2300份成年人腦脊液培養(yǎng)及菌株耐藥分析

2300份成年人腦脊液培養(yǎng)及菌株耐藥分析

【摘要】目的總結(jié)我院2002年1月至2005年6月送檢的2300份成年人腦脊液的培養(yǎng)及藥敏情況，供臨床診斷和治療參考。方法采用美國(guó)DADE公司的MicroscanWalkaway40全自動(dòng)細(xì)菌鑒定及藥敏分析系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌鑒定及藥敏測(cè)定。結(jié)果在2300份腦脊液標(biāo)本中，檢出陽(yáng)性數(shù)180份(%)，其中細(xì)菌144株(革蘭陽(yáng)性菌98株，革蘭陰性菌46株)，真菌26株，結(jié)核分枝桿菌10株。鏈球菌和腸球菌對(duì)青霉素敏感，萬(wàn)古霉素對(duì)革蘭陽(yáng)性球菌均有較高的抗菌活性；革蘭陰性菌對(duì)常用藥物頭孢噻肟和頭孢曲松的敏感性較差，碳青霉烯類(lèi)、氨曲南對(duì)革蘭陰性菌有較好的抗菌活性；部分腦膜炎由結(jié)核桿菌及真菌所致。結(jié)論本組腦膜炎以院內(nèi)感染為主，提示臨床醫(yī)生應(yīng)根據(jù)腦膜炎患者的特點(diǎn)，個(gè)體化用藥，合理使用抗生素。

【關(guān)鍵詞】腦脊液報(bào)病原菌耐藥性

Analysesonthepathogensandtheirresistancetoantibiotics

ABSTRACTObjectiveToanalyzethepathogenicresultsanddrugresistanceofbacteriaisolatedfrom2300cerebrospinalfluildspecimensofadultsfrom2002to2005soastoprovideevidenceforclinicaldiagnosisandtherapyofmeningitis.MethodsThebacteriaidentificationandtheantimicrobialsusceptibilitywereassayedbyautomaticbacteriaculturedeviceMicroscanWalkaway40fromDADECo.ResultsThepositiverateofpathogenswas%(180/2300)from2300cerebrospinalfluildwere144strainsofbacteriawhichinclude98Grampositivebacteriaand46Gramnegativebacteria,26fungi,and10Mycobacteriumtuberculosis.Streptococcusspp.andEnterococcusspp.weresensitivetopenicillin,alltheGrampositivecocciweresensitivetovancomycin;theGramnegativebacteriawereresistanttoroutineantibioticssuchascefotaximeandceftriaxone,whiletheyhavehighpercentageofsusceptibilitytoaztreonamandcarbapenemsandsomecaseswereinfectedwithMycobacteriumtuberculosisandfungi.ConclusionItsuggeststhatcliniciansshouldpaymoreattentiontopersonalizedtherapybasedonthecharacteristicofmeningitissoastoattainrationaluseofantibiotics.

KEYWORDSCerebrospinalfluild;Pathogen;Drugresistance

病原菌性腦膜炎通常包括化膿性細(xì)菌所引起的急性化膿性腦膜炎以及結(jié)核分枝桿菌、深部真菌所引起的慢性腦膜炎，對(duì)人類(lèi)危害極大，位居世界感染性疾病病死率的前十位［1］。病原菌性腦膜炎的診斷依賴(lài)腦脊液的檢查，腦脊液的細(xì)菌培養(yǎng)及藥敏結(jié)果對(duì)臨床醫(yī)生的診斷、用藥、療效判定有著重要的作用［2］。隨著社會(huì)環(huán)境、醫(yī)療手段的不斷改變，病原菌性腦膜炎的病原體構(gòu)成、藥敏情況值得探討。本文對(duì)四川大學(xué)華西醫(yī)院2002年1月至2005年6月2300份腦脊液培養(yǎng)結(jié)果分析報(bào)道如下。

1材料與方法

研究對(duì)象

四川大學(xué)華西醫(yī)院2002年1月至2005年6月送檢的2300份腦脊液標(biāo)本。標(biāo)本采集

以無(wú)菌技術(shù)采集腦脊液3～5ml，置無(wú)菌容器中立即送檢。

分離培養(yǎng)

將送檢的腦脊液立即接種于已預(yù)溫的兔血瓊脂和不含萬(wàn)古霉素的巧克力平板以及葡萄糖肉湯增菌液中，置5%～10%CO2孵箱，培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果，若肉湯增菌液中呈混濁或有菌膜產(chǎn)生，再挑取培養(yǎng)液或菌膜轉(zhuǎn)種于血平板中，進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)，鑒定步驟按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)所用的兔血瓊脂、不含萬(wàn)古霉素的巧克力平板和葡萄糖肉湯增菌液均為華西醫(yī)院臨床微生物實(shí)驗(yàn)室制作，經(jīng)質(zhì)量檢查合格后使用。

