17β雌二醇對人橈動(dòng)脈舒張作用的體外實(shí)驗(yàn)

17β雌二醇對人橈動(dòng)脈舒張作用的體外實(shí)驗(yàn)

作者：蘇海川，趙玉紅，韋耿澤，陳軍，李陜區(qū)

【摘要】目的：研究17β雌二醇對人橈動(dòng)脈(RA)的舒張作用及其機(jī)制.方法：采用離體血管灌流的方法，觀察E2對人RA的舒張作用以及NO合成酶抑制劑左旋硝基精氨酸甲酯(NωnitroLargininemethylester,LNAME)，8BrcGMP和鳥苷酸環(huán)化酶抑制劑美藍(lán)(MB)對這一過程的影響.結(jié)果：觀察到E2(~100μmol/L)可劑量依賴性地舒張血管且具有內(nèi)皮依賴性；8BrcGMP(~1×103μmol/L)也可引起劑量依賴性的血管舒張效應(yīng).10μmol/LMB使E2舒張人RA的作用完全消失.10μmol/LLNAME能部分抑制E2舒張TA的作用.結(jié)論：E2對RA的急性舒張作用具有內(nèi)皮依賴性.此作用是E2通過非基因組方式使血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌NO、進(jìn)而可能引起血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)的cGMP水平升高實(shí)現(xiàn)的.

【關(guān)鍵詞】雌二醇；橈動(dòng)脈；一氧化氮；環(huán)GMP

0引言

絕經(jīng)前婦女心血管疾病發(fā)病率明顯低于同齡男性和絕經(jīng)后婦女，說明雌激素具有很強(qiáng)的心血管保護(hù)作用［1］.動(dòng)物研究表明，雌激素能夠通過非基因組途徑快速舒張血管，雌激素的快速舒血管作用可能是雌激素促進(jìn)了血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放NO，進(jìn)而抑制平滑肌細(xì)胞的收縮［2］.有報(bào)道，雌激素可以直接抑制血管平滑肌細(xì)胞的收縮作用，產(chǎn)生舒血管作用［3］.然而，雌激素作用于血管的確切機(jī)制還未完全清楚，雌激素對人動(dòng)脈的作用及其機(jī)制也少見報(bào)道.我們采用離體灌流人橈動(dòng)脈環(huán)，觀察雌激素對保留內(nèi)皮和去內(nèi)皮血管的急性舒張作用，并進(jìn)一步研究這種舒張血管的作用機(jī)制.

1材料和方法

材料人橈動(dòng)脈由西京醫(yī)院心血管外科取材自10例行冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)的男性患者，年齡45～65(55±8)歲.17β雌二醇、左旋硝基精氨酸甲酯(NωnitroLargininemethylester,LNAME)、美藍(lán)、8BrcGMP、去甲腎上腺素.RM6280多道智能生理記錄及分析處理系統(tǒng).

方法

主要藥物配制17β雌二醇用DMSO配制成10mmol/L的原液，實(shí)驗(yàn)前用Krebs液稀釋成工作液.LNAME,MB用去離子水配成10mol/L原液，實(shí)驗(yàn)時(shí)加入Krebs液，工作濃度為10μmol/L.8BrcGMP直接用Krebs液配成工作液.Krebs液成分：NaCl118,KCl,CaCl2,KH2PO4,MgSO4,NaHCO325,葡萄糖10，充以含950mL/LO2和50mL/LCO2的混合氣，用HCl調(diào)pH至～

離體血管環(huán)灌流將游離的RA放入到預(yù)冷、充以含950mL/LO2和50mL/LCO2Krebs液中，仔細(xì)去除血管上的脂肪及結(jié)締組織，將動(dòng)脈剪成2～3mm的小段，然后將血管環(huán)套在不銹鋼小鉤上，放入37℃,充以含950mL/LO2和50mL/LCO2的Krebs液中，并連接在張力傳感器上.給血管環(huán)加g的前負(fù)荷，在Krebs液中平衡至少120min以上，在此過程中，孵育血管環(huán)的液體每15min換1次，并使前負(fù)荷維持在g.加入10μmol/L的NE檢測標(biāo)本活性，然后沖洗使血管張力恢復(fù)到基線.穩(wěn)定30min后重復(fù)給予NE，待血管收縮達(dá)到穩(wěn)定值時(shí)逐步增加E2的濃度.去內(nèi)皮采用細(xì)鋼絲插入血管腔中滾動(dòng)完成.用10μmol/L的乙酰膽堿對血管環(huán)是否有舒張反應(yīng)作為判斷血管內(nèi)皮是否完整的標(biāo)準(zhǔn).

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：血管環(huán)的例數(shù)n等于提供血管的患者數(shù).以NE對血管環(huán)收縮的最大效應(yīng)為100%.制作累積濃度舒張反應(yīng)曲線，求出最大舒張反應(yīng)值和血管最大舒張的半數(shù)有效濃度.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用組間t檢驗(yàn)，為差異顯著.

