藥物的含量測定方法與驗證

藥物的含量測定方法與驗證第一頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三概述藥物定量分析是指準確測定藥品有效成分或指示性成分的含量，是評價藥品質量、判斷藥物優(yōu)劣的重要手段化學分析法：重量分析，滴定分析儀器分析法：專屬性高（分離能力強）驗證內容：八個方面第二頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三重量分析法以質量為測量值的分析方法。稱取一定重量的供試品，用適當的方法將被測組分與試樣中其它組分分離，根據被測組分和供試品的重量以計算組分的含量的百分數的定量方法。

第三頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三重量分析法分類：揮發(fā)法、萃取法、沉淀法優(yōu)點：準確度高0.1%～0.2%（稱量誤差小）缺點：繁、長、低含量的測定誤差較大。若有其它方法可以應用，避免用重量法。藥典應用：藥品的水分測定；藥品中水中不溶物；熾灼殘渣；灰分測定。第四頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三第一節(jié)定量分析方法的分類與特點一、容量分析法（滴定分析法）將已知濃度的滴定液由滴定管滴加到被測藥物的溶液中，至滴定液與被測藥物反應完全（通過適當方法指示），然后根據滴定液的濃度和被消耗的體積，按化學計量關系計算出被測藥物的含量簡便，準確，快速，耐用性高專屬性差（適用于主成分含量較高的試樣分析。如化學原料藥的含量測定）第五頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三一、容量分析法（滴定分析法）按藥典規(guī)定，精密標定的滴定液（如鹽酸及其濃度）正確表示為A.鹽酸滴定液（0.152mol/L）B.鹽酸滴定液（0.1524mol/L）C.鹽酸滴定液（0.152M/L）D.0.1524M/L鹽酸滴定液E.0.152mol/L鹽酸滴定液答案：B第六頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三一、容量分析法（滴定分析法）幾個基本術語1.化學計量點（等當點）：當滴入的標準溶液的物質量與待測定組分的物質量恰好符合化學反應的計量關系時，稱化學計量點（等當點）。2.滴定終點：在滴定過程中，指示劑正好發(fā)生顏色變化（或電子設備的信號發(fā)生變化）的轉變點，稱滴定終點。第七頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三一、容量分析法（滴定分析法）3.滴定誤差：由于指示劑的變色點不恰好在化學計量點而引起的誤差為滴定誤差。4.滴定分析：通過“滴定”來實現的，根據所用標準溶液的濃度和體積計算出待測物質含量的，這種分析方法稱為滴定分析法，這一過程稱為滴定分析。第八頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三一、容量分析法（滴定分析法）例題：滴定分析中，一般利用指示劑的突變來判斷化學計量點的到達，在指示劑變色時停止滴定，這一點為：A.化學計量點B.滴定分析C.滴定等當點D.滴定終點E.滴定誤差答案：D第九頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三一、容量分析法（滴定分析法）酸堿滴定氧化還原滴定滴定分析法配位滴定沉淀滴定

非水滴定碘量法溴量法鈰量法亞硝酸鈉法第十頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三一、容量分析法（滴定分析法）滴定度：每1ml規(guī)定濃度的滴定液所相當的被測藥物的質量。通常用毫克（mg）表示。aA+bB→cC+dDm：滴定液摩爾濃度a：被測藥物摩爾數b：滴定劑的摩爾數M：被測藥物的毫摩爾質量第十一頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三一、容量分析法（滴定分析法）含量的計算：1.濃度校正因數2.百分含量的計算（1）原料藥百分含量計算V-V0或V0-V第十二頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三例題：非那西丁含量測定：精密稱取本品0.3630g加稀鹽酸回流1小時后，放冷，用亞硝酸鈉液（0.1010mol/L）滴定，用去20.00m1。每1ml亞硝酸鈉液（0.1mol/L）相當于17.92mg的C10H13O2N。計算非那西丁的含量為？第十三頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三例：精密稱取青霉素鉀供試品0.4021g，按藥典規(guī)定用剩余堿量法測定含量。先加入氫氧化鈉液(0.1mol/L)25.00ml，回滴時消耗0.1015mol/l的鹽酸液14.20ml，空白試驗消耗0.1015mol/l的鹽酸液24.68ml。求供試品的含量，每1ml氫氧化鈉液(0.1mol/L)相當于37.25mg的青霉素鉀。

第十四頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三一、容量分析法（滴定分析法）含量的計算：（2）制劑標示量百分含量的計算第十五頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三例：取司可巴比妥鈉膠囊（標示量為0.1g）20粒，除去膠囊后測得內容物總重為3.0780g，稱取0.1536g，按藥典規(guī)定用溴量法測定。加入溴液（0.1mol/L）25ml，剩余的溴液用硫代硫酸鈉液（0.1025mol/L）滴定到終點時，用去17.94ml。空白試驗用去硫代硫酸鈉液25.00ml。按每1ml溴液（0.1mol/L）相當13.01mg的司可巴比妥鈉，計算該膠囊中按標示量表示的百分含量。

