新藥開發(fā)中藥物相互作用研究終

DrugInteractionStudies藥物相互作用研究實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)研究人群或體外研究用細(xì)胞、微粒體探針底物、抑制劑和誘導(dǎo)劑的選擇觀察指標(biāo)樣本量數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析FDA要求：試驗(yàn)性新藥與其他藥物之間的相互作用研究應(yīng)該在藥物開發(fā)過程中進(jìn)行，其作為藥物有效性和安全性評(píng)價(jià)的一部分。

本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第1頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分目的：①判定試驗(yàn)性新藥與其他藥物之間是否存在潛在的相互作用：

②若存在，是否表明要采取劑量調(diào)整、額外的治療監(jiān)測(cè)、聯(lián)用禁忌或者其他降低危險(xiǎn)的措施。內(nèi)容：①鑒別其主要消除路徑；②藥物分布中酶和轉(zhuǎn)運(yùn)體的作用程度；③描述藥物-藥物相互作用的機(jī)制。本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第2頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第3頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分一般策略本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第4頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分體外研究

1.藥物代謝酶的鑒別

體外實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)重組P450酶肝微粒體肝細(xì)胞本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第5頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分代謝酶介導(dǎo)的主要消除途徑可依據(jù)決策樹進(jìn)行確證和進(jìn)一步研究。但特定條件下代謝酶介導(dǎo)的次要消除途徑也需要進(jìn)一步研究，在一些特殊群體中，這些酶會(huì)產(chǎn)生重要影響

例如：①腎臟功能障礙的患者服用主要通過腎臟消除的藥物；②某酶的慢代謝型人服用由該酶代謝的藥物；③患者在同時(shí)服用介導(dǎo)次要消除途徑的代謝酶的強(qiáng)烈抑制劑。本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第6頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分

在確定藥物是否會(huì)抑制某一特定CYP酶的體外試驗(yàn)中，可將藥物與該酶的探針底物共孵育

對(duì)于可逆性抑制劑，當(dāng)抑制劑在酶活性位點(diǎn)的濃度接近或超過Ki值時(shí)，就會(huì)產(chǎn)生明顯的抑制作用。

[I]/Ki值預(yù)測(cè)體內(nèi)相互作用是否存在若[I]/Ki比值越大，相互作用的可能性越大。若[I]/Ki值大于0.1,則有可能存在相互作用，有必要作進(jìn)一步的體內(nèi)研究。

IC50：酶催化反應(yīng)被抑制達(dá)到50%最大抑制作用時(shí)抑制劑的濃度2.確認(rèn)受試藥物是否是代謝酶的抑制劑或誘導(dǎo)劑本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第7頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分對(duì)于機(jī)制性抑制劑，由于其抑制作用具有時(shí)間依賴性，要在加入底物前，對(duì)抑制劑預(yù)孵育30min。若產(chǎn)物生成率既有時(shí)間依賴性又有濃度依賴性，則說(shuō)明該抑制劑為機(jī)制性抑制劑。若體外研究發(fā)現(xiàn)某抑制劑的抑制作用具有時(shí)間依賴性，則需要進(jìn)行進(jìn)一步的體內(nèi)研究。本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第8頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分體外誘導(dǎo)試驗(yàn)的模型--原代肝細(xì)胞。在評(píng)價(jià)藥物是否能誘導(dǎo)某一P450酶時(shí)，需要陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照：使用有效的誘導(dǎo)劑（即濃度<500μmol/L時(shí)，能使催化活性增加2倍以上的誘導(dǎo)劑），可判斷來(lái)源于不同個(gè)體的肝細(xì)胞酶活性是否存在差異。

2.確認(rèn)受試藥物是否是代謝酶的抑制劑或誘導(dǎo)劑本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第9頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分試驗(yàn)藥引起酶活性的改變與陽(yáng)性對(duì)照相比≥40%時(shí)，可視為酶誘導(dǎo)劑。

EC50值：產(chǎn)生50%最大誘導(dǎo)作用時(shí)的有效藥物濃度。其他一些體外鑒定酶誘導(dǎo)作用的實(shí)驗(yàn)方法，如：用Western免疫印跡法或免疫沉淀法來(lái)測(cè)定酶蛋白含量的變化，用RT-PCR在mRNA水平測(cè)定酶含量的變化，或者進(jìn)行受體基因試驗(yàn)。但是這些試驗(yàn)只能提供支持性的資料，并不一定能體現(xiàn)酶活性。實(shí)驗(yàn)方法%本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第10頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)研究群體底物和作用藥物的選擇給藥途徑給藥劑量研究終點(diǎn)統(tǒng)計(jì)方面的考慮3.體內(nèi)研究本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第11頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分