細(xì)菌的鑒定與藥敏

實(shí)驗(yàn)使用的儀器為美國(guó)DADE公司的MicroscanWalkaway40全自動(dòng)細(xì)菌鑒定及藥敏分析系統(tǒng)(DadeMicroScanInc.,WestSacramento,CA,USA)，按照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所(CLSI/NCCLS)(2004年)文件標(biāo)準(zhǔn)，微量稀釋法測(cè)得的MIC值判讀細(xì)菌藥敏結(jié)果為敏感(S)、中介(I)、耐藥(R)。頭孢他啶(30μg)與頭孢他啶/克拉維酸(30μg/10μg)以及頭孢噻肟(30μg)與頭孢噻肟/克拉維酸(30μg/10μg)抑菌圈直徑之差大于5mm判定為產(chǎn)ESBLs株。

質(zhì)控菌株

大腸埃希菌ATCC25922，金葡菌ATCC25923和銅綠假單胞菌ATCC27853均由衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心提供。

2結(jié)果

一般情況

在2300份成年人腦脊液標(biāo)本中，檢出陽(yáng)性數(shù)180份(%)，其中細(xì)菌144株(革蘭陽(yáng)性菌98株，革蘭陰性菌46株)，真菌26株，新型隱球菌22株，似酵母樣菌4株，結(jié)核分枝桿菌10株。神經(jīng)外科、感染科、神經(jīng)內(nèi)科等科室陽(yáng)性分離率較高(、)。

腦脊液分離菌的藥敏分析

用微量稀釋法測(cè)得的MIC值將結(jié)果判定為敏感、中介、耐藥三類(lèi)，MicroscanWalkaway40系統(tǒng)的藥敏結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)與美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所(CLSI/NCCLS)文件標(biāo)準(zhǔn)相一致。結(jié)果()顯示，從腦脊液中分離出的鮑曼/溶血不動(dòng)桿菌對(duì)亞胺培南、氨曲南的敏感性較好，耐藥率分別為0和%；對(duì)阿米卡星(耐藥率%)、復(fù)方磺胺甲口惡唑(%)、環(huán)丙沙星(%)、慶大霉素(%)、頭孢曲松(%)、頭孢噻肟(%)以及妥布霉素(%)的敏感性較差。所分離的7株大腸埃希菌中3株產(chǎn)ESBLs，對(duì)亞胺培南和哌拉西林/三唑巴坦的敏感性好，耐藥率均為0，對(duì)阿米卡星、頭孢西丁、妥布霉素的敏感性也較好。

在180份陽(yáng)性培養(yǎng)中革蘭陽(yáng)性菌98株，占%。顯示萬(wàn)古霉素依然保持對(duì)革蘭陽(yáng)性球菌較高的抗菌活性，敏感率達(dá)100%；利福平、慶大霉素、復(fù)方磺胺甲口惡唑、克林霉素對(duì)革蘭陽(yáng)性球菌也有較好的抗菌活性，革蘭陽(yáng)性球菌對(duì)青霉素高度耐藥。在98株陽(yáng)性菌中凝固酶陰性葡萄球菌有70株，占革蘭陽(yáng)性菌的%，均對(duì)苯唑西林高度耐藥，這與Huang等對(duì)14株細(xì)菌性腦膜炎患者腦脊液中分離出的凝固酶陰性葡萄球菌的藥敏結(jié)果基本相同［3］。70株凝固酶陰性葡萄球菌中表葡菌30株，25株表葡菌中有23株為MRSE，高達(dá)%。另外在98株陽(yáng)性菌中，鏈球菌屬為12株(%)，腸球菌屬6株(%)，青霉素和萬(wàn)古霉素對(duì)鏈球菌和腸球菌均有較好的抗菌活性［4］。