2結(jié)果

對人橈動(dòng)脈的作用人橈動(dòng)脈血管環(huán)用1μmol/L的NE產(chǎn)生張力，待穩(wěn)定后加入E2(～100μmol/L).數(shù)據(jù)用1μmol/LNE預(yù)收縮的血管舒張到未加藥前的百分?jǐn)?shù)表示.NE使保留內(nèi)皮或去內(nèi)皮的HIMA收縮后，E2可引起劑量依賴性的舒張效應(yīng)，且具有內(nèi)皮依賴性(圖1).

圖1E2對人橈動(dòng)脈舒張的量效關(guān)系

BrcGMP對人橈動(dòng)脈的作用人橈動(dòng)脈血管環(huán)用1μmol/LNE產(chǎn)生張力，待穩(wěn)定后，加入8BrcGMP(～1000μmol/L).數(shù)據(jù)用1μmol/LNE預(yù)收縮的血管舒張到未加藥前的百分?jǐn)?shù)表示.NE使RA收縮后，8BrcGMP可引起劑量依賴性的舒張效應(yīng)(圖2)，8BrcGMP的濃度為1000μmol/L時(shí)，Rmax=(90±8)%，EC50=-±(log10mol/L).

圖28BrcGMP對人橈動(dòng)脈舒張的量效關(guān)系

NAME對E2舒張人橈動(dòng)脈的影響人乳內(nèi)動(dòng)脈血管環(huán)用1μmol/LNE產(chǎn)生張力，待穩(wěn)定后加入E2(1×10-4～1μmol/L).一些血管環(huán)在加入E2之前20min用LNAME(10μmol/L)預(yù)處理，數(shù)據(jù)用1μmol/LNE預(yù)收縮的血管舒張到未加藥前的百分?jǐn)?shù)表示.LNAME可以使E2舒張RA的作用完全消失(圖3).

圖3LNAME和MB對E2舒張人乳內(nèi)動(dòng)脈效應(yīng)的影響

對E2舒張人橈動(dòng)脈的影響人乳內(nèi)動(dòng)脈血管環(huán)用1μmol/LNE產(chǎn)生張力，待穩(wěn)定后加入E2(1×10-4～1μmol/L).一些血管環(huán)在加入E2之前20min用MB(10μmol/L)預(yù)處理，數(shù)據(jù)用1μmol/LNE預(yù)收縮的血管舒張到未加藥前的百分?jǐn)?shù)表示.10μmol/L的MB可以使VNP舒張HIMA的作用完全消失.

3討論

E2的急性舒血管作用為非基因組機(jī)制，雌激素受體α和β都可能參與其中，以往報(bào)道，其效應(yīng)呈內(nèi)皮依賴性和內(nèi)皮非依賴性，NO在雌激素的舒血管作用中起關(guān)鍵的作用［4-5］.NO分泌后可以激活血管平滑肌細(xì)胞中的GC，使細(xì)胞內(nèi)cGMP濃度升高，進(jìn)一步激活PKG，產(chǎn)生舒血管作用［6］.這些研究是以動(dòng)物為研究對象得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，而E2對人橈動(dòng)脈的作用還少見報(bào)道.本實(shí)驗(yàn)采用冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)使用的橈動(dòng)脈來觀察E2對其的作用.

作者：蘇海川，趙玉紅，韋耿澤，陳軍，李陜區(qū)

【摘要】目的：研究17β雌二醇對人橈動(dòng)脈(RA)的舒張作用及其機(jī)制.方法：采用離體血管灌流的方法，觀察E2對人RA的舒張作用以及NO合成酶抑制劑左旋硝基精氨酸甲酯(NωnitroLargininemethylester,LNAME)，8BrcGMP和鳥苷酸環(huán)化酶抑制劑美藍(lán)(MB)對這一過程的影響.結(jié)果：觀察到E2(~100μmol/L)可劑量依賴性地舒張血管且具有內(nèi)皮依賴性；8BrcGMP(~1×103μmol/L)也可引起劑量依賴性的血管舒張效應(yīng).10μmol/LMB使E2舒張人RA的作用完全消失.10μmol/LLNAME能部分抑制E2舒張TA的作用.結(jié)論：E2對RA的急性舒張作用具有內(nèi)皮依賴性.此作用是E2通過非基因組方式使血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌NO、進(jìn)而可能引起血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)的cGMP水平升高實(shí)現(xiàn)的.

【關(guān)鍵詞】雌二醇；橈動(dòng)脈；一氧化氮；環(huán)GMP

0引言

絕經(jīng)前婦女心血管疾病發(fā)病率明顯低于同齡男性和絕經(jīng)后婦女，說明雌激素具有很強(qiáng)的心血管保護(hù)作用［1］.動(dòng)物研究表明，雌激素能夠通過非基因組途徑快速舒張血管，雌激素的快速舒血管作用可能是雌激素促進(jìn)了血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放NO，進(jìn)而抑制平滑肌細(xì)胞的收縮［2］.有報(bào)道，雌激素可以直接抑制血管平滑肌細(xì)胞的收縮作用，產(chǎn)生舒血管作用［3］.然而，雌激素作用于血管的確切機(jī)制還未完全清楚，雌激素對人動(dòng)脈的作用及其機(jī)制也少見報(bào)道.我們采用離體灌流人橈動(dòng)脈環(huán)，觀察雌激素對保留內(nèi)皮和去內(nèi)皮血管的急性舒張作用，并進(jìn)一步研究這種舒張血管的作用機(jī)制.