3.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康?，可采用以下幾種設(shè)計(jì)方法：①隨機(jī)交叉法（如先服用S后服用S+I組和先服用S+I后服用S組）；②同種序貫交叉法（總是先服用S后服用S+I,或者相反）；③平行設(shè)計(jì)（一組服用S，另一組服用S+I）。本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第12頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分

①如果實(shí)驗(yàn)需要達(dá)到穩(wěn)態(tài)血藥濃度而底物或作用藥物和（或）其代謝物的半衰期較長(zhǎng)，此時(shí)可以給予負(fù)荷劑量以迅速達(dá)到穩(wěn)態(tài)，也可以考慮特殊的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，比如選擇同種序貫交叉法或者平行設(shè)計(jì)法，而不是隨機(jī)交叉法；

②對(duì)于一個(gè)快速可逆的抑制劑，其服用時(shí)間應(yīng)該在測(cè)定當(dāng)天服用底物前或同時(shí)服用，這樣才能增加其敏感性。

③如果對(duì)聯(lián)合用藥方案中的兩種藥物彼此相互作用效應(yīng)進(jìn)行評(píng)估，可以在兩個(gè)獨(dú)立試驗(yàn)進(jìn)行，也可以在同一個(gè)試驗(yàn)中進(jìn)行，試驗(yàn)可設(shè)計(jì)為隨機(jī)三階段交叉、平行分組和同種序貫交叉。

設(shè)計(jì)方案時(shí)注意：本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第13頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分④當(dāng)涉及共同抑制或誘導(dǎo)時(shí)，給藥時(shí)間至關(guān)重要。例如，如果受試藥物為代謝酶和OATP（有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽）共有底物，以利福平作（OATP抑制劑）為酶的誘導(dǎo)劑時(shí)，受試藥物和利福平同時(shí)給藥可能會(huì)造成對(duì)誘導(dǎo)作用的低估，因此推薦底物受試藥物推遲給藥，但推遲的最佳時(shí)間需要試驗(yàn)確定。另外，在撤掉相互作用藥物之后，考察其對(duì)底物的影響作用也是很重要的。⑤為避免試驗(yàn)中不確定因素對(duì)結(jié)果的影響，必須嚴(yán)格控制飲食。⑥在涉及到代謝酶的遺傳藥理學(xué)（基因多態(tài)性）的不同基因亞型上的藥物相互作用可能有所不同，應(yīng)在適當(dāng)時(shí)機(jī)進(jìn)行針對(duì)性研究。本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第14頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分選擇健康受試者，研究結(jié)果可以推論到患者群體。基于安全性考慮，有時(shí)不能采用健康受試者進(jìn)行試驗(yàn)。當(dāng)需要使用藥效學(xué)終點(diǎn)時(shí)，需要采用受試藥物擬用患者進(jìn)行試驗(yàn)。當(dāng)實(shí)驗(yàn)涉及具有顯著基因多態(tài)性的P450酶（CYP2D6、2C9、2C19）時(shí)，要考慮藥物在不同代謝類型人群中可能存在的差異。

3.2實(shí)驗(yàn)群體本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第15頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分3.3底物和作用藥物的選擇①受試藥物作為CYP酶的底物

在研究受試藥物的代謝可能受到抑制或誘導(dǎo)（即作為底物）時(shí)，相互作用藥物應(yīng)首先選用所研究途徑的強(qiáng)抑制劑或誘導(dǎo)劑作為相互作用藥物。例如，若受試藥物被CYP3A代謝，則可選擇酮康唑和利福平分別作為抑制劑和誘導(dǎo)劑。如果試驗(yàn)結(jié)果是陰性，則可認(rèn)為對(duì)于這一代謝途徑不存在具有臨床重要性的藥物-藥物相互作用；若結(jié)果為陽(yáng)性，則需選用其他較弱的抑制劑或誘導(dǎo)劑進(jìn)一步研究。若受試藥物經(jīng)具有多態(tài)性的酶代謝，則受試藥物在慢代謝型人群和快代謝型人群中藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的對(duì)比可以替代這一代謝途徑的研究。本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第16頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分②受試藥物作為CYP酶的抑制劑或誘導(dǎo)劑

一般應(yīng)選用敏感底物，以觀察到受試藥物最大的影響作用。如①CYP3A：咪達(dá)唑侖；②CYP1A2：茶堿；③CYP2B6：安非他酮；④CYP2C8：瑞格列奈；⑤CYP2C9：華法林；⑥CYP2C19：奧美拉唑；⑦CYP2D6：地昔帕明。如果最初階段的研究表明受試藥物可以抑制或誘導(dǎo)敏感底物的代謝，可根據(jù)合并使用的可能性選取其他底物做進(jìn)一步研究；如果試驗(yàn)結(jié)果為陰性，則可推斷受試藥物對(duì)次敏感底物的代謝沒有影響。