第十六頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三第十七頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三二、光譜分析法（一）紫外-可見分光度法根據物質分子對波長為200～760nm這一范圍的電磁波的吸收特性所建立起來的一種定性、定量和結構分析方法。基本原理朗伯-比爾定律：A=-lgT=ECL注意：（1）摩爾吸收系數：ε

（2）百分吸收系數，C為1g/100ml第十八頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三例題：某藥物的摩爾吸收系數（ε）很大，則表示：A.光通過該物質溶液的光程長B.該物質溶液的濃度很大C.該物質對某波長的光吸收能力很強D.該物質對某波長的光透光率很高E.測定該物質的靈敏度低答案：C二、光譜分析法第十九頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三二、光譜分析法（一）紫外-可見分光度法儀器校正和檢定（148頁）測定法（1）在規(guī)定波長附近測試幾點的A值（±2nm）（2）以A值最大波長為測定波長注：A值以0.3-0.7為宜第二十頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三二、光譜分析法應用1.對照品比較法：C樣＝C對A樣/A對同種物質，同臺儀器，同一波長測，故E、L相等第二十一頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三二、光譜分析法2.吸收系數法：（絕對法）C=A/EL常用百分吸收系數。須對儀器進行嚴格的校正和檢定。3.計算分光光度法適當數字處理，消除干擾成分的影響第二十二頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三例題：紫外分光光度法中，用對照品比較法測定藥物含量時，A.需已知藥物的吸收系數。B.供試品溶液和對照品溶液的濃度應接近。C.供試品溶液和對照品溶液應在相同的條件下測定。D.可以在任何波長處測定。E.是中國藥典規(guī)定的方法之一。答案：BCE第二十三頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三二、光譜分析法含量的計算（1）原料藥百分含量計算對照法吸收系數法第二十四頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三例題：對乙酰氨基酚的含量測定方法為：取本品約40mg，精密稱定，置250ml量瓶中，加0.4%氫氧化鈉溶液50ml溶解后，加水至刻度，搖勻，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加0.4%氫氧化鈉溶液10m1，加水至刻度，搖勻，照分光光度法，在257nm的波長處測定吸收度，按C8H9NO2的吸收系數()為715計算，即得。若樣品稱樣量為m(g)，測得的吸收度為A，則含量百分率的計算式為：第二十五頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三A.B.C.

D.

E.第二十六頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三二、光譜分析法含量的計算（2）制劑標示量百分含量計算（自學）例題：《中國藥典》規(guī)定：維生素B12注射液（規(guī)格0.1mg／m1）含量測定如下：精密量取本品7.5m1，置25ml量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，混勻，置lcm石英池中，以蒸餾水為空白，在361±1nm波長處吸收度為0.593，按百分吸收系數為207計算，維生素B12標示量%為多少？第二十七頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三二、光譜分析法（二）熒光分析法某些物質受到光照射時，除吸收某種波長的光之外還會發(fā)射出比原來所吸收的光的波長更長的光；當激發(fā)光停止照射后，這種光線也隨之消失，這種光稱為熒光。從樣品池出來的熒光是各方向發(fā)射的，在與激發(fā)光光源排成直角的方向測熒光強度可以避免透射的激發(fā)光的干擾。第二十八頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三三、色譜分析法色譜法：是一種物理或物理化學分離分析方法。優(yōu)點：高靈敏度、高選擇性、高效能、分析速度快、應用范圍廣。應用：各國藥典中廣泛用作定性鑒別、純度檢查、含量測定。分類：流動相：氣體→氣相色譜法液體→液相色譜法固定相：固體或液體氣－固色譜法；氣－液色譜法；液－固色譜法；液－液色譜法操作形式：柱色譜法、平板色譜法、電泳法分離機制：分配、吸附、離子交換、分子排阻及親合色譜法第二十九頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三三、色譜分析法（一）高效液相色譜法（HPLC）1.概述HPLC：液體作流動相，高壓輸液，高效固定相，高靈敏度檢測器。特點：HPLC有機物80%（GC，有機物20%）分類：LLC分配，離子交換色譜LSC吸附，離子對色譜化學鍵合固定相：極性（正相鍵合色譜）；非極性（反相鍵合色譜）ODS（十八烷基硅烷鍵合相）第三十頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三三、色譜分析法（一）高效液相色譜法（HPLC）2.基本原理塔板理論；VanDeemter速率理論色譜峰：峰高、峰面積→定量峰位（保留值）→定性區(qū)域寬度（峰寬）→衡量柱效第三十一頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三三、色譜分析法（一）高效液相色譜法（HPLC）例題：在氣相色譜法中，與含量成正比的是色譜峰的：A.保留體積B.保留時間C.相對保留值D.峰高E.峰面積答案：DE第三十二頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三三、色譜分析法（一）高效液相色譜法（HPLC）3.高效液相色譜儀1）貯液瓶2）高壓輸液泵3）色譜柱（分離系統）4）檢測器（紫外檢測器最為常用）5）數據處理系統第三十三頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三三、色譜分析法（一）高效液相色譜法（HPLC）4.一般要求固定相：硅膠；化學鍵合硅膠；ODSC18、C8、氨基、氰基；流動相：甲醇；水；乙腈…（不同配比）進樣量：數ml；室溫：柱溫；檢測器：紫外；色譜圖：20min；系統適用性試驗；第三十四頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三三、色譜分析法（一）高效液相色譜法（HPLC）5.系統適應性試驗四個指標理論板數n分離度R重復性（精密度）RSD2.0%拖尾因子：T應在0.95-1.05第三十五頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三三、色譜分析法（一）高效液相色譜法（HPLC）柱效（最小理論塔板數）

