滴定，而采用間接途徑滴定生成物滴定法剩余量滴定法被測藥物與化合物A作用生成化合物B，再用滴定液滴定化合物B也稱回滴法，本法先加入定量過量滴定液A與藥物作用，再用滴定液B與剩余的滴定液A反應，然后再進行含量計算當前第14頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點間接滴定法的生成物滴定法注意滴定度T的計算先計算T再計算含量請看下例正確求a和b當前第15頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點示例三葡萄糖酸銻鈉的含量測定0.3g供試品＋水100ml＋鹽酸15ml＋碘化鉀試液10ml密塞，振搖后暗處放置10min碘量法Sb5+——2S2O32-本法先用葡萄糖酸銻鈉與碘離子反應生成碘，再用碘與硫代硫酸鈉反應生成碘離子，相當于是用硫代硫酸鈉在滴定葡萄糖酸銻鈉，因此要找出它們兩者的量反應關系，也就是a和b滴定度T的計算示例如下當前第16頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點間接滴定法的生成物滴定法注意滴定度T的計算請讀取請校正當前第17頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點間接滴定法的剩余量滴定法也稱回滴法，本法先加入定量過量滴定液A與藥物作用，再用滴定液B與剩余的滴定液A反應，然后再進行含量計算計算的關鍵在于求出滴定液A應用于藥物反應的實際量當前第18頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點間接滴定法的剩余量滴定法也稱回滴法，本法先加入定量過量滴定液A與藥物作用，再用滴定液B與剩余的滴定液A反應，然后再進行含量計算計算的關鍵在于求出滴定液A應用于藥物反應的實際量常涉及化學反應、加熱、分取等操作等步驟，使測定誤差顯著增加空白試驗校正沒有藥物存在時的滴定，方法步驟與有藥物存在時相同計算公式相應修正如下：當前第19頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點間接滴定法的剩余量滴定法也稱回滴法，本法先加入定量過量滴定液A與藥物作用，再用滴定液B與剩余的滴定液A反應，然后再進行含量計算計算的關鍵在于求出滴定液A應用于藥物反應的實際量常涉及化學反應、加熱、分取等操作等步驟，使測定誤差顯著增加沒有藥物存在時，滴定液A全部與滴定液B反應藥物存在時，剩余滴定液A全部與滴定液B反應濃度校正作用Exampleasfollows當前第20頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo示例四司可巴比妥鈉的含量測定第二節(jié)定量分析方法的特點

取本品約0.1g，精密稱定，置250ml碘瓶中，加水10ml，振搖使溶解，精密加溴滴定液(0.05mol/L)25ml，再加鹽酸5ml，立即密塞，并振搖1min，在暗處放置15min后，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液10ml，立即密塞，搖勻后，用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定，至終點時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍色消失，并將滴定得的結果用空白試驗校正。本法用溴與司可巴比妥鈉反應，再用硫代硫酸鈉反滴定溴，屬反滴定法，并用空白試驗校正,滴定液A為溴，B為硫代硫酸鈉，含量計算只需先求溴滴定度，再求出硫代硫酸鈉空白試驗V0體積與樣品測定體積Vs當前第21頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo示例四司可巴比妥鈉的含量測定第二節(jié)定量分析方法的特點已知：司可巴比妥鈉M=260.23;司可巴比妥鈉與溴反應摩爾=1:1；W=0.1022g；硫代硫酸鈉濃度校正因子=1.038；供試品滴定Vs=15.73ml;空白試驗滴定V0=23.21ml;It’sveryeasy！當前第22頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點Notice！本公式適用于空白校正情形本公式適用于沒有做空白校正情形見上例見下例見P146當前第23頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點習題一剩余碘量法測定異煙肼含量

異煙肼在弱堿性溶液中，加定量過量的碘滴定液(0.1mol/L)氧化，反應完成后，酸化，剩余碘滴定液用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定(以淀粉為指示劑)。當前第24頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點習題二非那西丁含量測定