3.3底物和作用藥物的選擇本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第17頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分受試藥物為CYP酶的抑制劑，可依據(jù)其對(duì)敏感底物代謝的抑制程度進(jìn)行分類。以CYP3A酶抑制劑為例：如果受試藥物使口服咪達(dá)唑侖或其他底物的AUC升高大于等于5倍，則屬?gòu)?qiáng)抑制劑；如果AUC升高在2～5倍間，則為中等強(qiáng)度抑制劑；如果AUC升高在1.25～2倍間,則為弱抑制劑。受試藥物既是某CYP酶的抑制劑又是其誘導(dǎo)劑（如利托那韋對(duì)于CYP3A），則需警告由該藥引起的相互作用具有不確定性。3.底物和作用藥物的選擇本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第18頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分在一個(gè)實(shí)驗(yàn)中受試者同時(shí)服用多種CYP酶底物（即雞尾酒模式）考慮到下列因素：一種特定酶的底物對(duì)該酶具有較高的選擇性；底物之間沒有相互作用發(fā)生；受試者的數(shù)量達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。這種雞尾酒實(shí)驗(yàn)的陰性結(jié)果可以免除對(duì)其中某個(gè)具體酶的進(jìn)一步評(píng)價(jià)，然而陽(yáng)性結(jié)果則需要進(jìn)一步的體內(nèi)研究。③“雞尾酒”（cocktail）法本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第19頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分3.4給藥途徑

對(duì)于受試藥物，給藥途徑一般與擬臨床應(yīng)用的給藥方式一致。如果正開發(fā)多種給藥途徑，則是否有必要針對(duì)所有途徑進(jìn)行研究應(yīng)取決于預(yù)期的相互作用機(jī)制以及相應(yīng)的原形藥物和代謝物濃度-時(shí)間曲線的相似性。本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第20頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分3.5給藥劑量

對(duì)于底物和作用藥物來(lái)說(shuō)，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)該盡可能將相互作用的結(jié)果最大化。

作用藥物（抑制劑或誘導(dǎo)劑）使用最大安全劑量和最短給藥間隔。考慮到底物血藥濃度升高的安全性問題而使用低于臨床常用劑量的給藥方案時(shí)，體內(nèi)藥物相互作用研究方案應(yīng)在結(jié)果報(bào)告中進(jìn)行討論。本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第21頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分3.6研究終點(diǎn)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的變化通常被用來(lái)評(píng)估藥物-藥物相互作用的臨床重要性。調(diào)查結(jié)果的解釋取決于在普通人群或特定人群中，劑量/濃度和濃度/響應(yīng)關(guān)系的一個(gè)很好的理解。

在某些情況下，在藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)基礎(chǔ)上，依賴于藥效學(xué)終點(diǎn)可能是有效的，包括INR測(cè)量或QT間期的測(cè)量。本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第22頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分

底物的暴露指標(biāo)（AUC、Cmax、達(dá)峰時(shí)間Tmax等）普遍應(yīng)用于相互作用研究，計(jì)算得藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（清除率、分布容積和半衰期等）有助于理解試驗(yàn)結(jié)果。在某些情況下，抑制劑或誘導(dǎo)劑的這些指標(biāo)也可能有價(jià)值，尤其是在評(píng)估兩種試驗(yàn)藥物彼此之間可能的相互作用時(shí)。3.6研究終點(diǎn)本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第23頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分在某些情況下，對(duì)于劑量、血藥濃度水平和效應(yīng)之間相互關(guān)系的理解可能造成某些藥動(dòng)學(xué)指標(biāo)和/或參數(shù)更受關(guān)注。

例如：如果某種臨床結(jié)果（如使用擬交感神經(jīng)藥物造成的心動(dòng)過速）與峰濃度緊密相關(guān)，那么Cmax或其他早期暴露指標(biāo)更為適用；相反，如果臨床結(jié)果與吸收程度關(guān)系密切，則應(yīng)選擇AUC。

3.6研究終點(diǎn)本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第24頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分采樣的頻率應(yīng)足以準(zhǔn)確測(cè)定原形藥物及其代謝物的相關(guān)指標(biāo)和/或參數(shù)。

對(duì)于底物，對(duì)其相關(guān)代謝產(chǎn)物進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)行為的研究非常重要。對(duì)于這些代謝產(chǎn)物的研究有助于區(qū)分抑制劑或誘導(dǎo)劑對(duì)不同CYP酶介導(dǎo)的代謝途徑的影響。3.6研究終點(diǎn)本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第25頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分藥動(dòng)學(xué)終點(diǎn)指標(biāo)一般足以進(jìn)行代謝性藥物-藥物相互作用研究。不過，在受關(guān)注的底物研究終點(diǎn)的藥動(dòng)學(xué)/藥效學(xué)關(guān)系尚未建立，或者藥效學(xué)變化不僅僅由藥動(dòng)學(xué)相互作用導(dǎo)致（如奎寧丁和三環(huán)類抗抑郁藥的心血管累加效應(yīng)）時(shí)，藥效學(xué)指標(biāo)有時(shí)可以提供其他有價(jià)值的信息。3.6研究終點(diǎn)本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第26頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分3.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方面的考慮