腦脊液標(biāo)本所分離的結(jié)核分枝桿菌

在2300份腦脊液標(biāo)本中共分離出結(jié)核分枝桿菌10株，占陽(yáng)性培養(yǎng)的%。

腦脊液標(biāo)本所分離的真菌

在2300份腦脊液標(biāo)本中共分離出真菌26株，其中新型隱球菌22株、熱帶念珠菌1株、另有4株似酵母樣真菌。

3討論

細(xì)菌性腦膜炎對(duì)人類(lèi)危害極大，所以早期診斷、早期及合理的治療非常重要，應(yīng)力爭(zhēng)在給予抗菌藥物前進(jìn)行腦脊液的涂片革蘭染色檢查、腦脊液培養(yǎng)以及血培養(yǎng)；有皮膚瘀斑者取局部瘀斑作涂片檢查細(xì)菌。培養(yǎng)獲陽(yáng)性結(jié)果后做藥敏試驗(yàn)。盡早開(kāi)始抗菌藥物的經(jīng)驗(yàn)治療對(duì)搶救患者生命至關(guān)重要。醫(yī)師在獲知細(xì)菌培養(yǎng)和藥敏試驗(yàn)結(jié)果后，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)治療療效和藥敏試驗(yàn)結(jié)果調(diào)整用藥。如病原診斷明確，應(yīng)酌情調(diào)整抗生素品種，其劑量、療程要足夠，選用能透過(guò)血腦屏障的殺菌藥如青霉素、第二、三代頭孢菌素等［2］。由于腦脊液細(xì)菌數(shù)量少，某些細(xì)菌如腦膜炎雙球菌對(duì)外界環(huán)境抵抗力低，標(biāo)本采集和送檢過(guò)程中難以保證細(xì)菌存活。因此為提高腦脊液細(xì)菌的陽(yáng)性檢出率應(yīng)做到采集標(biāo)本盡可能在使用抗菌藥物之前，及時(shí)送檢并接種，并防止干燥和避免日光直射，天氣寒冷時(shí)做好保溫工作，如有可能最好在病床旁接種標(biāo)本［5，6］。

本研究中引起社區(qū)獲得性腦膜炎的病原菌中腦膜炎奈瑟菌僅2株，肺炎鏈球菌2株，金葡菌4株，未分離出流感嗜血菌；在常引起院內(nèi)獲得性感染的病原菌中，凝固酶陰性葡萄球菌有70株，腸桿菌科細(xì)菌14株，不動(dòng)桿菌屬細(xì)菌20株，與Hussein［7］和Celal［8］等的結(jié)果有所不同，這與患者來(lái)源有很大關(guān)系。本院患者多由基層醫(yī)院轉(zhuǎn)送，大多有較嚴(yán)重影響機(jī)體防御功能的基礎(chǔ)疾病，加上免疫抑制劑和腎上腺皮質(zhì)激素的使用，抗感染免疫功能受損而使致病菌更易入侵，另有占送檢數(shù)%的神經(jīng)外科患者多有顱腦侵入性操作，故本研究細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性腦膜炎患者多為院內(nèi)感染，多數(shù)菌株有不同程度的耐藥性［9，10］。2300份標(biāo)本中革蘭陽(yáng)性球菌98株，其中以表葡菌為代表的凝固酶陰性葡萄球菌對(duì)青霉素敏感性很差，鏈球菌和腸球菌對(duì)青霉素敏感，萬(wàn)古霉素對(duì)革蘭陽(yáng)性球菌均有較高的抗菌活性，利福平、慶大霉素、復(fù)方磺胺甲口惡唑?qū)Ω锾m陽(yáng)性球菌也有較好的抗菌活性，提示當(dāng)葡萄球菌對(duì)苯唑西林耐藥時(shí)宜選用萬(wàn)古霉素或去甲萬(wàn)古霉素，酌情聯(lián)合利福平［2，11］；鏈球菌引起的細(xì)菌性腦膜炎常規(guī)使用青霉素或氨芐西林，當(dāng)對(duì)青霉素耐藥時(shí)，可選用第三代頭孢菌素或萬(wàn)古霉素［2］；腸球菌引起的細(xì)菌性腦膜炎常規(guī)大劑量使用青霉素或氨芐西林，當(dāng)對(duì)青霉素耐藥或患者對(duì)其過(guò)敏時(shí)可選用萬(wàn)古霉素等糖肽類(lèi)抗生素［4］。革蘭陰性菌46株，對(duì)頭孢噻肟和頭孢曲松的敏感性較差，常為多重耐藥菌株，亞胺培南、氨曲南對(duì)革蘭陰性菌則有較好的抗菌活性，由于細(xì)菌性腦膜炎患者使用亞胺培南易誘發(fā)抽搐等中樞神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)，不推薦用于細(xì)菌性腦膜炎患者，如臨床上確需使用，可選擇美羅培南［2］。腦脊液的細(xì)菌培養(yǎng)和藥敏試驗(yàn)結(jié)果是臨床醫(yī)師診斷和治療細(xì)菌性腦膜炎，合理選用抗生素，提高療效，避免抗生素濫用的重要依據(jù)。為降低醫(yī)院內(nèi)感染化膿性腦膜炎的發(fā)生率，應(yīng)積極治療患者原發(fā)疾病，盡量縮短住院時(shí)間，不濫用抗生素，加強(qiáng)醫(yī)院消毒管理，控制顱腦手術(shù)和腰穿的感染，改善患者的免疫功能，控制局部感染，對(duì)老年人和兒童等免疫能力低下的患者應(yīng)該重點(diǎn)監(jiān)測(cè)，以減少感染的機(jī)會(huì)。

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