精密稱取本品0.3630g加稀鹽酸回流1小時后，放冷，用亞硝酸鈉液（0.1010mol/L）滴定，用去20.00ml。每1ml亞硝酸鈉液（0.1mol/L）相當于17.92mg的C10H13O2N，請計算非那西丁的含量。當前第25頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點光譜分析法藥典收載紫外可見分光度法原子吸收分光光度法紅外分光度法熒光分析法火焰光度法本章講敘紫外可見分光度法熒光分析法當前第26頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點紫外可見分光度法基于物質(zhì)對紫外區(qū)(200~400nm)和可見光區(qū)(400~760nm)的單色光輻射建立起來的光譜分析法朗伯-比爾定律基礎當前第27頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點紫外可見分光度法方法特點與適用范圍1、簡便易行：本法使用的儀器價格比較低廉，操作簡單，易于普及2、靈敏度高：本法靈敏度可達10-7~10-4g/ml，適用于低濃度試樣分析3、準確度較高：本法誤差在2%~5%之間，適用于對測定結果的準確度要求較高的樣品4、專屬性較差：本法通常不受一般雜質(zhì)的干擾，但對結構相近的有關物質(zhì)缺乏選擇性。本法比較少應用于原料藥的含量測定，可用于制劑的含量測定，更多的應用于生物制劑的定量檢查本法紫外區(qū)須選用石英比色皿，比色皿一般為1cm，吸光度在0.3~0.7之間為宜，選用最大吸收光波長。當前第28頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點紫外可見分光度法含量測定方法4種方法對照品比較法吸收系數(shù)法計算光度法比色法當前第29頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點紫外可見分光度法含量測定方法對照品比較法分別配制供試品溶液和對照品溶液,對照品溶液的中所含被測藥物的量應為供試品溶液中被測成分規(guī)定量的100±10%,所用溶劑量兩者相同,在規(guī)定的波長下測定吸光度.按下式計算結果當前第30頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點1.對照品比較法紫外可見分光度法含量測定方法對照品比較法P16:將Cx用上述公式替代，即可通過實驗求出各種含量。見書例。對應于稀釋體積濃度當前第31頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點1.對照品比較法紫外可見分光度法含量測定方法對照品比較法P16:制劑的標示量:系指每一支、片或每一個單位制劑中含有主藥的重量(或效價）或含量或裝量。P16:將Cx用上述公式替代，即可通過實驗求出各種含量。見書例。當前第32頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點紫外可見分光度法含量測定方法吸收系數(shù)法吸收系數(shù)法:引入吸光系數(shù)的含量計算方法當前第33頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點溶液片劑紫外可見分光度法含量測定方法吸收系數(shù)法g/mlMg轉(zhuǎn)化單位請看例題當前第34頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點紫外可見分光度法含量測定方法吸收系數(shù)法例題示例：鹽酸氯丙嗪注射液的含量測定：精密量取本品適量（約相當于鹽酸氯丙嗪50mg），置200ml量瓶中，加鹽酸溶液（9→1000)稀釋至刻度，搖勻；精密量取2ml，置100ml量瓶中，用鹽酸（9→1000)稀釋至刻度，搖勻；在254nm下測定吸光度，按鹽酸氯丙嗪的吸收百分系數(shù)計算，即得。過程推導注射液，選溶液公式,如下：當前第35頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點紫外可見分光度法含量測定方法吸收系數(shù)法D為供試品溶液的稀釋體積：共稀釋了200ml×100÷2=10000ml2ml?當前第36頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點吸收系數(shù)法當前第37頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點吸收系數(shù)法固體試劑公式推導如下：當前第38頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點3.計算分光光度法4.比色法（可能有實驗，It’sverysimple）看書！當前第39頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo特點：靈敏度高，可達10-10～10-12g/ml

要求低濃度下測定須做空白測定熒光弱的藥物可衍生化后測定第二節(jié)定量分析方法的特點(二)熒光分析法當前第40頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點(三)色譜分析法1.HPLC1.1內(nèi)標法

As：內(nèi)標物質(zhì)峰面積或者峰高AR:對照品的峰面積或者峰高Cs:內(nèi)標物質(zhì)濃度CR：對照品濃度當前第41頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點As’：內(nèi)標物質(zhì)峰面積或者峰高Ax:供試品的峰面積或者峰高Cs’:內(nèi)標物質(zhì)濃度f：校正因子當前第42頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點(三)色譜分析法1.HPLC示例一炔諾酮的含量測定