研究的結(jié)果應(yīng)以有相互作用藥物（S+I）和沒有相互作用藥物（S）情況下得到的藥動(dòng)學(xué)指標(biāo)的幾何均數(shù)比值的90%置信區(qū)間進(jìn)行報(bào)告。置信區(qū)間是對(duì)（S+I）和（S）情況下系統(tǒng)暴露指標(biāo)比值的分布的估計(jì)，并表明相互作用強(qiáng)度的概率估計(jì)。相比之下，這些研究不適于進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，這是由于較小的、持續(xù)出現(xiàn)的暴露差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上可能具有顯著差異（p<0.05），但卻沒有臨床相關(guān)性。本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第27頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分分析方法研究過程涉及到實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)或生物樣品中底物含量的測(cè)定，最常用的方法為L(zhǎng)C-MS/MS（尤其是在雞尾酒法中，要同時(shí)測(cè)定多個(gè)底物探針的含量），其次為HPLC。也可以用電化學(xué)方法進(jìn)行測(cè)定，如：將CYP3A4酶固定在玻碳電極上，在陽(yáng)離子聚合電解質(zhì)背景下以計(jì)時(shí)安培分析法測(cè)紅霉素（底物）濃度變化，以表征抑制劑的抑制作用。本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第28頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分例1:體內(nèi)試驗(yàn)

EffectsofKetoconazoleandRifampicinonthePharmacokineticsofGemigliptin,aDipeptidylPeptidase-IVInhibitor:ACrossoverDrug–DrugInteractionStudyinHealthyMaleKoreanVolunteers酮康唑和利福平對(duì)吉格列?。ǘ幕拿?IV的抑制劑）藥動(dòng)學(xué)的影響：以韓國(guó)健康男性為受試者的交叉藥物-藥物相互作用研究NohYH,LimHS,JinSJ,etal.[J].Clinicaltherapeutics,2012,34(5):1182-1194.本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第29頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第30頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分目的：多次口服酮康唑或利福平對(duì)單次口服吉格列汀藥代動(dòng)力學(xué)，在韓國(guó)健康空腹男性中的影響。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：single-center,open-label,2-part,3-treatment,1-sequence,2-period,crossoverdrug–druginteractionstudy采用開放標(biāo)簽，2個(gè)部分，3種處理方式，1序列，2周期交叉的研究方法。本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第31頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分A、B兩部分各12名受試者本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第32頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分分析方法：LC-MS/MS內(nèi)標(biāo)：13C4-吉格列汀、13C4-LC15-0516乙腈混合溶液（含2%甲酸）(20/10ng/mL)色譜柱：C8column(3μm,30*2.0mm)流動(dòng)相：二元梯度洗脫

A：乙腈：10-mM乙酸（10:90）（含0.1%甲酸）

B：乙腈：甲醇：10-mM醋酸銨（45:45:10）（含0.1%甲酸）檢測(cè)模式：陽(yáng)離子多反應(yīng)選擇監(jiān)測(cè)（MRM）吉格列汀：490.1([M＋H＋])→338.1m/zLC15-0516：506.28→175.1m/z本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第33頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分結(jié)果與討論P(yáng)artA本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第34頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第35頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分合用酮康唑后吉格列汀的Cmax和AUC分別增大到原來(lái)的2.40倍和2.36倍本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第36頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分PartB本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第37頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第38頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分合用利福平后吉格列汀的Cmax和AUC分別降低為原來(lái)的41%和20%。本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第39頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分值得注意的是，合用利福平之后代謝產(chǎn)物L(fēng)C15-0636的暴露量降低了36%，這可能與利福平影響了膜轉(zhuǎn)運(yùn)體有關(guān)。但這并不影響利福平誘導(dǎo)了吉格列汀代謝結(jié)論的得出，因?yàn)棰貺C15-0636的Cmax增大了；②吉格列汀的半衰期由21.86小時(shí)縮短到7.59小時(shí)。本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第40頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分本文檔共48頁(yè)；當(dāng)前第41頁(yè)；編輯于星期一\16點(diǎn)0分例2：體外實(shí)驗(yàn)

PotentinhibitionofcytochromeP4502B6bysibutramineinhumanlivermicrosomes

西布曲明對(duì)人肝微粒體中CYP2B6酶的強(qiáng)效抑制作用BaeSH,KwonMJ,