恩諾沙星注射液中磺胺類藥物的測定-高效液相色譜法

I恩諾沙星注射液中磺胺類藥物的測定—高效液相色譜法范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了恩諾沙星注射液中磺胺類藥物的高效液相色譜測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于恩諾沙星注射液中磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺喹噁啉、磺胺二甲嘧啶、磺胺對甲氧嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺氯吡嗪鈉的測定。本方法檢出限磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺喹噁啉為1μg/mL；磺胺二甲嘧啶、磺胺對甲氧嘧啶為2μg/mL；磺胺甲噁唑?yàn)?μg/mL；磺胺間甲氧嘧啶、磺胺氯吡嗪鈉為5μg/mL。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法原理恩諾沙星注射液中添加的磺胺類藥物經(jīng)稀釋后用HPLC分離，二極管陣列檢測器檢測，保留時間和紫外光譜對照定性，外標(biāo)法定量。試劑或材料除非另有規(guī)定，所用試劑均為分析純；水符合GB/T6682一級水的規(guī)定。乙腈（C2H3N）：色譜純。三乙胺（C6H15N）：分析純。磷酸（H3PO4）：含量≥85%。0.025mol/L磷酸溶液：稱取磷酸溶液（4.3）2.88g（準(zhǔn)確至0.01g），置1000mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.0，過0.45μm微孔濾膜備用。稀釋液：乙腈+0.025mol/L磷酸溶液=17+83?；前奉愃幬飳φ掌罚夯前粪奏φ掌罚–10H10N4O2S），含量99.5%；磺胺間甲氧嘧啶對照品（C11H12N4O3S），含量99.4%；磺胺二甲嘧啶對照品（C12H14N4O2S），含量99.2%；磺胺氯吡嗪鈉對照品（C10H9ClN4O2S），含量100.0%；磺胺喹噁啉對照品（C14H11N4O2S），含量99.6%；磺胺甲噁唑?qū)φ掌罚–10H11N3O3S），含量99.8%；磺胺對甲氧嘧啶對照品（C11H12N4O3S），含量100.0%；恩諾沙星對照品（C19H22FN3O3），含量99.5%；磺胺噻唑?qū)φ掌罚–9H9N3O2S2），含量100.0%。有機(jī)微孔濾膜：0.45μm。儀器設(shè)備高效液相色譜儀：配二極管陣列檢測器。分析天平：感量0.00001g、0.01g。測定步驟供試品溶液的制備精密量取恩諾沙星注射液適量（約相當(dāng)于恩諾沙星100mg），置100mL容量瓶中，用稀釋液（4.6）定容至刻度，搖勻，精密量取上述溶液5mL，置100mL容量瓶中，用稀釋液（4.6）定容至刻度，搖勻，待上機(jī)。對照品溶液的制備稱取磺胺類藥物對照品各100mg（精確至0.00001g），置100mL容量瓶內(nèi)，用稀釋液溶解并定容至刻度，搖勻；精密量取5mL，置100mL容量瓶中，用稀釋液（4.6）定容至刻度，搖勻，待上機(jī)。儀器參考條件液相色譜條件色譜柱：C18色譜柱，4.6mm×250mm，3.5μm，或性能相當(dāng)者。流動相：A乙腈、B0.025mol/L磷酸溶液，梯度洗脫，梯度洗脫程序見表1。流速：1.0mL/min。進(jìn)樣量：10μL。柱溫：30℃。液相色譜梯度洗脫程序時間（min）流動相A（%）流動相B（%）08921520802235652389228892二極管陣列檢測器參考條件定性采集波長范圍：200nm～400nm。定量波長：270nm。定性定量測定定性測定通過樣品溶液色譜圖的保留時間與相應(yīng)對照品溶液的保留時間以及色譜峰的紫外光譜相對照定性。樣品溶液與對照品溶液保留時間的相對偏差不大于2.5%，且為單一物質(zhì)峰（純度角小于純度閾值）；樣品溶液色譜峰的紫外光譜與對照溶液色譜峰的紫外光譜一致（匹配角小于匹配閾值），且最大吸收波長一致（差異不大于±2nm）則可判斷樣品中存在該磺胺類藥物。定量測定取供試品溶液和對照品溶液各10μl注入液相色譜儀，在上述色譜條件下進(jìn)行測定，記錄270nm波長處的色譜圖，外標(biāo)法定量。數(shù)據(jù)處理試樣中各磺胺類藥物的含量以質(zhì)量濃度CX計，數(shù)值以微克每毫升（μg/mL）表示，按公式（1）計算： （SEQ標(biāo)準(zhǔn)自動公式\*ARABIC1）式中：CX──供試品溶液中磺胺類藥物濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；CS──對照品溶液中磺胺類藥物濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；AX──供試品溶液中磺胺類藥物峰面積；AS──對照品溶液中磺胺類藥物峰面積。測XX果用平行測定的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。精密度本方法回收率在90%～110%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差≤5%。

（資料性附錄）

恩諾沙星注射液中磺胺類藥物分辨率圖陽性添加色