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結(jié)核分枝桿菌檢驗(yàn)技術(shù)目的要求1.掌握結(jié)核分枝桿菌形態(tài)、抗酸染色的操作與結(jié)果報(bào)告方法。2熟悉結(jié)核分枝桿菌的培養(yǎng)特性和常用鑒定方法。、器材和試劑1.菌種結(jié)核分枝桿菌。2.培養(yǎng)基改良羅氏培養(yǎng)基。3.試劑抗酸染色液、消佳凈消毒液4.其他肺結(jié)核患者痰標(biāo)本,載玻片,顯微鏡,香柏油,酒精燈,接種環(huán),火柴等三、步驟和方法標(biāo)本接種冷1)標(biāo)本處理酸處理法:取痰標(biāo)本1~2m于無(wú)菌試管內(nèi),加2%H2SO4溶液2~4倍量混勻后置室溫放置30min,在此期間震蕩痰液2~3次,使痰液化,離心取沉淀物接種。堿處理法:取痰標(biāo)本1~2m于無(wú)菌試管內(nèi),加入40g/NaOH溶液2~4倍量后置37°c孵育箱放置30min,期間震蕩痰液2~3次,使痰液化,離心取沉淀物接種。接種與培養(yǎng):取消化后的痰液0.1m均勻接種于羅氏培養(yǎng)基斜面上,每份標(biāo)本接種2支培養(yǎng)基,將試管150角斜置,370C孵箱培養(yǎng)1周后將培養(yǎng)基直立于試管架上,繼續(xù)培養(yǎng)至8周。初次分離培養(yǎng)需要5%~10%c02。菌落觀察與結(jié)果報(bào)告:結(jié)核分枝桿菌在L—J培養(yǎng)基菌落為干燥粗糙、顆粒狀、乳白色或米黃色、凸起、形似菜花心或粟米粒。于接種1周內(nèi)觀察2次,以后每周觀察1次細(xì)菌生長(zhǎng)情況,注意菌落形態(tài)、數(shù)量、色澤變化和出現(xiàn)菌落的時(shí)間等◆斜面上生長(zhǎng)的菌落在20個(gè)以下,應(yīng)報(bào)告菌落數(shù);若多于20個(gè)菌落數(shù)以“+”表示,具體報(bào)告見(jiàn)下:÷1+:斜面上生長(zhǎng)20個(gè)菌落以上,占斜面14以2+:斜面上菌落生長(zhǎng)面積占斜面14以上,1/2以下;3+:斜面上菌落生長(zhǎng)面積占斜面12以上,3/4以下;4+:斜面上菌落生長(zhǎng)密集成菌苔。形態(tài)觀察涂片直接涂片和厚膜涂片:用接種環(huán)挑取約0.01m膿性痰或干酪樣部分痰液,制成10mm×10mm大小的均勻薄涂片,或取上述標(biāo)本約0.1m,制成20mm×15mm大小的厚膜涂片。自然干燥,火焰固定后,行抗酸染色,用油鏡檢査。冷集菌涂片:冷①沉淀集菌法:取痰液2~3m,40gLNaOH1~2倍量混勻。經(jīng)高壓滅菌20min(

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