微生物常用染色法

關(guān)于微生物常用染色法第1頁，講稿共23頁，2023年5月2日，星期三細(xì)菌染色的一般程序涂片(干燥)---固定---染色---脫色---復(fù)染第2頁，講稿共23頁，2023年5月2日，星期三涂片制備血液,分泌物,排泄物,穿刺液和液體培養(yǎng)物,直接在載玻上作薄涂片.固體培養(yǎng)基上的菌落或菌苔的制片,用接種環(huán)取1環(huán)9g/L氯化鈉溶液置載玻片中央.再用無菌接種環(huán)取少量的培養(yǎng)物在氯化鈉溶液中磨勻,涂成人1CM*1CM大小的涂面.置室溫下自然干燥或火慢慢烘干.第3頁，講稿共23頁，2023年5月2日，星期三固定目的是殺菌.凝固細(xì)菌蛋白及結(jié)構(gòu),便于染色.避免在水洗過程中被水沖掉.通常用火焰加熱固定,將涂片在火焰中迅速通過3次,以手背皮膚接觸玻片不燙為佳.第4頁，講稿共23頁，2023年5月2日，星期三染色根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康牟煌?選擇不同染色方法進(jìn)行染色.染色時滴加染色液以覆蓋涂面為佳，染色時間則隨時間而定第5頁，講稿共23頁，2023年5月2日，星期三媒染使染料固定于被染物引起細(xì)胞膜通透性改變.常用明礬,鞣酸,金屬鹽和碘作為媒染劑.也可用加熱法促進(jìn)著色.第6頁，講稿共23頁，2023年5月2日，星期三脫色使已著色的被染物脫去顏色.常用乙醇,丙酮等作為脫色劑.脫色劑可以查出細(xì)菌與染料結(jié)合的穩(wěn)定程度,作為鑒別染色用.第7頁，講稿共23頁，2023年5月2日，星期三復(fù)染復(fù)染液作為復(fù)染以便觀察,復(fù)染不宜太強(qiáng),以免掩蓋初染的顏色.第8頁，講稿共23頁，2023年5月2日，星期三常用染色法單染色法只用一種染料染色,常用呂氏美藍(lán),結(jié)晶紫和稀釋石碳酸復(fù)紅等.復(fù)染色法用兩種或以上的不同顏色的染料進(jìn)行染色，可將不同細(xì)菌或同一細(xì)菌的不同結(jié)構(gòu)染成不同顏色第9頁，講稿共23頁，2023年5月2日，星期三革蘭染色細(xì)菌涂片經(jīng)火焰固定,加結(jié)晶紫染液1min,清水沖去染液.加碘液媒染1min,水洗,甩干.用95%乙醇脫色,輕輕搖動約30S,至無紫色洗落為止,水洗,甩干.加稀釋石碳酸復(fù)紅或沙黃染液數(shù)滴進(jìn)行復(fù)染,約30S,水洗.干后顯微鏡下鏡檢觀察結(jié)果.革蘭陽性菌染成紫色,革蘭陰性為紅色.第10頁，講稿共23頁，2023年5月2日，星期三BASO革蘭染液第11頁，講稿共23頁，2023年5月2日，星期三抗酸染色萋__納抗酸染色法步驟:細(xì)菌涂片經(jīng)火焰固定,加石碳酸復(fù)紅溶液,加熱至有蒸氣出現(xiàn),切不可沸騰.染液因蒸發(fā)減少時,應(yīng)隨時補(bǔ)充,防止染液蒸干.持續(xù)5min,水洗,甩干.滴加3%鹽酸乙醇脫色,不時搖動玻片至紅色脫落為止,水洗,甩干.加呂氏美藍(lán)復(fù)染液數(shù)滴復(fù)染1min,水洗.干后置顯微鏡下鏡檢.

抗酸桿菌呈紅色,非抗酸桿菌呈藍(lán)色.第12頁，講稿共23頁，2023年5月2日，星期三BASO抗酸染液第13頁，講稿共23頁，2023年5月2日，星期三染色法原理單染色可選用任何一種堿性染料使細(xì)菌著色,觀察到不同細(xì)菌形態(tài)大小及排列的特征.第14頁，講稿共23頁，2023年5月2日，星期三染色法原理復(fù)合染色用兩種以上的染料染色,不同的細(xì)菌著色不同,不但通過形態(tài)及排列,可通過染色反應(yīng)性來鑒別細(xì)菌,稱為鑒別染色.常用有革蘭染色和抗酸染色.第15頁，講稿共23頁，2023年5月2日，星期三革蘭染色染色方法:先以結(jié)晶紫液初染,后以盧戈氏碘液媒染,使脫色的細(xì)菌顯紅色,為G-菌.末脫色細(xì)菌呈紫色為G+菌.第16頁，講稿共23頁，2023年5月2日，星期三涂片見G-桿菌，形似腸桿菌第17頁，講稿共23頁，2023年5月2日，星期三涂片見G+球菌，呈葡萄狀排列第18頁，講稿共23頁，2023年5月2日，星期三涂片見G+球菌，呈鏈狀排列第19頁，講稿共23頁，2023年5月2日，星期三染色原理:最廣泛接受觀點(diǎn)認(rèn)為與細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)及化學(xué)組成有關(guān).G+菌細(xì)菌壁結(jié)構(gòu)致密,肽聚糖層厚,脂質(zhì)含量少,形成結(jié)晶紫_碘復(fù)合物.脫色過程中,雖然溶解細(xì)菌壁脂質(zhì)成分形成小孔.脫水作用使細(xì)胞壁收縮又構(gòu)成屏障,阻止結(jié)晶紫—碘復(fù)合物被乙醇溶出,細(xì)菌保持紫色.G-菌細(xì)菌壁疏松,肽聚糖層較薄,脂質(zhì)含量高,乙醇溶解脂質(zhì),經(jīng)復(fù)染細(xì)菌呈紅色.第20頁，講稿共23頁，2023年5月2日，星期三應(yīng)用用革蘭氏染色將幾乎所有細(xì)菌分為G+和G-細(xì)菌兩部分.不同染色反應(yīng)細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)差異較大,致病性各有特點(diǎn),對不同抗生素的敏感性也有差別.在抗生素敏感試驗(yàn)中有直接的指導(dǎo)意義.第21頁，講稿共23頁，2023