n＝5.54（tR/Wh/2）2

tR（保留時間，min），Wh/2（半峰寬，cm）一般大于1000第三十六頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三三、色譜分析法（一）高效液相色譜法（HPLC）分離度R＝2（tR2－tR1）/（W1＋W2）R≥1.5第三十七頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三三、色譜分析法（一）高效液相色譜法（HPLC）例題：測得兩色譜峰的保留時間tR1＝6.5min，tR2＝8.3min，峰寬W1＝1.0min，W2＝1.4min，則兩峰分離度R為：A.0.22B.1.2C.2.5D.0.75E.1.5答案：E第三十八頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三三、色譜分析法例題：HPLC法與GC法用于藥物復方制劑的分析時，其系統適用性試驗系指A.測定拖尾因子B.測定回收率C.測定保留體積D.測定分離度E.測定柱的理論板數答案：ADE第三十九頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三第五節(jié)分析方法的驗證一、分析方法驗證的內容（一）準確度該分析方法所得測定結果與真實值或參考值接近程度。一般用回收率表示?；厥章?（測定量）/加入量×100%第四十頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三第五節(jié)分析方法的驗證（二）精密度在規(guī)定的測試條件下，同一個均勻樣品，經多次測定結果之間的接近程度。表示方法1.偏差(d)d=測得值-平均值=Xi-X2.標準偏差（SD）SD=[(∑Xi

–

X)2/(n-1)]1/23.相對標準差(RSD)也稱變異系數(CV)RSD=SD/X×100%第四十一頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三第五節(jié)分析方法的驗證重復性、中間精密度及重現性1.重復性：在相同條件下，由一個分析人員測定所得結果的精密度。2.中間精密度：在同一個實驗室，不同時間由不同分析人員用不同設備測定結果的精密度。3.重現性：在不同實驗室由不同分析人員測定結果的精密度。第四十二頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三第五節(jié)分析方法的驗證（三）專屬性是指在其他成分(如雜質、降解產物、輔料等)可能存在下，采用的方法能準確測定出被測物的特性。鑒別反應、雜質檢查、含量測定方法，均應考察其專屬性。第四十三頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三第五節(jié)分析方法的驗證（四）檢測限在規(guī)定的實驗條件下能檢出被測組分的最低濃度或最低量。當被測組分的量高于檢測限時，即可被檢出，但一般不能準確測定。第四十四頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三第五節(jié)分析方法的驗證（五）定量限分析方法可定量測定樣品中被測組分的最低濃度或最低量。應滿足一定的精密度和準確度的要求。第四十五頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三第五節(jié)分析方法的驗證（六）線性是指在設定的范圍內，檢測結果與試樣中被測物濃度（或量）直接呈正比關系的程度。線性回歸分析（r接近于1）第四十六頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三第五節(jié)分析方法的驗證（七）范圍是指達到一定精密度、準確度和線性的前提下，分析方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。原料藥和制劑含量測定：應為測試濃度的80%～120%。制劑含量均勻度檢查：應為測試濃度的70%～130%。溶出度或釋放度中的溶出量測定：應為限度的±20%。第四十七頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三第五節(jié)分析方法的驗證（八）耐用性是指在測定條件下有小的變動時，測定結果不受影響的承受程度。第四十八頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三第五節(jié)分析方法的驗證二、實例（自學）教材內容91-93頁第四十九頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三第六節(jié)定量分析有關計算原料藥的百分含量計算含量%=實測值/供試品量×100%制劑標示量的百分含量計算標示量%=每片（每支）實測量/標示量×100%第五十頁，共五十七頁，編輯于2023年，星期三第六節(jié)定量分析有關計算一、原料藥百分含量的計算（一）滴定分析法1.直接滴定法含量%=（V-V0）×T×F×10-3/m×100%T（滴定度）：指每毫升標準溶液相當于待測組分的質量