照高效液相色譜法(附錄ⅤD測定)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(65:35)為流動相，檢測波長為244nm。理論塔板數(shù)按炔諾酮峰計算不低于1500，炔諾酮峰與內(nèi)標物質(zhì)峰的分離度及主成分峰后一雜質(zhì)峰與主成分峰的分離度均應符合要求。內(nèi)標溶液的制備取黃體酮約25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。當前第43頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點測定法

取本品約25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取此溶液2ml與內(nèi)標溶液3ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜儀，記錄色譜圖；另取炔諾酮對照品適量，精密稱定，同法測定。按內(nèi)標法以峰面積計算，即得。當前第44頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo2.GC第二節(jié)定量分析方法的特點示例松節(jié)油的含量測定

照氣相色譜法(附錄ⅥE測定)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

用聚乙二醇(PEG)-20M為固定相，涂布密度為20%；柱溫為90°C。理論塔板數(shù)按α-蒎烯峰計算應低于1500。校正因子測定取正丁醇適量，精密稱定，加石油醚(30～60°C)制成每1ml含20mg的溶液，作為內(nèi)標溶液。另取α-蒎烯對照品約30mg，精密稱定，置10ml棕色量瓶中，精密加入內(nèi)標溶液2ml，加石油醚(30～60°C)至刻度，搖勻，吸取1μl注入氣相色譜儀，計算校正因子。當前第45頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析方法的特點測定法

取本品約35mg，精密稱定，置10ml棕色量瓶中，精密加入內(nèi)標溶液2ml，用石油醚(30～60°C)溶解并稀釋至刻度，搖勻，吸取1μl注入氣相色譜儀，測定，即得。本品含α-蒎烯(C10H16)不得少于70%。當前第46頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo外標法:標準加入法:當前第47頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析樣品的前處理方法不經(jīng)有機破壞經(jīng)有機破壞直接測定配位滴定法氧化還原滴定法水解后測定酸水解堿水解經(jīng)還原分解后測定濕法破壞——凱氏定氮法干法破壞高溫灼燒法氧瓶燃燒法當前第48頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析樣品的前處理方法(一)、直接測定法

葡萄糖酸鈣EDTA配位滴定富馬酸亞鐵鄰二氮菲-硫酸鈰滴定葡萄酸銻鈉間接碘量法(二)、經(jīng)水解后測定法適用范圍：金屬原子不直接于碳原子相連或某些C-M鍵結合不牢固的有機金屬藥物。當前第49頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析樣品的前處理方法1、堿水解法三氯叔丁醇銀量法返滴定2、酸水解法適用范圍：含鹵素有機藥物結構中鹵素原子結合不牢固的藥物。EDTA配位滴定當前第50頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析樣品的前處理方法(三)、經(jīng)還原分解后測定法適用范圍：碘原子直接與芳環(huán)連接的含碘有機化合物。碘他那酸當前第51頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析樣品的前處理方法三、經(jīng)有機破壞的分析方法

含氮、硫、硫柳汞、氯化鈉的生物制品、含氮有機合成藥物測定的前處理和生物制品中金屬元素測定時生物基質(zhì)的去除。H2SO4-HNO3H2SO4-HClO4H2SO4-H2SO4HNO3-KMnO4分解劑/消化劑輔助分解劑——凱氏定氮法測定含有氨基和酰胺結構的藥物結構(一)濕法破壞當前第52頁\共有58頁\編于星期日\14點CompanyLogo第二節(jié)定量分析樣品的前處理方法原理

將含氮藥物與硫酸在凱氏燒瓶中共熱，藥物分子中有機結構被“消化”成CO2和H2O，有機結合的氮轉(zhuǎn)化為無機氮，與過量的硫酸結合為硫酸氫銨和硫酸銨，經(jīng)堿化后釋放出氨氣，隨水蒸氣餾出，用硼酸溶液或定量的酸滴定液吸收后，再用酸或堿滴定液滴定。

常量法——含氮量25～