薄層色譜熒光分光光度法測(cè)定黃連中小檗堿含量

薄層色譜熒光分光光度法測(cè)定黃連中小檗堿含量

摘要建立了薄層色譜-熒光分光光度法測(cè)定黃連中小檗堿的含量。以1%鹽酸甲醇為溶劑超聲提取，用苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-氨展開，甲醇洗脫，調(diào)節(jié)pH值為12，在Ex＝365nm，Em＝409nm的條件下測(cè)定其熒光強(qiáng)度，線性范圍為～/ml，r＝，平均回收率為%。

關(guān)鍵詞：薄層色譜-熒光分光光度法；黃連；小檗堿

黃連為毛莨科植物黃連、三角葉黃連或云連的干燥根莖。其主要生物活性成分為小檗堿。本文采用薄層色譜-熒光分光光度法測(cè)定黃連藥材中小檗堿的含量。

1儀器與試藥

儀器RF-540型熒光分光光度儀，CS-930雙波長(zhǎng)薄層掃描儀。

試藥鹽酸小檗堿對(duì)照品；黃連藥材。

2方法與結(jié)果

對(duì)照品溶液的制備精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加入甲醇制成1mg/ml貯備液。用前取貯備液適量用甲醇稀釋成20μg/ml的對(duì)照品溶液。

薄層色譜條件〔1，2〕以苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-氨為展開劑，展開前用氨水飽和15min，展距為13cm，晾干后置紫外燈下檢視，小檗堿呈現(xiàn)黃綠色熒光斑點(diǎn)。

熒光測(cè)定條件的選擇

條件的選擇取對(duì)照品溶液，加入不同體積的1mol/L氫氧化鈉溶液，在Ex＝365nm，Em＝409nm處測(cè)定鹽酸小檗堿的熒光強(qiáng)度。結(jié)果顯示20mmol/L氫氧化鈉溶液熒光強(qiáng)度最大。

表1氫氧化鈉濃度對(duì)小檗堿熒光強(qiáng)度的影響

氫氧化鈉小檗堿熒光強(qiáng)度

熒光光譜的繪制取對(duì)照品溶液用甲醇稀釋成約100ng/ml，進(jìn)行熒光強(qiáng)度掃描測(cè)定，從掃描圖譜得到小檗堿最大激發(fā)波長(zhǎng)365nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為409nm。

線性關(guān)系及精密度試驗(yàn)取對(duì)照品溶液2，8，12，16，20μl分別點(diǎn)于同一薄層板上，依法展開、洗脫，將洗脫液依次移入試管內(nèi)，精密加入甲醇2ml，1mol/L氫氧化鈉溶液75μl，搖勻后測(cè)定熒光強(qiáng)度。結(jié)果表明，小檗堿在～/ml范圍內(nèi)與熒光強(qiáng)度有良好的線性關(guān)系，線性方程為F＝＋，r＝。采用外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算樣品中小檗堿的含量。精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，同板誤差RSD＝%，板間誤差RSD＝%。

樣品含量測(cè)定取黃連藥材粉末約，精密稱定，加1%鹽酸甲醇溶液約150ml，60℃水浴加熱15min，超聲30min，加甲醇稀釋至200ml，搖勻，靜置后取上清液作為供試品溶液。精密吸取對(duì)照溶液4，8μl及黃連提取液2μl點(diǎn)于同一硅膠G板上，展開，將板上相應(yīng)斑點(diǎn)刮入離心管中，加入甲醇1ml，振搖約15min，超聲20min，離心10min，吸取上清液于試管內(nèi)，加入甲醇2ml和1mol/L氫氧化鈉溶液75μl，搖勻，測(cè)定熒光強(qiáng)度，結(jié)果3批黃連藥材中小檗堿平均含量為%。

回收率試驗(yàn)取已知小檗堿含量的黃連藥材5份，精密稱定，加入與小檗堿含量相當(dāng)?shù)膶?duì)照品溶液，溶劑揮干后，依項(xiàng)下操作，測(cè)定小檗堿的含量。結(jié)果表明平均回收率為%，RSD＝%。

3討論

文中采用的薄層展開條件優(yōu)于文獻(xiàn)報(bào)道方法，靈敏度高，選擇性好，能夠?qū)⑿￠迚A與其他成分有效分離，且斑點(diǎn)圓整，無拖尾現(xiàn)象。適用于小檗堿的痕量分析及復(fù)方制劑中小檗堿的含量分析。

參考文獻(xiàn)

〔1〕中國(guó)藥典中藥薄層色譜彩色圖集.1993：70

〔2〕中國(guó)藥典2000年版.一部.2000：251