1材料和方法

材料人橈動(dòng)脈由西京醫(yī)院心血管外科取材自10例行冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)的男性患者，年齡45～65(55±8)歲.17β雌二醇、左旋硝基精氨酸甲酯(NωnitroLargininemethylester,LNAME)、美藍(lán)、8BrcGMP、去甲腎上腺素.RM6280多道智能生理記錄及分析處理系統(tǒng).

方法

主要藥物配制17β雌二醇用DMSO配制成10mmol/L的原液，實(shí)驗(yàn)前用Krebs液稀釋成工作液.LNAME,MB用去離子水配成10mol/L原液，實(shí)驗(yàn)時(shí)加入Krebs液，工作濃度為10μmol/L.8BrcGMP直接用Krebs液配成工作液.Krebs液成分：NaCl118,KCl,CaCl2,KH2PO4,MgSO4,NaHCO325,葡萄糖10，充以含950mL/LO2和50mL/LCO2的混合氣，用HCl調(diào)pH至～

離體血管環(huán)灌流將游離的RA放入到預(yù)冷、充以含950mL/LO2和50mL/LCO2Krebs液中，仔細(xì)去除血管上的脂肪及結(jié)締組織，將動(dòng)脈剪成2～3mm的小段，然后將血管環(huán)套在不銹鋼小鉤上，放入37℃,充以含950mL/LO2和50mL/LCO2的Krebs液中，并連接在張力傳感器上.給血管環(huán)加g的前負(fù)荷，在Krebs液中平衡至少120min以上，在此過程中，孵育血管環(huán)的液體每15min換1次，并使前負(fù)荷維持在g.加入10μmol/L的NE檢測標(biāo)本活性，然后沖洗使血管張力恢復(fù)到基線.穩(wěn)定30min后重復(fù)給予NE，待血管收縮達(dá)到穩(wěn)定值時(shí)逐步增加E2的濃度.去內(nèi)皮采用細(xì)鋼絲插入血管腔中滾動(dòng)完成.用10μmol/L的乙酰膽堿對血管環(huán)是否有舒張反應(yīng)作為判斷血管內(nèi)皮是否完整的標(biāo)準(zhǔn).

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：血管環(huán)的例數(shù)n等于提供血管的患者數(shù).以NE對血管環(huán)收縮的最大效應(yīng)為100%.制作累積濃度舒張反應(yīng)曲線，求出最大舒張反應(yīng)值和血管最大舒張的半數(shù)有效濃度.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用組間t檢驗(yàn)，為差異顯著.

2結(jié)果

對人橈動(dòng)脈的作用人橈動(dòng)脈血管環(huán)用1μmol/L的NE產(chǎn)生張力，待穩(wěn)定后加入E2(～100μmol/L).數(shù)據(jù)用1μmol/LNE預(yù)收縮的血管舒張到未加藥前的百分?jǐn)?shù)表示.NE使保留內(nèi)皮或去內(nèi)皮的HIMA收縮后，E2可引起劑量依賴性的舒張效應(yīng)，且具有內(nèi)皮依賴性(圖1).

圖1E2對人橈動(dòng)脈舒張的量效關(guān)系

BrcGMP對人橈動(dòng)脈的作用人橈動(dòng)脈血管環(huán)用1μmol/LNE產(chǎn)生張力，待穩(wěn)定后，加入8BrcGMP(～1000μmol/L).數(shù)據(jù)用1μmol/LNE預(yù)收縮的血管舒張到未加藥前的百分?jǐn)?shù)表示.NE使RA收縮后，8BrcGMP可引起劑量依賴性的舒張效應(yīng)(圖2)，8BrcGMP的濃度為1000μmol/L時(shí)，Rmax=(90±8)%，EC50=-±(log10mol/L).

圖28BrcGMP對人橈動(dòng)脈舒張的量效關(guān)系

NAME對E2舒張人橈動(dòng)脈的影響人乳內(nèi)動(dòng)脈血管環(huán)用1μmol/LNE產(chǎn)生張力，待穩(wěn)定后加入E2(1×10-4～1μmol/L).一些血管環(huán)在加入E2之前20min用LNAME(10μmol/L)預(yù)處理，數(shù)據(jù)用1μmol/LNE預(yù)收縮的血管舒張到未加藥前的百分?jǐn)?shù)表示.LNAME可以使E2舒張RA的作用完全消失(圖3).

圖3LNAME和MB對E2舒張人乳內(nèi)動(dòng)脈效應(yīng)的影響

對E2舒張人橈動(dòng)脈的影響人乳內(nèi)動(dòng)脈血管環(huán)用1μmol/LNE產(chǎn)生張力，待穩(wěn)定后加入E2(1×10-4～1μmol/L).一些血管環(huán)在加入E2之前20min用MB(10μmol/L)預(yù)處理，數(shù)據(jù)用1μmol/LNE預(yù)收縮的血管舒張到